Toluidinblau-Färbung von peripheren Nervenabschnitten: Eine Technik zur Färbung myelinisierter Nervenfasern für die Visualisierung der peripheren Nervenstruktur

Zusammenfassung

Quelle: Ghnenis, A. B. et al., Toluidinblau-Färbung von in Harz eingebetteten Schnitten zur Bewertung der peripheren Nervenmorphologie.J. Vis. Exp.(2018)

Dieses Video demonstriert die Färbetechnik von in Harz eingebetteten, mit Osmiumtetroxid behandelten peripheren Nervenschnitten von Ratten mit Toluidinblau. Die gefärbten Nervenabschnitte helfen dabei, die feinen Strukturen der peripheren Nerven sichtbar zu machen.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Färbung von Toluidinblau

1. Bereiten Sie eine 1%ige Lösung von Toluidinblau vor, indem Sie 2 g Natriumborat in 100 ml entionisiertem Wasser auflösen, dann 1 g Toluidinblau hinzufügen und rühren, bis es sich aufgelöst hat. Die Lösung mit Filterpapier (Porengröße: 11 μm) filtrieren und in einer undurchsichtigen Flasche bis zu zwei Wochen bei Raumtemperatur aufbewahren.
2. Mit einer Plastikpipette oder Mikropipette einen Tropfen Toluidinblau-Lösung auf die Nervenabschnitte geben und 20-30 s einwirken lassen.
3. Spülen Sie alle überschüssigen Toluidinblau-Lösungen ab, indem Sie die Objektträger vorsichtig in ein deionisiertes Wassergefäß tauchen und 3-4 Mal wiederholen, bis die Abschnitte klar sind. Trocknen Sie die Objektträger mindestens 15 min bei 60 °C oder über Nacht bei Raumtemperatur und decken Sie die Abschnitte anschließend mit einem Deckglas mit handelsüblichem Eindeckmedium ab. Untersuchen Sie die gerahmten Objektträger sofort oder lagern Sie sie bei Raumtemperatur.
4. Unter einem Lichtmikroskop untersuchen. Für detaillierte Bilder, die zur Berechnung der g-Verhältnisse verwendet werden, wird eine 100-fache Ölimmersionslinse empfohlen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Toluidin Blau O	Sigma-Aldrich	Nr. T3260
Natriumtetraborat-Decahydrat	Acros Organics	205950010
Mikroskop-Deckglas	Fisher Scientific	12545102
VWR Micro Slides, Superfrost Plus	VWR	Tel.: 48311-703
100 Watt Backofen	Millipore	6350115
Whatman Filterpapier	Sigma-Aldrich	WHA10010155
Olympus Fluoreszenzmikroskop			Dual-CCD-Farb- und Monochromkamera, DP80
3 mL Kunststoffpipette	Sigma-Aldrich	Z331740