Erratum: Reaggregation von Thymuskulturen

Zusammenfassung

Eine Korrektur wurde vorgenommen für: Reaggregate Thymus Cultures. Aufgrund eines Verlegerfehlers wurde ein überarbeiteter Abstract erneut veröffentlicht.

Zusammenfassung

Es wurde eine Korrektur vorgenommen bei: Reaggregate Thymus Cultures. Aufgrund eines Verlegerfehlers wurde ein überarbeitetes Abstract erneut veröffentlicht. Das Abstract wurde korrigiert zu:

Stromazellen in lymphatischen Geweben sind in dreidimensionale Strukturen organisiert, die ein Gerüst bilden und vermutlich die Migration und Entwicklung hämatopoetischer Zellen steuern. Wichtig ist, dass die Aufrechterhaltung dieser dreidimensionalen Organisation für die normale Funktion der Stromazellen entscheidend zu sein scheint, da zweidimensionale Zellschichten oft nur einzelne Teilfunktionen des lymphatischen Gewebes unterstützen können. Im Thymus bilden komplexe Netzwerke kortikaler und medullärer epithelialer Zellen ein Gerüst, das die Rekrutierung, Proliferation, Differenzierung und das Überleben lymphatischer Vorläuferzellen während ihres mehrstufigen Prozesses der intrathymischen T-Zell-Entwicklung kontrolliert. Das Verständnis der funktionellen Rolle einzelner stromaler Kompartimente im Thymus ist entscheidend, um zu ermitteln, wie der Thymus die Unterscheidung zwischen Selbst und Nicht-Selbst vermittelt. Hier beschreiben wir eine Technik, bei der wir die Plastizität fetaler Gewebe nutzen, um nach enzymatischer Disaggregation in vitro wieder intakte dreidimensionale Strukturen entstehen zu lassen. Die Dissoziation fetaler Thymuslappen in heterogene Zellgemische, gefolgt von deren Trennung in einzelne Zellkomponenten, wird anschließend mit der in vitro-Reassoziation dieser gewünschten Zelltypen zu dreidimensionalen Reaggregaten in definierten Verhältnissen kombiniert, wodurch die Untersuchung spezifischer Aspekte der T-Zell-Entwicklung unter kontrollierten zellulären Bedingungen ermöglicht wird. (Dieser Artikel basiert auf Arbeiten, die zuerst in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, Seiten 185–196 veröffentlicht wurden.)

aus

Im Thymus durchlaufen unreife CD4+8+ Thymozyten, die zufällig umgeordnete Gene für die T-Zell-Rezeptor-α- und β-Ketten exprimieren, positive und negative Selektionsereignisse, die auf ihrer Fähigkeit beruhen, von thymischen Stromazellen exprimierte Selbstpeptid/MHC-Moleküle (major histocompatibility complex) zu erkennen. Die in-vivo-Analyse der Rolle thymischer Stromazellen während der intrathymischen Selektion wird durch die zelluläre Komplexität des thymischen Mikromilieus im ruhenden adulten Thymus sowie durch das Fehlen geeigneter gezielter Strategien zur Beeinflussung der Genexpression in bestimmten thymischen Stromakompartimenten erschwert. Wir konnten zeigen, dass das thymische Mikromilieu in vitro leicht durch den Einsatz von reaggregierten Thymus-Organ-Kulturen manipuliert werden kann, die die Herstellung dreidimensionaler Thymuslappen aus definierten Stromazellen und Lymphozyten ermöglichen. Obwohl andere in-vitro-Systeme bestimmte Aspekte der T-Zell-Entwicklung unterstützen, stellt die reaggregierte Thymus-Organ-Kultur bislang das einzige in-vitro-System dar, das effiziente, MHC-Klasse-I- und II-vermittelte Thymozyten-Selektionsereignisse ermöglicht und daher als effektives Werkzeug zur Untersuchung der zellulären und molekularen Regulation der positiven und negativen Selektion im Thymus verwendet werden kann.

Protokoll

Es wurde eine Korrektur vorgenommen bei: Reaggregate Thymus Cultures. Aufgrund eines Verlegerfehlers wurde ein überarbeitetes Abstract erneut veröffentlicht. Das Abstract wurde korrigiert zu:

Stromazellen in lymphatischen Geweben sind in dreidimensionale Strukturen organisiert, die ein Gerüst bilden, von dem angenommen wird, dass es die Migration und Entwicklung hämatopoetischer Zellen steuert. Wichtig ist, dass die Aufrechterhaltung dieser dreidimensionalen Organisation offenbar entscheidend für die normale Funktion der Stromazellen ist, da zweidimensionale Zellschichten oft nur in der Lage sind, einzelne Teilfunktionen des lymphatischen Gewebes zu unterstützen. Im Thymus bilden komplexe Netzwerke kortikaler und medullärer epithelialer Zellen ein Gerüst, das die Rekrutierung, Proliferation, Differenzierung und das Überleben lymphatischer Vorläuferzellen steuert, während diese den mehrstufigen Prozess der intrathymischen T-Zell-Entwicklung durchlaufen. Das Verständnis der funktionellen Rolle einzelner stromaler Kompartimente im Thymus ist entscheidend, um aufzuklären, wie der Thymus die Unterscheidung von Selbst und Nicht-Selbst vermittelt. Hier beschreiben wir eine Methode, bei der wir die Plastizität fetaler Gewebe nutzen, um nach enzymatischer Disaggregation in vitro wieder intakte dreidimensionale Strukturen entstehen zu lassen. Die Disaggregation fetaler Thymuslappen in heterogene Zellgemische, gefolgt von der Trennung in einzelne Zellkomponenten, wird anschließend mit der in vitro-Reassemblierung dieser gewünschten Zelltypen zu dreidimensionalen Reaggregaten in definierten Verhältnissen kombiniert, wodurch die Untersuchung spezifischer Aspekte der T-Zell-Entwicklung unter kontrollierten zellulären Bedingungen ermöglicht wird. (Dieser Artikel basiert auf einer Arbeit, die erstmals in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, Seiten 185–196 veröffentlicht wurde.)

aus

Im Thymus unterziehen unreife CD4+8+-Thymozyten, die zufällig umgeordnete T-Zell-Rezeptor-α- und β-Ketten-Gene exprimieren, einer positiven und negativen Selektion, die auf ihrer Fähigkeit beruht, Selbstpeptid/Major-Histokompatibilitäts-Komplex (MHC)-Moleküle zu erkennen, die von thymischen Stromazellen exprimiert werden. Die in-vivo-Analyse der Rolle thymischer Stromazellen während der intrathymischen Selektion wird durch die zelluläre Komplexität des thymischen Mikromilieus im ruhenden adulten Thymus sowie durch das Fehlen geeigneter gezielter Strategien zur Manipulation der Genexpression in bestimmten thymischen Stromakompartimenten erschwert. Wir konnten zeigen, dass das thymische Mikromilieu in vitro leicht manipuliert werden kann, und zwar mithilfe von reaggregierten Thymus-Organkulturen, die die Herstellung dreidimensionaler Thymuslappen aus definierten Stromazellen und lymphoiden Zellen ermöglichen. Obwohl andere in-vitro-Systeme bestimmte Aspekte der T-Zell-Entwicklung unterstützen, bleibt die reaggregierte Thymus-Organkultur das einzige in-vitro-System, das effiziente, durch MHC-Klasse-I- und II-vermittelte Thymozytenselektionsereignisse unterstützen kann, und kann daher als wirksames Werkzeug zur Untersuchung der zellulären und molekularen Regulation der positiven und negativen Selektion im Thymus eingesetzt werden.