Method Article

Windowing Chicken Eggs für Developmental Studies

DOI:

10.3791/306

October 1st, 2007

In This Article

Summary

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Die leichte Zugänglichkeit des Embryos ist für Experimente erlaubt Zellanlagen verschiedene Möglichkeiten, einschließlich Küken Wachtel Chimären und Schwerpunkte Farbstoffmarkierung Karte. In diesem Artikel zeigen wir ein Ei Herstellungsmethode, die für längere Überlebenszeiten optimiert wurde.

Abstract

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Das Studium der Entwicklung wurde stark durch die Verwendung des Hühnerembryo als experimentelles Modell unterstützt. Die leichte Zugänglichkeit des Embryos ist für Experimente erlaubt Zellanlagen verschiedene Möglichkeiten, einschließlich Küken Wachtel Chimären und Schwerpunkte Farbstoffmarkierung Karte. Darüber hinaus ermöglicht es der molekularen Störungen von mehreren Arten, darunter Vermittlung von Protein-beschichteten Beads und Einführung von Plasmid-DNA mit in ovo Elektroporation. Diese Experimente haben wichtige Daten über die Entwicklung des zentralen und peripheren Nervensystems ergab. Für viele dieser Studien ist es notwendig, die Eierschale öffnen und wieder ohne Störung des Embryos Wachstum. Der Embryo kann in aufeinanderfolgenden Entwicklungsstadien durch erneutes Öffnen der Eischale untersucht werden. Es gibt zwar mehrere ausgezeichnete Methoden für die Öffnung der Hühnereier, die in diesem Artikel werden wir zeigen, eine Methode, die für lange Überlebenszeiten optimiert wurde. Bei dieser Methode liegt das Ei auf seiner Seite und ein kleines Fenster in die Schale geschnitten. Nach dem experimentellen Verfahren wird die Shell benutzt, um das Ei für die Dauer ihrer Entwicklung zu decken. Klare Plastikband über der Eierschale schützt den Embryo und halten die Feuchtigkeit während der Rest der Inkubationszeit. Diese Methode wurde Anfang an zwei Tagen der Inkubation eingesetzt und ermöglichte das Überleben durch ausgereifte embryonalen Alters.

Protocol

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1. Entfernen Sie Eier aus Inkubator

  1. Halten bei 37 ° C bei einer relativen Luftfeuchtigkeit von über 60% gesetzt.
  2. Entfernen Sie die Eier, Eier wiederum 90 °, so dass die große Basis horizontal liegt.

2. Swab Eier zu sterilisieren

  1. Tränken Sie einen Stapel von nicht-steriler Gaze mit 70% Ethanol.
  2. Verwenden Sie zwei vor drei Stücke Tupfer bis zu 5 Eier. Verwerfen, wenn die Gaze verschmutzt ist.

3. Vorbereitung Eiweiß Entnahmestelle

  1. Cut und setzen Sie eine 1 "x 1" Stück von 3M Kunststoffband nur von der Basis nach links, um den Bereich, wo die Albumin du....

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Discussion

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Diese Methode ermöglicht eine lange Überlebenszeit folgenden experimentellen Manipulationen. Zum Beispiel erlaubt Farbstoff-Kennzeichnung Studien Überleben E10 oder später in ein Schicksal, Mapping-Studie (1). Darüber hinaus hat es für in ovo Elektroporation Studien, die Veränderung der Genexpression und Entwicklung erforderlich, um zu späteren Entwicklungsstadien (2-6) weiter verfahren werden eingesetzt. Diese Fenstertechnik können in Kombination mit jedem Verfahren, das Überleben nach Manipulationen am Embryo braucht eingesetzt werden.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Rotierender Inkubator ProfiMaintain bei 37°; Grad mit einer relativen Luftfeuchtigkeit über 60%
70 % EtOH
Gaze
3M Kunststoffband
10cc Spritze 1/Ei
18G Nadeln 1½ Zoll Nadel, 1/Spritze
Präparierschere 4" scharfe gerade Klingen
Befruchtete Eier

References

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  1. Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
  2. Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
  3. Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
  4. Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
  5. Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
  6. Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
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Chicken Egg WindowingEgg PreparationEmbryo ManipulationAlbumin ExtractionShell SealingTape ApplicationDevelopmental StudiesIn Ovo ProceduresEgg HandlingEmbryo Survival

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