Um zu verstehen, wie komplex Zelle Formen, wie neuronalen Dendriten, während der Entwicklung erreicht werden, ist es wichtig, in der Lage sein, genau Assay Mikrotubuli Organisation. Hier beschreiben wir eine robuste immunhistologische Markierung Methode, um Mikrotubuli Organisation von dendritischen Verzweigung Neuron sensorischen Dendriten, Luftröhre, Muskeln zu untersuchen, und andere Drosophila Larve Körperwand Gewebe.
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Methodenartikel
Immunhistologische Markierung von Mikrotubuli in Sensory Neuron Dendriten, Tracheen und Muskeln in der Drosophila Larva Körperwand
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Um zu verstehen, wie sich Unterschiede in komplexen Zelle Formen erreicht werden, ist es wichtig, genau zu verfolgen Mikrotubuli Organisation. Die Drosophila Larve Körper Wand enthält verschiedene Zelltypen, die Modelle, um Zellen und Gewebe Morphogenese Studie sind. Zum Beispiel Tracheen werden verwendet, um Rohr Morphogenese 1, und die dendritische Verzweigung (DA) sensorischen Neuronen der Drosophila Larve zu einem primären System für die Aufklärung der allgemeinen und Neuron-Klasse-spezifische Mechanismen der dendritischen Differenzierung 2-5 und Degeneration 6 prüfen .
Die Form der Dendriten Niederlassungen erheblich variieren kann zwischen Neuron Klassen und sogar zwischen verschiedenen Niederlassungen eines einzelnen Neurons 7,8. Genetische Studien in DA Neuronen lassen vermuten, dass Differential Zytoskelett-Organisation kann morphologischen Unterschiede in dendritische Verzweigung Form 4,9-11 zugrunde liegen. Wir bieten eine robuste immunologische Kennzeichnung Methode, um einessay in vivo Mikrotubuli Organisation in DA sensorischen Neurons Dendriten Laube (Abbildungen 1, 2, Movie 1). Dieses Protokoll zeigt die Zerlegung und Immunfärbung des ersten Stadiums Larve, eine Bühne, wenn sie aktiv sensorischen Neurons Dendriten Auswuchs und Verzweigung Organisation auftritt 12,13.
Neben Färbung sensorischen Neuronen erreicht diese Methode robust Kennzeichnung von Mikrotubuli Organisation in den Muskeln (Filme 2, 3), Luftröhre (Abbildung 3, Movie 3), und andere Körperteile Wand Gewebe. Es ist für die Ermittler wollen Mikrotubuli Organisation in situ Analyse in die Wand des Körpers bei der Untersuchung von Mechanismen, die wertvolle Kontrolle von Geweben und Zellen zu gestalten.
Protokoll
1. Vorbereitung der Reagenzien
Hinweise vor Beginn: Dissection und immunhistochemische Färbung sind in einem magnetischen Kammer durchgeführt und die Larve sich mit speziell geformten Insektennadeln merken. Detaillierte Anweisungen für den Bau eines magnetischen Kammer und Vorbereitung dieser Stifte können in Zusammenhang mit Verweisen 14,15 gefunden werden. Kurz gesagt, ist ein 1x1cm quadratisches Loch in ein magnetisches Blatt und einem Deckglas angebracht auf der Rückseite des Blattes in eine kleine Kammer zu schneiden. Die Seiten der Kammer sind mit Epoxy-Kleber versiegelt; nach dieser Leim abgebunden hat die....
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Diskussion
Um zu verstehen, wie komplex Zellformen sind es erreicht ist wichtig in der Lage sein, genau Assay Mikrotubuli Organisation. Hier beschreiben wir eine robuste immunhistologische Markierung Methode Assay Mikrotubuli Organisation von dendritischen Verzweigung Neuron sensorischen Dendriten. Neben Färbung sensorischen Neuronen erreicht diese Methode robust immunhistologische Färbung der Luftröhre, Muskeln und andere Körperteile Wand Gewebe.
Wir verwenden dieses Protokoll, um Mikrotubuli Organisa.......
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Offenlegungen
Wir haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Wir bedanken uns bei RIKEN für die Finanzierung. P10-Gal4 war eine Art Geschenk Alain Vincent (Université Paul Sabatier, Toulouse, Frankreich).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog Anzahl | Kommentare (Optional) |
| Zange | Dumont | 11251-20 | |
| Mikroschere | FST | 15000-08 | |
| Maus anti-α-Tubulin (Clone: DM1A) | Sigma | T9026 | Verdünnung 1 / 1000 |
| Maus anti-futsch (Clone: 22C10), Überstand | Entwicklungsbiologie Studium Hybridoma der Bank | 22C10 | Verdünnung 1 / 1000 |
| Rat anti-CD8 (Klon: 5h10) | Caltag | MCD0800 | Verdünnung 1 / 1000 |
| Alexa Fluor 488 Anti-Maus-IgG | Invitrogen | A-11001 | Verdünnung 1 / 500 |
| Cy3 anti-Rat IgG | Jackson Immunoresearch | 712-166-150 | Verdünnung 1 / 200 |
Referenzen
- Schottenfeld, J., Song, Y., Ghabrial, A. S. Tube continued: morphogenesis of the Drosophila tracheal system. Curr. Opin. Cell. Biol. 22, 633-639 (2010).
- Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in....
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Nachdrucke und Genehmigungen
