Method Article

Titel der Verkapselung von Zellen durch Tröpfchen

DOI:

10.3791/316

⸱

October 1st, 2007

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1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, 2Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 4Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

In This Article

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH3T3-Zellen der Zubereitung:

A. Zellen für Ejection

  1. Trypsinize Zellen, dann verdünnt 1:1 mit Zell-Medien und Übertragung von einem T75 Kolben in ein 15 ml Falcon-Röhrchen
  2. Spin down-Zellen zu einem Pellet durch Zentrifugation, Absaugen des Überstandes und waschen Sie die Zellen mit DPBS
  3. Spin down-Zellen zu einem Pellet erneut, und saugen Überstand
  4. Die Zellen in den Medien
  5. Bestimmen Sie die Zelldichte mit Zählkammer (~ 200 X 10 4 Zellen / ml pro Flasche T75)
  6. Zentrifugenzelle Lösung absaugen Überstand und resuspendieren in entsprechender Höhe von Medien für unterschiedliche Zell-Konzentrationen

B. Zell-Ausstoß

  1. Vortex-Zellen, bevor Sie zum Auswerfen
  2. Transfer-200 ul der Zell-Lösung in die Spritze
  3. Festlegen geeigneter Modus Impulsgeber
    1. Zum Auswerfen einzelner Tropfen und mehrere Tröpfchen (Bursts), setzen Impulsgeber zu "E. BUR"-Modus
    2. Für die kontinuierliche Tröpfchenausstoß setzen Impulsgeber auf "NORM"-Modus
  4. Ändern Signal-Einstellungen
    1. Set hohen und niedrigen Ausgangsspannung: HIL bis 5 V und LOL auf 0 V und sicherstellen, dass die "LIM" LED ist an
    2. Set-Signal als Rechteckimpuls
    3. Ändern Sie die Höhe der Zeit das Magnetventil ist offen für Tröpfchenausstoß indem Sie den Wert für "WID" oder Ändern Einschaltdauer ("Pflicht")
    4. Ändern Sie die Frequenz eines Rückschlags indem Sie den Wert für "PRO"
    5. Ändern Sie die Anzahl der Tropfen in einem Ausbruch, indem der Wert für "BUR" ausgeworfen
  5. Eject Zelle Lösung auf den vorbereiteten Untergrund für die Bildgebung mit Mikroskop

C. Färbung

  1. Make up Farbstofflösung mit 0,5 ul Calcein-AM und 2 ul Ethidium Homodimer pro ml DPBS
  2. Tauchen vorbereiteten Untergrund in Farbstofflösung
  3. Lassen Sie Probe für 10 Minuten bei 37 ° C inkubieren, bevor Bildgebung

Experiment Validation

  1. Auf einem Nikon Eclipse TE-2000 U Fluoreszenzmikroskop
    1. Spot fortschrittliche Software (Diagnostics, Inc.)
    2. Live / Dead Assay

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
FluoreszenzmikroskopNikon InstrumentsEclipse TE-2000 U
MagnetventilzellenauswerferBetriebsfrequenz: 1 KHz, 30psi, 50nl~0,5ul. 12V Ventiltreiber: 2,5 Ampere Antriebsstrom
5-Gallonen Tragbarer LufttankColemanPowermate CT5Druckluftdruck: 30 PSI
DruckreglerMarsh Bellofram
ImpulsgeneratorHP8112AErzeugung von Betätigungsfrequenzen: 50 MHz
XYZ-TischNewmark Systemsmit Schrittmotor: 6 Zoll Verfahrweg XY-Tisch (NLS4-6-25), 2,5 Zoll Verfahrweg Z-Tisch (NLS4-2,5-25), 3-Achsen-Controller (NSC-G3), 0,1 μm Auflösung
NIH 3T3Zelllinien-Fibroblasten
Trypsin0,05%ige Lösung
NIH 3T3 Zellmedium
DPBSBuffer
T75Gewebekulturflaschen
Konische Kunststoffröhrchen15 ml, für Gewebekulturen

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Tags

Cell EncapsulationDroplet PrintingCell PrintingSolenoid ValveMotorized StageCell DensityHemocytometerLive Dead AssayCalcium AMEthidium Homodimer

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