Protokolle für Vaginal Inokulation und Probenahme in der Experimental-Maus-Modell der Candida Vaginitis

Summary

Key-Techniken, um bei der Auswertung der verwendet werden Candida Vaginitis in einem experimentellen Tiermodell beschrieben sind. Die Methoden werden schnelle Sammlung von vaginalen Proben und Lymphozyten aus Trockenlegung lumbalen Lymphknoten zu ermöglichen. Diese Techniken könnten zu Mausmodellen von anderen Krankheiten in der weiblichen unteren Genitaltraktes geben.

Abstract

Vulvovaginalkandidose (VVC), durch Candida-Arten verursacht werden, ist eine Pilzinfektion der unteren weiblichen Genitaltrakt, dass ca. 75% der ansonsten gesunden Frauen betrifft während ihrer reproduktiven Jahre ^18,32-34. Prädisponierende Faktoren sind der Gebrauch von Antibiotika, unkontrollierte Diabetes und Störungen im Bereich der reproduktiven Hormone wegen Schwangerschaft, orale Kontrazeptiva oder Hormonersatztherapien ^33,34. Wiederkehrende VVC (RVVC), als drei oder mehr Episoden pro Jahr festgelegt, wirkt sich eine separate 5 bis 8% der Frauen ohne prädisponierende Faktoren ^33.

Ein experimentelles Mausmodell der VVC wurde eingerichtet und verwendet werden, um die Pathogenese und Schleimhaut-Host-Reaktion auf Candida ^{3,4,11,16,17,19,21,25,37} studieren. Dieses Modell wurde auch eingesetzt, um potentielle Antimykotika in vivo ^13,24 zu testen. Das Modell setzt voraus, dass die Tiere in einen Zustand der pseudoestrus für opt beibehalten werdenimal Candida-Besiedlung / Infektion ^6,14,23. Unter solchen Bedingungen wird geimpften Tieren nachweisbare vaginale Pilzinfektionen Belastung für Wochen bis Monate. Frühere Studien zeigen eine extrem hohe Parallelität zwischen dem Tiermodell und menschliche Infektion in Bezug auf immunologische und physiologische Eigenschaften ^3,16,21. Unterschiede, aber auch ein Mangel an Candida als normale Vaginalflora und eine neutrale vaginalen pH-Wert in den Mäusen.

Hier zeigen wir eine Reihe von wichtigen Methoden in der Maus Vaginitis Modell, das vaginale Impfung schnelle Sammlung von vaginalen Präparate, die Beurteilung der vaginalen Pilzinfektionen zu reduzieren und das Gewebe Vorbereitungen für zelluläre Extraktion / Trennung beinhalten. Dies wird durch repräsentative Ergebnisse für Bestandteile der vaginalen Lavage-, Pilz-Belastung und Lymphknoten Leukozyten Erträge gefolgt. Mit dem Einsatz von Anästhetika kann Lavage-Proben zu mehreren Zeitpunkten auf dem gleichen Mäuse für Längs-Auswertung gesammelt werdenInfektion / Kolonisation. Darüber hinaus erfordert dieses Modell keine Immunsuppressiva auf eine Infektion zu initiieren, so dass immunologische Untersuchungen unter definierten Bedingungen Host. Schließlich stellte das Modell und jede Technik könnte hier möglicherweise zu der Methoden verwenden, um andere Infektionskrankheiten der unteren weiblichen Genitaltrakt (bakterielle, parasitäre, virale) und den jeweiligen lokalen oder systemischen Immunabwehr zu untersuchen.

Protocol

1. Vaginal Inokulation mit Candida albicans

1. Drei Tage vor der Inokulation, während einstweilige das Tier auf den Bauch setzen, injizieren 100 ul Sesamöl mit 0,1-0,5 mg des β-Estradiol subkutan in den Unterleib. Schieben Sie die Nadel über 5 bis 10 mm seitlich an der Haut, um das Auslaufen aus der Injektionsstelle zu minimieren.
   Die subkutane Verabreichung von Östrogen in den Unterleib ist in diesem Modell aufgrund der Nähe zu den Genitaltrakt optimal. Effektive Dosen kann durch Mausstämme, Alters-oder Östrogen-Derivate variieren. In früheren Studien mit CBA-J (H-2 ^κ), C3H/HeN (H-2 ^κ), C57BL / 6 (H-2....

Discussion

Ein experimentelles Mausmodell für Candida Vaginitis wurde eingerichtet und historisch für den letzten Jahrzehnten zur Schleimhaut Host Reaktion auf Candida sowie Studien zur Prüfung von Antimykotika ^{3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37.} Die Protokolle hier vorgestellten integrieren effizienter und weniger arbeitsintensive Methoden und scheinen eine der optimierten Modell-Systeme von Candida Vaginitis bisher beschriebenen. Diese Techniken ermöglichen eine schnelle Quantifizierung von Pil.......

Materials

Name des Reagenzes	Firma	Katalog-Nummer	Kommentare
Weibliche CBA / J-Mäusen	Charles River Laboratories	01C38	5-6 Wochen alt
Candida albicans (3153A)	National Collection von pathogenen Pilzen, UK	NCPF3153
Sesamöl	Sigma-Aldrich	S3547	Braucht nicht vor dem Einsatz vor sterilisiert werden
Β-Estradiol 17-valerat	Sigma-Aldrich	E1631	0,1-0.5mg in Sesamöl
Phyton Pepton	Becton Dickinson	211906	Supplement mit 0,1% Glucose
Trypanblau-Lösung	Sigma-Aldrich	T8154
Sabouraud-Dextrose-Agar	Becton Dickinson	211584
Collagenase Typ IV	Sigma-Aldrich	C5138	0,25%
Dispase	Invitrogen	17105-041	1,7 U / ml
Maschendraht-Bildschirme	TWP	060X060S0065W36T	Nr. 60 mesh, Edelstahl
Hanks 'balanced salt solution	Invitrogen	24020-117
CytoPrep Fixativ	Fisher Scientific	12-570-10	Behält Abstrich Dias
Papanicolaou-Färbung EA-65	EMD Chemicals	7054X-85
Papanicolaou-Färbung OG-6	EMD Chemicals	7052X-85
Harris 'Hämatoxylin Alum	EMD Chemicals	638A-85
Isofluran	Baxter Healthcare	NDC 10019-773-60	Gebrauchte mit Isofluran Verdampfer oder in einem Drop-System geschlossen Betäubung Kammer