Erratum: Herstellung von mit 2-dGuo behandelten Thymus-Organkulturen

Zusammenfassung

Eine Korrektur wurde vorgenommen für: Herstellung von mit 2-dGuo behandelten Thymus-Organkulturen. Aufgrund eines Verlagsfehlers wurde ein überarbeitetes Abstract erneut veröffentlicht.

Zusammenfassung

Es wurde eine Korrektur vorgenommen bei: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Aufgrund eines Verlegerfehlers wurde ein überarbeitetes Abstract erneut veröffentlicht. Das Abstract wurde korrigiert zu:

Im Thymus ist bekannt, dass Wechselwirkungen zwischen sich entwickelnden T-Zell-Vorläufern und Stromazellen, zu denen kortikale und medulläre epitheliale Zellen gehören, eine Schlüsselrolle bei der Entwicklung eines funktionell kompetenten T-Zell-Pools spielen. Die Komplexität der T-Zell-Entwicklung im Thymus in vivo kann jedoch die Analyse einzelner zellulärer Komponenten und spezifischer Entwicklungsstadien einschränken. In vitro-Kultursysteme bieten einen leicht zugänglichen Weg, um mehrere komplexe zelluläre Prozesse zu untersuchen. Thymus-Organ-Kultursysteme stellen eine weit verbreitete Methode dar, die intrathymische Entwicklung von T-Zellen unter definierten Bedingungen in vitro zu erforschen. Hier beschreiben wir ein System, bei dem embryonale Thymuslappen von Mäusen durch eine vorherige Organ-Kultur in 2-Desoxyguanosin, einer Verbindung, die selektiv toxisch für hämatopoetische Zellen ist, von endogenen hämatopoetischen Elementen befreit werden können. Diese Technik bietet nicht nur eine leicht zugängliche Quelle thymischer Stromazellen, um die Rolle thymischer Mikroumgebungen bei der Entwicklung und Selektion von T-Zellen zu untersuchen, sondern bildet auch die Grundlage für weitere experimentelle Ansätze, darunter die Rekonstitution alymphatischer Thymuslappen in vitro mit definierten hämatopoetischen Elementen, die Transplantation alymphatischer Thymusorgane in Empfängermäuse sowie die Bildung reaggregierter Thymus-Organ-Kulturen. (Dieser Artikel basiert auf Arbeiten, die zuerst in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, Seiten 185–196 veröffentlicht wurden.)

aus

Im Thymus durchlaufen unreife CD4+8+-Thymozyten, die zufällig umgeordnete T-Zell-Rezeptor-α- und β-Kettengene exprimieren, positive und negative Selektionsereignisse, die auf ihrer Fähigkeit beruhen, Selbstpeptid/Major-Histokompatibilitäts-Komplex-(MHC)-Moleküle zu erkennen, die von thymischen Stromazellen exprimiert werden. Die in-vivo-Analyse der Rolle thymischer Stromazellen während der intrathymischen Selektion wird durch die zelluläre Komplexität des thymischen Mikromilieus im ruhenden adulten Thymus sowie durch das Fehlen geeigneter gezielter Strategien zur Manipulation der Genexpression in bestimmten thymischen Stromakompartimenten erschwert. Wir konnten zeigen, dass das thymische Mikromilieu in vitro leicht manipuliert werden kann, und zwar mithilfe von reaggregierten Thymus-Organkulturen, die die Herstellung dreidimensionaler Thymuslappen aus definierten Stromazellen und lymphoiden Zellen ermöglichen. Obwohl andere in-vitro-Systeme bestimmte Aspekte der T-Zell-Entwicklung unterstützen, bleibt die reaggregierte Thymus-Organkultur das einzige in-vitro-System, das effiziente, durch MHC-Klasse-I- und II-vermittelte Thymozytenselektionsereignisse unterstützen kann, und sich daher als wirksames Werkzeug zur Untersuchung der zellulären und molekularen Regulation der positiven und negativen Selektion im Thymus eignet.

Protokoll

Es wurde eine Korrektur vorgenommen bei: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Aufgrund eines Verlegerfehlers wurde ein überarbeitetes Abstract erneut veröffentlicht. Das Abstract wurde korrigiert zu:

Im Thymus ist bekannt, dass Wechselwirkungen zwischen sich entwickelnden T-Zell-Vorläufern und Stromazellen, zu denen kortikale und medulläre epitheliale Zellen gehören, eine Schlüsselrolle bei der Entwicklung eines funktionell kompetenten T-Zell-Pools spielen. Die Komplexität der T-Zell-Entwicklung im Thymus in vivo kann jedoch die Analyse einzelner zellulärer Komponenten und spezifischer Entwicklungsstadien einschränken. In-vitro-Kultursysteme bieten einen leicht zugänglichen Weg, um mehrere komplexe zelluläre Prozesse zu untersuchen. Thymus-Organ-Kultursysteme stellen eine weit verbreitete Methode dar, die intrathymische Entwicklung von T-Zellen unter definierten Bedingungen in vitro zu erforschen. Hier beschreiben wir ein System, bei dem embryonale Thymuslappen von Mäusen durch eine vorherige Organ-Kultur in 2-Desoxyguanosin, einer Verbindung, die selektiv toxisch für hämatopoetische Zellen ist, von endogenen hämatopoetischen Elementen befreit werden können. Diese Technik bietet nicht nur eine leicht zugängliche Quelle thymischer Stromazellen, um die Rolle thymischer Mikroumgebungen bei der Entwicklung und Selektion von T-Zellen zu untersuchen, sondern bildet auch die Grundlage für weitere experimentelle Ansätze, darunter die Rekonstitution alymphatischer Thymuslappen in vitro mit definierten hämatopoetischen Elementen, die Transplantation alymphatischer Thymusorgane in Empfängermäuse sowie die Bildung reaggregierter Thymus-Organ-Kulturen. (Dieser Artikel basiert auf Arbeiten, die zuerst in Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, Seiten 185–196 veröffentlicht wurden.)

aus

Im Thymus durchlaufen unreife CD4+8+-Thymozyten, die zufällig umgeordnete T-Zell-Rezeptor-α- und β-Kettengene exprimieren, positive und negative Selektionsereignisse, die auf ihrer Fähigkeit beruhen, Selbstpeptid/Major-Histokompatibilitäts-Komplex (MHC)-Moleküle zu erkennen, die von thymischen Stromazellen exprimiert werden. Die in-vivo-Analyse der Rolle thymischer Stromazellen während der intrathymischen Selektion wird durch die zelluläre Komplexität des thymischen Mikromilieus im ruhenden adulten Thymus sowie durch das Fehlen geeigneter gezielter Strategien zur Manipulation der Genexpression in bestimmten thymischen Stromakompartimenten erschwert. Wir konnten zeigen, dass das thymische Mikromilieu in vitro leicht manipuliert werden kann, und zwar mithilfe von reaggregierten Thymus-Organkulturen, die die Herstellung dreidimensionaler Thymuslappen aus definierten Stromazellen und lymphoiden Zellen ermöglichen. Obwohl andere in-vitro-Systeme bestimmte Aspekte der T-Zell-Entwicklung unterstützen, bleibt die reaggregierte Thymus-Organkultur das einzige in-vitro-System, das effiziente, durch MHC-Klasse-I- und II-vermittelte Thymozytenselektionsereignisse unterstützen kann, und sich daher als wirksames Werkzeug zur Untersuchung der zellulären und molekularen Regulation der positiven und negativen Selektion im Thymus eignet.