Elektrophysiologische Charakterisierung von neuronalen Antworten ist für das Verständnis der Gehirnfunktion und für das Führen der Anordnung von Farbstoffen für die Ablaufverfolgung Weg wichtig. Allerdings sind viele Studien an narkotisierten Tieren durchgeführt. Um die Hirnfunktion ohne Betäubung zu verstehen, entwickelten wir eine Methode, um neuronale Antwort Eigenschaften zu erfassen und zu injizieren Farbstoffe in wach-Maus.
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Methodenartikel
Die Erstellung eines Awake Mausklick für Aufnahme neuronalen Antworten und Einspeisen von Tracer
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Es ist bekannt, dass die Narkose Nervenreaktion Eigenschaften verändert in verschiedenen Regionen des Gehirns. 13. Im auditorischen System werden grundlegende Eigenschaften der Reaktion Neuronen des Hirnstamms einschließlich Schwelle, Frequenz Spezifität und inhibitorischen Seitenbänder in signifikanter Weise unter Narkose 2.1 verändert. Diese Beobachtungen veranlassten Physiologen an Möglichkeiten, von einzelnen Neuronen, ohne dass die Kontamination Auswirkungen der Narkose aufnehmen zu suchen. Ein Ergebnis war ein decerebrate Herstellung, wobei der Hirnstamm vollständig auf der Ebene der Mittelhirn 4 wurde durchtrennt. Die Nachteile dieser Vorbereitung sind eine gewaltige Operation, die Beseitigung der absteigenden Projektionen aus dem Vorderhirn, und die Unfähigkeit, sensorische Stimulation zu verwenden, um Strukturen oberhalb des Mittelhirns zu untersuchen. Eine andere Strategie bestand darin, Elektroden-Arrays chronisch implantieren, um aus einzelnen Neuronen und Mehrfach-Cluster aufnehmen, während das Tier wach ist und / oder verhalten 5,6 09.07 bis 12.10 Maus verwendet werden, angepasst. Mit dieser Methode können wir elektrophysiologische Ableitungen über mehrere Tage in der nicht narkotisierten Maus befragen. Am Ende der Aufnahme-Sessions, können wir dann einen Farbstoff zu injizieren Elektrodenpositionen und Aufzeichnung Seiten zu rekonstruieren oder ein Tracer injiziert, so dass Wege von und zu den Aufnahme-Loci bestimmt werden kann. Diese Methode erlaubt es gut isoliert einzelnes Neuron Aufnahmen über mehrere Tage ohne den Einsatz Anästhetika.
Protokoll
1. Kopfstützenantrieb Überblick
- Um einen speziell angefertigten Kopf-post montieren, legen Sie eine 1/16 "Edelstahl-Roll-Stift senkrecht in einem Loch in einer 3/32 gebohrt" Stab aus rostfreiem Stahl, um ein Kreuz bilden. Die vertikale Teil des Kopf-Beitrag sollte etwa 20 mm und die horizontale Quersteg etwa 15 mm betragen. Tippen einem Ende der vertikalen Stange, um eine # 1-72 Schraube. (Abb. 1).
- Während der Operation und der Aufnahme wird die Kopf-Beitrag in einer speziell angefertigten Messing oder Aluminium Montage Bar mit # 1-72 Schraube (Abb. 2) gesichert. Das lange Stück ....
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Diskussion
Der Vorteil des Kopf-post-Rückhaltesystem für elektrophysiologische und neuroanatomische Experimente in der Maus ist, dass Experimente mit nicht narkotisierten, wach Mäusen durchgeführt werden kann, sodass potenzielle Reaktion Kontamination durch Anästhetika. Darüber hinaus kann der Aufbau über mehrere Tage verwendet werden, um eine effizientere Nutzung von Tieren zu ermöglichen.
Die meisten Komponenten für den Kopf-Beitrag zur Verfügung off-the-shelf. Nur der Kopf-post-und Vorrichtung zur B.......
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Offenlegungen
Wir haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Unterstützt durch NSF 0920060, NIH DC004395, NHMRC Zuschuss 1009482, NSW Office of Science and Medical Research, und dem Passe Garnett und Rodney Williams Memorial Foundation.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name | Firma | Katalog-Nummer | Kommentare |
| Etch Gel zur Reinigung Schädel vor dem Zahnzement | Henry Schein | 101-5396 | 12/pk mit 1,2-ml-Spritzen |
| Primer für Dentalzement | Kerr Optibond | 25881 | 8 ml Flasche |
| Kleber für Zahnzement | Kerr Optibond | 25882 | 8 ml Flasche |
| Applikatoren für Zahnzement | Kerr Optibond | 24680 | 200/pk |
| Dentalzement | Charisma, Heraeus Kulzer | 66000085 | 4gm Spritze Refill |
| Wolframstab (Ground Pin) | AM-Systeme | 717200 | 0,010 "Durchmesser |
| Economy UV-Härtung Licht | Henry Schein | CU-80 | |
| Head-Beitrag | Erbaut im eigenen Haus | ||
| Montageschiene | Erbaut im eigenen Haus | ||
| Montageblock | Erbaut im eigenen Haus | ||
| Stereotaktischen Rahmen | David Kopf Instruments | 902 | |
| Maus und Ratte Neonatale Adapter | Stoelting | 51625 | |
| DeltaPhase Isotherme Pad | Braintree Scientific, Inc. | 39DP |
Referenzen
- Evans, E. F., Nelson, P. G. The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state. Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).
- Joris, P. X.
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Nachdrucke und Genehmigungen
