Kongorot-Färbung: Eine Technik zur Visualisierung von Zelluloseablagerungen in Pflanzenstängelschnitten

Zusammenfassung

Quelle: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Histochemische Färbung von sekundären Zellwandelementen von Arabidopsis thaliana. J. Vis. exp. (2014).

In diesem Video demonstrieren wir die Kongorot-Färbemethode zur Visualisierung von Zelluloseablagerungen in Arabidopsis thaliana-Stammabschnitten.

Protokoll

1. Kongorote Färbung

1. 0,5 g Kongorot in 100 ml destilliertem Wasser auflösen, um eine 0,5%ige Kongorotlösung herzustellen.
2. Übertragen Sie die Stielabschnitte in ein 2,0-ml-Mikrozentrifugenröhrchen. 1 ml der 0,5%igen Kongorotlösung in das Röhrchen geben. Die 0,5%ige kongorote Lösung vorsichtig auf und ab pipettieren, ohne die Schnitte zu stören.
   HINWEIS: Achten Sie darauf, die Schnitte nicht in die Pipettenspitze zu pipettieren, da dies die Schnitte beschädigen kann.
3. 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren und das Pipettieren wiederholen. Folgen Sie mit einer weiteren 3-minütigen Inkubation bei Raumtemperatur.
4. Mit einer 1-ml-Pipette 700 μl 0,5%ige Kongorotlösung herausziehen. Fügen Sie 700 μl destilliertes Wasser hinzu, um die Kongorot-Lösung auszuspülen. Wiederholen Sie den Waschgang 3-4x, bis die Waschlösung klar ist.
5. Verwenden Sie eine 1-ml-Pipette, deren Spitze so geschnitten ist, dass die Schnitte leicht und ohne Beschädigung herauspipettiert werden können. Pipettieren Sie die Schnitte vorsichtig in die Spitze und auf einen Objektträger und decken Sie sie mit Deckglas ab. Betrachten Sie die Proben auf dem Objektträger unter Blaulichtanregung mit einem Filter mit einem Bandpass von 560/40,
   HINWEIS: Lagern Sie die Schnitte vor der mikroskopischen Analyse nicht lange in Wasser, da das Wasser das Kongorot in 10-30 Minuten auswäscht.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Kongo-Rot	Sigma	Nr. C6277	Dinatrium-3,3'-[[1,1'-biphenyl]-4,4'-diylbis(azo)]bis(4-aminonaphthalin-1-sulfonat) [CAS-Nummer 573-58-0]
Mikrozentrifugenröhrchen (0,6 ml)	Axygen Scientific	MCT-060-C
Kamera mit CCD-Chip ohne mechanischen Verschluss	Hamamatsu	Nr. C4742-95
Hochgeschwindigkeits-Farbkamera	QImaging	MicroPublisher 5.0 RTV
Kamera-Software	Molekulare Bauelemente	MetaMorph Version 7.7.0.0
Imaginäre Analyse	Lehmziegel	Photoshop CS4
Micro Cover Brille, quadratisch, Nr. 1	VWR	Artikel-Nr.: 48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8") )-Deckgläser sind korrosionsbeständig und gleichmäßig dick und flach. Die Dicke Nr. 1 beträgt 0,13 bis 0,17 mm.
Mikro-Objektträger mattiert, 1 mm	VWR	Artikel-Nr.: 48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
TX2 Filterwürfel	Leica	11513851/11513885	Filter für die Kongorot-Analyse mit einem Bandpass von 560/40.