$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Färben und Schneiden von Gehirnen
- Entfernen Sie nach dem Experiment zum Verschluss der mittleren Hirnarterie das Gehirn einschließlich des Hirnstamms aus dem Schädel und waschen Sie es in eiskaltem PBS.
- Wählen Sie die richtige Größe der Edelstahlmatrix für das Gehirn (siehe Materialtabelle) in Abhängigkeit vom Gewicht der Tiere (Abbildung 1B). Platzieren Sie das Gehirn mit der Bauchseite nach oben in der Hirnmatrix.
Anmerkung: Wenn das Gehirn in der Matrix sitzt, muss die ventrale Oberfläche des Gehirns parallel zur Oberseite der Form sein.
- Schränken Sie mit Hilfe von Klingen die vorderen und kaudalen Teile (2 Klingen von beiden Seiten) des Gehirns ein.
Anmerkung: Es müssen Schneidematrix-kompatible Rasierklingen verwendet werden. Im Allgemeinen kann eine kompatible, einschneidige Rasierklinge (Dicke von bis zu 0,254 mm) für das Schneiden von Rattenhirn verwendet werden.
- Stecken Sie die Klingen teilweise (nicht vollständig in das Gehirn schneidend) in die Kanäle zwischen der ersten und der letzten Klinge. Wenn alle Klingen eingeführt und parallel angeordnet sind, drücken Sie alle Klingen gleichzeitig mit der Handfläche nach unten, um das Gehirn in 2 mm große Kronenscheiben zu schneiden.
- Fassen Sie die Klingen mit zwei Fingern fest an den Seiten entlang und entfernen Sie sie zusammen mit dem aufgeschnittenen Gehirn aus der Matrix.
- Ordnen Sie die Gehirnschnitte nacheinander in einer Schale (70 mL, 72 x 72 mm) an. Achten Sie beim Anordnen der Scheiben darauf, dass die vordere Oberfläche jeder Scheibe immer nach oben zeigt.
- Gießen Sie warme (+37 °C) 1%ige TTC-Lösung in PBS auf die Gehirnscheiben und inkubieren Sie sie 8 min bei 37 °C im Dunkeln.
Anmerkung: Die Hirnschnitte müssen während der Inkubation vollständig in TTC-Lösung getaucht werden.
- Übertragen Sie nach der Inkubation in 1%iger TTC-Lösung die Gehirnscheiben in die blaue Kunststoffschale, um Bilder aufzunehmen. Ordnen Sie die Hirnschnitte in sequenzieller Reihenfolge vom frontalen zum kaudalen Teil an und trennen Sie mit einem Skalpell die Hemisphären in der Sagittalebene.
