Papanicolaou-Färbung: Eine Technik zur Visualisierung der zytologischen Merkmale von Eileiterzellen

Zusammenfassung

Quelle: Chen, H. et al. Tubenzytologie des Eileiters als vielversprechendes Instrument zur Früherkennung von Eierstockkrebs. J. Vis. Exp. (2017).

In diesem Video demonstrieren wir ein modifiziertes Protokoll der Papanicolaou-Färbung, um die Tubenzytologie zu untersuchen. Diese Technik kann verwendet werden, um die zytologischen Merkmale von malignen und nicht-malignen Eileiterepithelzellen sichtbar zu machen.

Protokoll

1. Modifiziertes Papanicolaou-Färbeprotokoll

1. Färben Sie die gewebeverschmierten Objektträger, indem Sie das automatisierte Verfahren zur nicht-gynäkologischen Färbung durchführen, wie in Tabelle 1.
   dargestellt HINWEIS: Die Färbemethode stellt eine Modifikation der Papanicolaou-Färbetechnik dar, die wir routinemäßig für nicht-gynäkologische Proben anwenden. Wir verwenden einen automatisierten Gewebeprozessor, um einige Objektträger zu färben. Wir haben uns in dieser Studie für das nicht-gynäkologische Färbeverfahren gegenüber dem Gynäkologie-Färbeverfahren entschieden. Das verwendete Eosin ist EA-65 anstelle des EA-50, das für gynäkologische Proben verwendet wird (Pap-Abstrich-Probe). Darüber hinaus ist OG-6 im Gynäkologie-Färbeverfahren, das hauptsächlich für die Plattenepithelfärbung vorgesehen ist, nicht in das Färbeverfahren einbezogen, da in dieser Studie keine Plattenepithelzellen zu erwarten sind. EA65 (Eosin Azure) ist eine Gegenfärbelösung, die aus 3 Farbstoffen besteht: Eosin Y, Fast Green FCF und Bismarck Brown Y. Die Vorgehensweise ist in Tabelle 1 dargestellt.
2. Führen Sie ein manuelles Schnell-Pap-Färbeverfahren wie folgt durch:
   1. Tauchen Sie den mit dem Gewebe verschmierten Objektträger 10 Mal in 95%iges Ethanol, wobei jeder Tauchgang etwa 1 s dauert.
   2. Tauchen Sie den Objektträger 10 Mal in H₂O, wobei jeder Tauchgang etwa 1 s dauert.
   3. Lassen Sie den Objektträger für 10 - 60 s in Hämatoxylin austreten.
   4. Tauchen Sie den Objektträger 10 Mal in H₂O, wobei jeder Tauchgang etwa 1 s dauert.
   5. Tauchen Sie den Objektträger 10 Mal in 95% Ethanol, wobei jeder Tauchgang etwa 1 s dauert.
   6. Schieben Sie die Rutsche in EA65 für 1 - 3 Min.
   7. Tauchen Sie den Objektträger 10 Mal in H₂O, wobei jeder Tauchgang etwa 1 s dauert.
   8. Tauchen Sie den Objektträger 10 Mal in 95% Ethanol, wobei jeder Tauchgang etwa 1 s dauert.
   9. Tauchen Sie den Objektträger in Xylol, bis der Objektträger klar wird.
      HINWEIS: Hierbei handelt es sich um ein modifiziertes Papanicolaou-Färbeverfahren. Diese Methode wird als schnellere Färbemethode für Fälle mit begrenzter Zeit oder begrenztem Platz verwendet, wie z. B. die Feinnadelaspiration vor Ort und STAT-Proben. Dieses Verfahren bietet eine vergleichbare Qualität der Färbung wie das automatisierte Non-Gyn-Färbungsverfahren. Das Vorgehen ist in Tabelle 2 dargestellt.

Tabelle 1: Schritte für nicht-gynäkologische Flecken.

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95% Ethanol	5 Minuten
H2O	10 Sek
Hämatoxylin	15 Sek. - 3 Min.
Destilliertes H2O	5 Minuten
95% Ethanol	30 Sek.
GAU65	2 - 5 Minuten
95% Ethanol	30 Sek.
95% Ethanol	30 Sek.
100% Ethanol	30 Sek.
100% Ethanol	30 Sek.
Xylol	30 Sek.
Xylol	5 Minuten

Tabelle 2: Manuelle, schnelle Schritte zum Färben von Pap.

95% Ethanol	10 Einbrüche
H2O	10 Einbrüche
Hämatoxylin	10 Sek.-1 Min.
Destilliertes H2O	10 Einbrüche
95% Ethanol	10 Einbrüche
GAU65	1 - 3 Minuten
95% Ethanol	10 Einbrüche
100% Ethanol	10 Einbrüche
Xylol	Tauchen, bis es klar ist

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Papanicolaou Beize, EA 65	Sigma Aldrich	HT40432
95% Ethanol	Sigma Aldrich	652261
100% Ethanol	Sigma Aldrich	493538
Xylol	Sigma Aldrich	214736
Hämatoxylin	Sigma Aldrich	Nr. H9627