Das Ziel ist es, eine arteriovenöse Fistel, die einfach und reproduzierbar herzustellen. Diese Methode verwendet keine Nähte oder Kleber. Daher können die Proben mit der geringsten Menge an Fremdmaterialien für die Analyse verwendet werden.
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Methodenartikel
Technische Aspekte der Maus aortokavaler Fistel
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Technische Aspekte der Erstellung eines arteriovenösen Fistel in der Maus werden diskutiert. Unter Vollnarkose wurde Bauchschnitt vorgenommen und der Aorta und Vena cava inferior (IVC) ausgesetzt sind. Die proximalen infrarenale Aorta und die distale Aorta für Klammer Platzierung und Punktion seziert, beziehungsweise. Besondere Aufmerksamkeit wird bezahlt, um zwischen Dissektion der Aorta und der IVC vermeiden. Nach dem Einspannen der Aorta wird eine 25 G Nadel zu durchstechen beide Wände der Aorta in die IVC verwendet. Das umgebende Bindegewebe ist für blutstillende Kompression verwendet. Erfolgreiche Gründung des AVF zeigt pulsatile arterielle Durchblutung der IVC. Eine weitere Bestätigung der erfolgreichen AVF kann durch postoperative Doppler-Ultraschall erreicht werden.
Einleitung
Die häufigste Option für Nierenersatztherapie bei Patienten mit terminaler Niereninsuffizienz ist die Hämodialyse gewählt. Zugang für die Hämodialyse wird durch arteriovenöse Fistel (AVF), arteriovenöse Transplantats oder temporäre Katheterplatzierung durchgeführt. Obwohl AVF der bevorzugte Modus des Zugangs sind, AVF weitem noch nicht perfekt. Ein-Jahres-Primär AVF Durchgängigkeitsraten sind nur 60-65%, mit vielen Ausfällen aufgrund Neointimahyperplasie. Die Molekularbiologie und Physiologie der normalen AVF Bildung und maladaptive Bildung bleibt schlecht charakterisiert. Als solches ist es wesentlich zu verbessern AVF Ergebnisse mit zugehörigen Verstärkung in Verständnis der Regulation der Fistel gewonnen werden. 1-3
Belichtung einer Vene arteriellen Fluss häufig in Zusammenhang mit Venentransplantaten die direkte Modelle von chirurgischen Bypass sind. 4, 5 untersucht Obwohl Venentransplantaten und AVF ähnlich Setzen einer Vene zu einem arteriellen Umgebung gibt es mehrere kritische differences zwischen ihnen. Erstens ist der Widerstand des distalen Abfluss Bett wesentlich niedriger AVF, die AVF Drains in den rechten Vorhof während die Venentransplantat Drains der oft erkrankten distalen kleinen Arterien, was zu einer erhöhten Durchblutung und Schubspannung in der AVF. Zweitens kann das Blut im venösen Teil des AVF eine Mischung von venösen und arteriellen Blut, was zu niedrigeren Sauerstoffversorgung im Vergleich zu den rein arteriellen Inhalt in die Vene Transplantat. Drittens wird die Ader in der AVF nicht von seinem Bett entfernt, was zu Erhaltung seiner vaso venorum und nervös Innervationen, verglichen mit der vollständigen Umsetzung der Venentransplantat in den arteriellen Bett. Schließlich ist die Anzahl der in der Regel zwei Anastomosen bei Gefäßplastiken während ein AVF typischerweise nur einen. In dieser Studie stellen wir ein Mausmodell aortokavaler Fistel, die für die Untersuchung von AVF verwendet werden können.
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Protokoll
1. Anästhesie und Pre-operative Verfahren
- Induktion der Narkose
Zulassung durch die zuständige Institutional Animal Care und Use Committee erhalten. Männlich C57/black Mäuse im Alter von 10 Wochen werden betäubt. Deliver 4% Isofluran mit 0,8 L / min Sauerstoff zu einer Plexiglas-Box über eine Isofluran Verdampfer und platzieren Sie die Maus im Inneren. Alternativ kann, wenn der Chirurg bevorzugt ist, kann intraperitoneal Anästhesie eingesetzt werden. - Erhaltung Anästhesie
Nach Bestätigung der Anästhesie durch mangelnde Reaktion auf toe Prise wird die Maus auf dem Operationstisch in Rückenlage mit einem Silikon-Maske aufsetzen. Isofluran wird auf 2% reduziert, um geeignete Anästhesie zu halten. - Haarentfernung
Ventral Haar ist vom Hals bis Unterleib mit einem Haarentferner entfernt. Haarentfernung ist bevorzugt, weil das Haar, das links mit einem Rasierer ist mit dem Doppler-Ultraschall stören könnten.
2. Präoperative Ultrasound
- Ziele des Ultraschalls
Doppler-Ultraschall-Untersuchung vor der Operation AVF, um so die Basis-Ebene Erkenntnisse, die mit postoperativen Befunde verglichen werden, um anatomische und physiologische Veränderungen sehen können aufnehmen durchgeführt. - Punkte der Beobachtung
Die Halsschlagader, supra-und infra-renal unteren Hohlvene (IVC) und abdominalen Aorta untersucht sowohl mit Puls-Doppler-und B-Modus. - Messungen
Verwendung des B-Modus Durchmesser jedes Gefäß gemessen wird. Darüber hinaus werden Maximalgeschwindigkeit (systolische Spitzengeschwindigkeit in Arterien) und Wellenformen in jeder der Messpunkte oben beschrieben aufgezeichnet.
