Murine Oberflächliche Lymphknoten Chirurgie

Summary

Um den Verlauf einer Immunantwort im Laufe der Zeit innerhalb der gleichen Maus folgen, können Lymphknoten sequentiell durch eine Operation entfernt werden. Hier beschreiben wir, wie diese Technik durchgeführt werden kann.

Abstract

Auf dem Gebiet der Immunologie, um das Fortschreiten einer Immunantwort gegen ein Impfstoff, einer Infektion oder eines Tumors zu verstehen, wird die Antwort oft über die Zeit verfolgt. In ähnlicher Weise erfordert die Untersuchung von Lymphozyten Homöostase Zeitverlauf Experimenten. Durchführung dieser Untersuchungen innerhalb der gleichen Maus ist ideal, um die experimentellen Variabilität sowie die Anzahl der Mäuse zu verringern. Blutentnahmesystem ermöglicht Leistung Zeitverlauf Versuche, aber es gibt nur Informationen über zirkulierenden Lymphozyten und eine begrenzte Anzahl von Zellen ^1-4. Da Lymphozyten durch den Körper zirkuliert und die ihren Wohnsitz in den Lymphknoten unterschiedliche Eigenschaften haben, ist es wichtig, beide Standorte zu untersuchen. Die sequentielle Entfernung der Lymphknoten durch eine Operation bietet eine einzigartige Gelegenheit, um eine Immunantwort oder Immunzellen Expansion in der gleichen Maus über die Zeit zu folgen. Darüber hinaus liefert diese Technik zwischen 1-2x10 ⁶ Zellen pro Lymphknoten, die ausreicht, EWrform phänotypischen Charakterisierung und / oder funktionellen Assays. Sequential Lymphknoten Operation oder Lymphadenektomie wurde erfolgreich von uns und anderen ^5-11 verwendet. Hier beschreiben wir, wie die brachialen und inguinalen Lymphknoten indem Sie einen kleinen Schnitt in der Haut eines anästhesierten Maus entfernt werden kann. Seit der Operation ist oberflächlich und schnell erledigt, die Maus sehr schnell erholt, heilt gut und nicht die Erfahrung, übermäßige Schmerzen. Alle zwei Tage, ist es möglich, ein oder zwei Lymphknoten Berücksichtigung Zeitverlauf Versuche ernten. Diese Technik eignet sich somit, um die Eigenschaften von Lymphknoten-Lymphozyten Wohnsitz im Laufe der Zeit zu untersuchen. Dieser Ansatz ist geeignet, um verschiedene experimentelle Designs und wir glauben, dass viele Labors würden von der Durchführung sequentieller Lymphknoten-Operationen profitieren können.

Protocol

1. Vorbereitung Vor der Operation

Die Mäuse wurden in Übereinstimmung mit den kanadischen Rat am Animal Care-Richtlinien behandelt.

1. Anästhesieren Mäusen durch Injektion von Ketamin / Xylazin (150/300 mg / kg, ip) oder durch Inhalation von Isofluran (2%, 1L Sauerstoff). Sofern vorhanden, sollte Isofluran verwendet, da es für eine bessere Kontrolle der Narkose Zeit und Tiefe ermöglicht werden. Auch wird der Sauerstoff zur gleichen Zeit, die die physiologischen Funktionen des Tieres verabreicht unterstützt. Darüber hinaus ist Isofluran direkt von den Lungen eliminiert und erfordert daher keine Leber oder Niere Stoffwechsel.
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Discussion

Wir haben ein Protokoll von LN Operation, die zu vielen experimentellen Systemen anwenden können, beschrieben. Obwohl sehr nützlich, um Immunantworten oder Immunzellen Homöostase zu folgen, hat diese Technik einige Einschränkungen. Erstens kann nur vier LNs geerntet werden. Zweitens muss die Immunantwort untersucht werden systemische oder treten in den oberflächlichen Leisten-oder Arm-(Haut-Entleerung) LNS. Schließlich wird die Anzahl der Zellen geerntet von der Qualität des LN Entfernung, eine technische Beschränkung, .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagenz Namen	Firma	Katalog-Nummer	Kommentare
Graefe Feine Muster Premium-Zange	Harvard Apparatus	52-2144	Stark gebogen, 10 cm (4 Zoll), 0,8 mm Spitze
Michel Clip Anwenden und Entfernen von Pinzetten	Harvard Apparatus	52-3779	12,5 cm (5 Zoll)
Michel Clip 100	Harvard Apparatus	52-3746	7,5 bis 1,75 mm
Temgesic (Buprenorphin-Hydrochlorid)	Schering-Plough
Vetalar (Ketamin Hydrochlorid)	Boniche Animal Healthcare		DIN: 01989529
Rompun (Xylazin)	Bayer		DIN: 02169592
Isofluran	ABBOTT		DIN: 02032384
Hypotears Augensalbe	Novartis Ophtalmics		DIN: 02133288
Baxedin (Chlorhexidin Gluconat 2% in Isopropylalkohol 70%)	Omega	L0000017	DIN: 02251477