Masson Goldner Trichrome-Färbung: Eine Technik zur Visualisierung von Kollagen in Herzschnitten zum Nachweis von kardiovaskulärer Fibrose

Zusammenfassung

Quelle: Valentin, J., et al. Histologische Quantifizierung des chronischen Myokardinfarkts bei Ratten. J. Vis. exp.(2016).

Dieses Video zeigt die differentielle Färbung von Kollagenfasern, Zellkernen und Zytoplasma im Herzgewebe, um fibrotisches Wachstum im Zusammenhang mit Herzerkrankungen zu visualisieren.

Protokoll

1. Masson-Goldner-Trichrom-Färbung

1. Gewebeschnitte aus paraffineingebetteten Herzblöcken mit einem manuellen Mikrotom (Dicke: 5 μm) anfertigen.
Für
2. jede Ratte wird ein Objektträger von jedem Herzteil (3 - 4 Querschnitte pro Objektträger) mit Masson-Goldner-Trichromfärbung gebeizt.
   1. Die Objektträger bei 60 °C im Ofen schmelzen. Unter einem Abzug entparaffinieren Sie sie zweimal für jeweils 10 min in Xylol. Rehydrieren Sie sie jeweils 3 Minuten lang in 100 % Ethanol, 95 % Ethanol, 70 % Ethanol und destilliertem Wasser.
   2. Fixieren Sie sie über Nacht in Bouin-Lösung. Spülen Sie sie dann 10 - 15 Minuten lang unter fließendem Leitungswasser ab. Spülen Sie sie in destilliertem Wasser ab. Inkubieren Sie sie 3 Minuten lang in Mayer's Hämatoxylin.
   3. Nehmen Sie die Objektträger heraus und lassen Sie sie 5 Minuten in destilliertem Wasser ruhen. Dann in saurem Fuchsin-Ponceau 5 min inkubieren. Spülen Sie sie 1 min lang in 1%iger Essigsäure.
   4. Inkubieren Sie sie anschließend 1 Minute lang in Phosphomolybdsäure Orange G. Spülen Sie sie 1 Minute lang in 1% Essigsäure, inkubieren Sie sie 10 Minuten lang in hellgrünem Farbstoff und spülen Sie sie 1 Minute lang in 1% Essigsäure.
   5. Dehydrieren Sie sie in 70 % Ethanol (30 Sekunden), 95 % Ethanol (30 Sekunden) und 100 % Ethanol (5 Minuten). Geben Sie einen Tropfen eines harzigen Eindeckmittels auf die Gewebeschnitte, bedecken Sie sie mit Deckgläsern und lassen Sie sie trocknen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Mayer Hämatoxylin	MHS32-1L	Sigma Aldrich
Säure Fuchsin CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Orange G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Hellgrün CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
Xylol	10315083	Honeywell
Ethanol absolut	10303990	Honeywell
Sterelogisches Mikroskop	SM2800	Nikon
Formaldehyd	Artikel-Nr.: 99340	Reactolab
Einbettende Kassette	Nr. K113.1	Carl Roth
Bersoft Software zur Bildvermessung		Bersoft.com	Lizenzierte Software