Antigene geschützten funktionellen Red Blood Cells durch die Membran Pfropfung von Compact hyperverzweigten Polyglycerinen

Zusammenfassung

Die Zellmembran Modifikation von roten Blutkörperchen (Erythrozyten) mit hyperverzweigten Polyglycerin (HPG) präsentiert wird. Geändert RBCs wurden durch wässrige Zwei-Phasen-Partitionierung, osmotische Fragilität und Komplement-vermittelte Lyse gekennzeichnet. Die Tarnung der Oberflächenproteine ​​und Antigene wurde anhand der Durchflusszytometrie und Micro Typing System (MTS) Blut Phänotypisierung Karten.

Zusammenfassung

Roten Blutkörperchen (RBC) Transfusion ist für die Behandlung einer Reihe von akuten und chronischen medizinischen Problemen wie Thalassämie major und Sichelzellenanämie ^1-3. Aufgrund des Vorhandenseins der Vielzahl von Antigenen auf der RBC Oberfläche (~ 308 bekannten Antigene ^4), Patienten im chronischen Bluttransfusion Therapie entwickeln Alloantikörpern aufgrund der Übereinstimmung von untergeordneter Fehltreffer Antigenen auf Erythrozyten transfundiert ^{4, 5.} Pfropfung von hydrophilen Polymeren, wie Polyethylenglykol (PEG) und hyperverzweigten Polyglycerin (HPG) einen Ausschluss Schicht auf RBC Membran, die die Wechselwirkung der Antikörper mit Oberflächenantigenen ohne Beeinträchtigung verhindert den Durchtritt von kleinen Molekülen wie Sauerstoff, Glukose und Ionen ^3. Gegenwärtig keine Methode ist für die Erzeugung von universellen Erythrozyten Donorzellen zum Teil wegen der großen Herausforderung durch das Vorhandensein einer großen Anzahl von Antigenen (Protein-und Kohlenhydrat-Basis) auf der Oberfläche und der RBC d vorgestelltntwicklung solcher Methoden wird erheblich zur Verbesserung der Transfusion Sicherheit und dramatisch verbessern die Verfügbarkeit und Nutzung von RBC. In diesem Bericht sind die Versuche, die verwendet werden, um Antigen geschützten funktionellen RBCs durch die Membran Pfropfung von HPG und deren Charakterisierung zu entwickeln vorgestellt. HPGs sind hoch biokompatibel kompakten Polymeren ^{6, 7,} und werden voraussichtlich innerhalb der Zelle Glykokalyx, die die Lipid-Membran ^{8, 9} und Maske RBC Oberflächenantigene ^{10, 11} umgibt befinden.

Protokoll

A. Hyperverzweigte Polyglycerin Modification (SS-HPG)

1. Ort lyophilisiert HPG 60 kDa (0,5 g, 0,0083 mmol) in einem Rundkolben und trocknen über Nacht unter Vakuum bei 90 ° C.
2. Gekühlt wird der Kolben auf Raumtemperatur und lösen das getrocknete HPG in wasserfreiem Pyridin (3 ml).
3. Bis etwa acht Hydroxylgruppen auf HPG mit Carboxylgruppen funktionalisiert, fügen katalytischen Menge von Dimethylaminopyridin (ein Tropfen von 5 mg / ml Lösung in Pyridin) zu der HPG Lösung. Zu dieser Mischung hinzuzufügen Bernsteinsäureanhydrid, (0,0067 g, 0,0664 mmol), gelöst in 0,5 ml Pyridin tropfenweise über 10 min. Rühren Sie die Mischung über Nacht bei Rau....

Ergebnisse

Camouflage von Rhesus D-Antigen und CD47 RBC Oberflächenprotein wurden mittels Durchflusszytometrie mit fluoreszenzmarkierten monoklonalen Antikörpern quantifiziert und ein repräsentatives Ergebnis ist in Abbildung 1 dargestellt. Im Falle der HPG-gepfropften RBCs (grau), verringerte sich die Intensität des Signals (Peak verschoben nach links) im Vergleich zur Kontrollgruppe RBCs (rot und grün), die eine Reduktion der Bindung an Antikörper gegen Zelloberflächen, die die Maskierung der Oberflächenproteine.......

Diskussion

Universal-Spender RBCs haben ein großes Potenzial bei der Verbesserung der Blut-Verfügbarkeit und Sicherheit für Bluttransfusion Therapie. Erythrozyten sind auch vielversprechende Drug-Delivery-Fahrzeuge aufgrund ihrer langen Kreislauf und inhärente Biokompatibilität ^{14, 15} berücksichtigt. Experimente in diesem Papier vorgestellten Auswertung der in vitro Eigenschaften der HPG veränderten Erythrozyten. Die in vitro-Eigenschaften und in vivo Auflage von HPG veränderten Erythrozyten h.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Glycidol	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Trimethylolpropan	Fluka		(ON, Canada)
Kaliummethylat	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Wasserfreiem Pyridin	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
4-Dimethylaminopyridin	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Bernsteinsäureanhydrid	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Aceton	Fisher Scientific		(ON, Canada)
Wasserfreiem Dimethylformamid	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N-Hydroxysuccinimid	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N, N'-Diisopropylcarbodiimid	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
MTS-Karten			Micro Typing System (MTS) Karten (FL, USA)
Dextran 500 kDa	Pharmacia Fine Chemicals		(Schweden)
PEG 8 kDa	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
FITC monoklonalen anti-Rhesus D (RhD)	Quotient Biodiagnostics		(PA, USA)
PE monoklonalen anti-CD47	BD Biosciences		(NJ, USA)
Drabkin-Reagenz	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
			Tabelle. Chemikalien und Reagenzien für die Pfropfung von HPG Polymere RBC Membran und ihre Analyse verwendet.