Kombination Strahlentherapie in einem orthotopen Maus Brain Tumor-Modell

Zusammenfassung

Der Zweck dieses Artikels ist es, die Verwendung einer orthotopen Glioblastom-Modell für die Radiochemotherapie Studien beschreiben. Dieser Artikel wird jedoch Zellprozessierung gehen, Implantieren, Strahlentherapie und der Maus mit Hilfe eines intrakraniellen Modell.

Zusammenfassung

Glioblastoma multiforme (GBM) ist die häufigste und aggressivste erwachsenen primären Hirntumoren ^ein. In den letzten Jahren hat es erhebliche Fortschritte im Verständnis von den Mechanismen der Tumorinvasion und direkter intrazerebraler Inokulation des Tumors bietet die Möglichkeit der Beobachtung der invasiven Verfahren in einem physiologisch geeigneten Umgebung ^2. Soweit menschlichen Hirntumoren betrifft, so sind die derzeit verfügbaren Modelle orthotopen entweder durch stereotaktische Injektion von Zellsuspensionen oder Implantation eines festen Tumors Stück durch ein kompliziertes Verfahren Kraniotomie ³ hergestellt. In unserer Technik ernten Zellen aus Gewebekulturen, um eine Zellsuspension verwendet, um direkt in das Gehirn implantiert zu schaffen. Die Dauer der Operation beträgt etwa 30 Minuten, und die Maus muss in einem konstanten chirurgischen Ebene liegen, eine injizierbare Anästhetika. Die Maus wird in einen stereotaktischen Bohrlehre von Stoetling (Abbildung 1) aus angeordnet. Achterner das Operationsgebiet wird gereinigt und vorbereitet, wird ein Einschnitt vorgenommen, und die Bregma befindet, um die Position der Kraniotomie bestimmen. Die Lage der Kraniotomie ist 2 mm nach rechts und 1 mm rostral zu Bregma. Die Tiefe von 3 mm von der Oberfläche des Schädels und die Zellen werden mit einer Rate von 2 ul alle 2 Minuten injiziert. Die Haut wird mit 5-0 PDS genäht, und die Maus darf aufwachen auf einem Heizkissen. Aus unserer Erfahrung, abhängig von der Zell-Linie, kann die Behandlung Platz 7 bis 10 Tagen nach der Operation. Drug Delivery ist abhängig von der Arzneimittel-Zusammensetzung. Für Bestrahlung die Mäuse sind anästhesiert, und in einem speziell angefertigten Vorrichtungsbau. Blei deckt der Maus Körpers und setzt nur das Gehirn der Maus. Das Studium der Tumorentstehung und die Evaluierung neuer Therapien für GBM erfordern genaue und reproduzierbare Hirntumor Tiermodellen. So verwenden wir diese orthotopen Gehirn Modell, um die Interaktion der Mikroumgebung des Gehirns und des Tumors zu studieren, um das zu testen aftlichess von verschiedenen therapeutischen Wirkstoffen mit und ohne Bestrahlung.

Protokoll

I. Zellpräparation

1. Die Zellen werden bis zur Konfluenz in DMEM mit 10% FBS etwa ein 80% konfluenten 225 cm ^3-Kolben für jeweils 5 Mäusen implantiert werden gezüchtet.
2. Saugen Sie Medien aus der Zellen, waschen mit 10 ml PBS ohne Calcium oder Magnesium. PBS absaugen off-Zellen.
3. Trypsinieren Zellen mit 3 ml Trypsin, 10-15 Min. warten, und neutralisieren das Trypsin mit 15 ml Medium.
4. Pipettieren Sie alle Zellen und Medien in einem 50 ml konischen. Zwei große Flaschen passen in ein 50 ml-Erlenmeyerkolben.
5. Spin-Zellen bei 1600 rpm für 7 min bei 4 ° C Überstand vollständig absaugen. Die Zellen in 10 ml kaltem PBS....

Diskussion

Maligne Gliome, wie zB Glioblastoma multiforme, stellen die häufigsten primären Hirntumoren und haben eine schlechte Prognose ^4. Die Überlebenschancen von Patienten durch GBM betroffen praktisch unverändert geblieben ist während des letzten Jahrzehnts (dh 9-12 Monate nach der Diagnose) trotz der Fortschritte in der Chirurgie, Bestrahlung und Chemotherapie ^5. Die Merkmale eines geeigneten Modells für das Studium der Gliom-Behandlung sollte eine reproduzierbare Tumorlokalisation und Wachstum der Zell.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Lab Standard Stereotaktische Instrutment	Maus und Ratte Stoelting Adapter
Betadine	100% EtOH
70% EtOH	50% Aceton
6 "Q-Tips	Alkoholtupfer
Hamilton-Spritze 80008	Ethicon 5-0 PD
1701 SN 31-33G / 1 "/ PT3 Nadel	1 ml-Spritzen
25G Nadeln	Heizkissen
Künstliche Tränen-Salbe	Sehr feine Spitze Permanentmarker