Doppelfärbemethode: Eine Technik zur Visualisierung von Pflanzen-Pilz-Wechselwirkungen unter Verwendung von Rutheniumrot und Lactophenol-Baumwollblau

Zusammenfassung

Quelle: Marques, J. P. R. und Nuevo, L. G. Doppelfärbemethode zum Nachweis von Pektin in der Pflanzen-Pilz-Interaktion. J. Vis. (2022).

Dieses Video zeigt eine Doppelfärbemethode mit Rutheniumrot und Lactophenol-Baumwollblau, um Pektine und Chitine während der Wechselwirkungen zwischen Pflanzen und Pilzen in einer Kaffeerostpflanze zu visualisieren. Das Verfahren hilft, die Abwehrmechanismen von Pflanzen bei Pilzinfektionen zu verstehen.

Protokoll

>1. Prozess der Doppelfärbung

1. Beginnen Sie mit ultradünnen, in Harz eingebetteten Blattabschnitten von Coffee arabica cv. Catuaí, die mit Kaffeerost infiziert sind. Decken Sie die Abschnitte mit 2 ml 5 % blauer Baumwolle in Lactophenol (40 % Glycerin, 20 % Phenol und 20 % Milchsäure in Wasser) ab und erhitzen Sie sie auf einer heißen Platte bei 45 °C für 5 min (Abbildung 1A).
2. Entfernen Sie den überschüssigen Farbstoff, indem Sie den Objektträger dreimal in einem mit destilliertem Wasser gefüllten Becherglas waschen (Abbildung 1B-D).
3. Mit 2 ml 0,01 % Rutheniumrot 1 min lang in Wasser färben (Abbildung 1E).
4. Entfernen Sie den überschüssigen Farbstoff, indem Sie den Objektträger dreimal in einem mit destilliertem Wasser gefüllten Becherglas waschen (Abbildung 1F,G).
5. Geben Sie einen Tropfen destilliertes Wasser über die Schnitte und bedecken Sie die Schnitte mit einem Deckglas von 24 mm x 60 mm für die lichtmikroskopische Analyse.

Ergebnisse

Abbildung 1: Details zu den einzelnen Schritten des Doppelfärbeprotokolls. (A) Die Schnitte mit Tropfen baumwollblauem Lactophenol abdecken und die Objektträger auf einer heißen Platte bei 45 °C erhitzen. (B-C) Den überschüssigen Farbstoff durch Waschen in destilliertem Wasser entfernen. (D) Schnitte auf den Objektträgern nach dem Waschen (gekennzeichnet durch Pfeile). (E...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Kochplatte	Dubesser	SSCD25X30-110V	Färbung
Baumwolle Blau Lactophenol	Metaquímica	Artikel-Nr.: 70SOLSIG024629	Färbung
Mikroskopie	Zeiss	#490040-0030-000	Bilderfassung
Becherschale aus Kunststoff	ems	Nr. 10176-30	Färbung
Ruthenium-Rot	LABHouse	#006004	Färbung
Software Axion Vision	Zeiss	#410130-0909-000	Bilderfassung