Endothelial Kolonie-bildenden Zellen (ECFCs) im Umlauf Endothelzellen mit robusten klonale proliferative Potential zeigen, dass intrinsische In-vivo- Gefäß bildet Fähigkeit. Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von Auswuchs Endothelzellen aus CB abgeleitet sind wichtig zur Identifizierung und Isolierung Bona fide ECFCs für mögliche klinische Anwendung bei der Reparatur von beschädigtem Gewebe.
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Methodenartikel
Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von Endothelial Kolonie-bildenden Zellen aus humanem Nabelschnurblut
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Langjährige Blick auf die Bildung neuer Blutgefäße durch Angiogenese, Vaskulogenese und Arteriogenese wurden vor kurzem 1 bewertet. Die Anwesenheit von zirkulierenden endothelialen Vorläuferzellen (EPCs) wurden erstmals im erwachsenen menschlichen peripheren Blut von Asahara et al. In 1997 2 bringt eine Infusion von neuen Hypothesen und Strategien für die vaskuläre Regeneration und Reparatur. EPCs sind selten, aber normale Bestandteile des zirkulierenden Blutes, dass die Heimat von Seiten der Bildung von Blutgefäßen oder vaskuläre Remodeling, und erleichtern Sie entweder postnatalen Vaskulogenese, Angiogenese, Arteriogenese oder zum größten Teil über parakrine Stimulation der bestehenden Gefäßwand-Zellen abgeleitet sind 3. Keine spezifische Marker zu identifizieren, einen EPC identifiziert wurde, und zur Zeit der Zustand des Feldes ist es, dass zahlreiche Zelltypen, einschließlich proangiogenen hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen zu verstehen, zirkulierenden angiogenen Zellen, Tie2 + Monozyten, myeloischen Vorläuferzellen cells, Tumor-assoziierte Makrophagen und aktivierten Makrophagen M2 bei der Stimulierung der angiogenen Prozess in verschiedenen präklinischen Tiermodellsystemen und beim Menschen in zahlreichen Erkrankungen 4, 5 teilnehmen. Endothelial Kolonie-bildenden Zellen (ECFCs) sind selten zirkulierenden lebensfähigen Endothelzellen durch robuste klonale Proliferationspotential, sekundäre und tertiäre Koloniebildungsfähigkeit auf Wiederplattieren und Fähigkeit zur Bildung von Gefäßen in vivo nach der Transplantation intrinsischen in immundefizienten Mäusen 6-8, dadurch gekennzeichnet. Während ECFCs wurden erfolgreich aus dem peripheren Blut von gesunden erwachsenen Probanden, Nabelschnurblut (CB) von gesunden Neugeborenen und Gefäßwand von zahlreichen menschlichen arteriellen und venösen Gefäße 6-9 isoliert, besitzt CB die höchste Frequenz von 7 ECFCs dass Display die robusteste klonale proliferative Potenzial und Form robuste und funktionelle Blutgefäße in vivo 8, 10-13. Während die AbleitungECFC aus adulten peripheren Blut wurde 14, 15 vorgestellt, hier haben wir die Methoden für die Ableitung beschreiben, Klonen, Expansion und in vitro sowie in vivo Charakterisierung ECFCs aus der humanen Nabelschnur CB.
Protokoll
Reagenzien und Lösungen
EMG-2-Medien (Lonza, Cat. No CC-3162 mit EBM-2 Basalmedium und EGM-2 SingleQuot Kit Ergänzungen, und Wachstumsfaktoren)
EBM-2 (Lonza, Cat No. Cc-3156) mit dem gesamten SingleQuot Kit ergänzt und Wachstumsfaktoren ergänzt (Lonza, Cat No. Cc-4176), 10% (v / v) fötales Rinderserum (FBS) und 1% (v / v) Penicillin (10000 U / ml) / Streptomycin (10.000 g / ml) / Amphotericin (25 ug / ml). Speichern Sie bis zu 1 Monat bei 4 ° C Empfohlen EGM-2 Bände für ECFC Kultur verwenden sind 500 ul / Well für 24-Well-Platten, 2 ml / Vertiefung für 6-well Platten, 5ml/25-cm 2 Flaschen und 10 ml/75-cm....
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Diskussion
Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von putativen endothelialen Vorläuferzellen ist wichtig, die bona fide ECFCs die in der Lage klonal und seriell Re-Beschichtung in der Kultur zu identifizieren sind und führen zu langlebigen und funktionellen implantierbare Blutgefäße in vivo. Menschlichem Nabelschnurblut ist mit ECFCs und der Konzentration dieser zirkulierenden Zellen sinkt mit dem Altern oder Krankheiten 10 angereichert. Neuere Studien legen nahe, dass ECFC kann eine wichtig.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Dr. Yoder ist Berater für EndGenitor Technologies, Inc. und Mitglied des Board of Rimedion Technologies, Inc.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalog-Nummer | |
| Heparin-Natrium zur Injektion, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 | |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 | |
| Mischkanüle | Maersk Medical | 500.11.012 | |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 | |
| Definierte FBS | Hyclone | SH30070.03 | |
| TrypLE Express | Gibco | 12605 | |
| Ratten-Kollagen Typ I | BD Biosciences | 354236 | |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| FcR-Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 | |
| hCD31, FITC conjugaTed | BD Pharmingen | 555445 | |
| hCD45, FITC-konjugierten | BD Pharmingen | 555482 | |
| hCD14, FITC-konjugierten | BD Pharmingen | 555397 | |
| hCD144, PE-konjugiertem | eBioscience | 12-1449-80 | |
| hCD146, PE-konjugiertem | BD Pharmingen | 550315 | |
| hCD105, PE-konjugiertem | Invitrogen | MHCD10504 | |
| Ms IgG 1, k Antikörper, FITC-konjugierten | BD Pharmingen | 555748 | |
| Fr. IgG 1, k-Antikörper, PE-konjugiertem | BD Pharmingen | 559320 | |
| Ms IgG 2a, k Antikörper, FITC-konjugierten | BD Pharmingen | 555573 | |
| Anti-Human-CD31 | Dako | Klon JC70 / A | |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 | |
| 0,22-um-Vakuum-Filtration Systems | Millipore | SCGPU05RE | |
| Eisessig, 17.4N | Fischer | A38-500 | |
| Antibiotika-Antimykotika | Invitrogen | 15240-062 | |
| Fötales Rinderserum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 | |
| IHC Zink Fixativ | BD Biosciences | 550523 | |
| SYTOX Green Reagenz | Invitrogen | S33025 | |
| Cloning Zylinder, steril | Fisher Scientific | 07-907-10 |
Referenzen
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis. Nature. 473, 298-307 (2011).
- Asahara, T. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275, 964-967 (1997).
- Urbich, C., Dimmeler, S.
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Nachdrucke und Genehmigungen