3. Operative Verfahren
- Maus Vorbereitung
Bereiten Sie die Einstichstelle mit einem Antiseptikum und weiterhin angemessene aseptische Technik bei der Operation einschließlich der Verwendung eines Operationstuch, sterile Handschuhe und Instrumente etc. - Laparotomie
Mittellinie Bauchschnitt ist f gemachtrom unteren Rand der Leber bis knapp über dem Schambein. - Die Exposition der Aorta und IVC.
Eine Aufrollvorrichtung eingesetzt und alle Eingeweide werden aus der Bauchhöhle gezogen, um die rechte Seite und gehalten eingewickelt in Gaze mit Kochsalzlösung eingeweicht. Präparieren Sie die Membran, die das Retroperitoneum und unteren Dickdarm verbindet Großansicht der Aorta und der IVC bekommen. Üben Sie Druck auf die Blase, wenn es erweitert und bekommt in Weg. - Exposition der Einstichstelle
Einstichstelle wird zwischen der Hälfte bis drei Viertel der Distanz sein von links Nierenvene zu Aortenbifurkation. (Abbildung 1) Präparieren Sie den linken Rand der Aorta, so dass es punktiert werden können. Beachten Sie, dass die Aorta etwa 45 Grad hinter der IVC positioniert ist, und es muss nach hinten neben dem linken seziert werden. (Abbildung 2) Der wichtigste Punkt dieser Operation ist nicht zwischen der Aorta und IVC sezieren. Halten Sie weit weg von ihnen. - Exposure der Klemme Website des AORta
Präparieren Sie die infrarenalen Aorta aus den umliegenden Geweben. Achten Sie darauf, die IVC auf der linken und links Nierenvenen mit seinen Nebenflüssen auf der rechten Seite zu verletzen. - Spannen der Aorta
Spannen Sie den proximalen Aorta durch Anlegen Mikrochirurgie Clips. - Rotation der Aorta
Durch Ergreifen des Bindegewebes um die Aorta, drehen die Aorta, so dass die Punktion von leicht dorsale Seite der Aorta (2) hergestellt werden kann. - Die Punktion der Aorta bis zur IVC
Halten Sie die Aorta in einer gedrehten Position, Punktion der Aorta bis zur IVC mit einer 25 G Nadel. (Abbildung 2) Wenn dies gelingt, kann die Nadel durch die dünne Wand IVC gesehen werden. - Hämostase
Durch Ziehen der retroperitonealen Gewebe, einschließlich der Muskeln, wickeln Sie die Einstichstelle der Aorta. Nicht komprimieren die Aorta gegen die IVC, wie es wolle Gerinnsel die AVF (Abbildung 3). - De-Klemmen der Aorta
Nach Bestätigungder primären Hämostase, de-klemmen die Aorta. Zusätzliche Blutungen auftreten, aber es kann mit weiteren Kompression vorstehend beschrieben, gestoppt werden. Nach de-Klemmung kann arterielle Blut gesehen, das in den IVC statt dunkel venösen Blutfluss werden. - Schließung des Bauches
Bringen Sie die Eingeweiden in seiner natürlichen Position und schließen Sie den Bauch.
4. Post-operative Verfahren
- Post-operative Betreuung
Nach Schließung des Bauches wird Isofluran gestoppt. Post-operative Versorgung einschließlich Analgesie und Wundversorgung wird in Übereinstimmung mit den Anweisungen von Institutional Animal Care und Use Committee empfohlen angewendet. Für Analgesie verwenden wir Buprenorphin bei 0,1 mg / kg alle 12 h intrasmuscularly für 24 Stunden nach den chirurgischen Eingriffen. - Post-operative Ultraschall
Am ersten Tag nach der Operation wird Doppler-Ultraschall durchgeführt, um die AVF zu bestätigen. Darüber hinaus werden andere Variablen gemessen, um die Änderungen von der präoperativen überprüfenWerte.
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Ergebnisse
Nach dem Training, ist das Überleben am ersten postoperativen Tag in der Regel über 95%; bei postoperativen Tag 7 war die Überlebensrate 91,3% Abbildungen 1 und 2 zeigen die ideale Einstichstelle in koronalen und Querschnitte;. Platzierung der Punktion Website ist entscheidend für die Erzielung guter Überleben ohne übermäßige Blutung. Intra-operative Todesfälle und frühen postoperativen Todesfälle sind in der Regel aufgrund von Blutungen. Dies neigt dazu, mit übermäßiger Dissektion zwischen der Aorta un...
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Diskussion
Es gibt mehrere Berichte, die AVF beschrieben wurden an Ratten, einschließlich femoralis AVF, 6, 7 Halsschlagader zu AVF 8 und aorto-Kava AVF Halsschlagader. 9, 10 Die Ratte ist um ein Mehrfaches größer als die Maus, die einen leichteren Chirurgie an der Ratte im Vergleich zu die Maus. Um dennoch die Vorteile der Maus genetischen Stämme und Varianten, das Verfahren muss erweitert werden, um Maus-Modellen erweitert werden. Mehrere bisher veröffentlichten Berichte führte die AVF-Modell bei...
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Danksagungen
Diese Arbeit wurde zum Teil durch die National Institutes of Health Zuschuss R01-HL095498 sowie mit den Ressourcen und der Nutzung von Einrichtungen an der VA Healthcare System Connecticut, West Haven, CT unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Vevo 770 Ultraschallgerät | Visualsonics | 20-60 Mhz Scankopf; RMV-704 | |
| Gefäßklemme | Roboz Chirurgisches Instrument Co. | RS-5424 | |
| Klemmzange zum Anlegen | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| 25 Gauge Nadel | Becton Dickinson | BD PrecisionGlide Nadel 25G x 7/8 #305124 |
Referenzen
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Nachdrucke und Genehmigungen
