Die Myofibroblasten ist ein einfluss Stromazellen des Magen-Darm-Trakt, die wichtige physiologische Prozesse in normalen und Krankheitszustände regelt. Wir beschreiben eine Technik, die für die Isolierung von primären Myofibroblasten aus Maus und menschlichen Dickdarmgewebe, das für die in vitro Experimente verwendet werden können, ermöglicht.
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Methodenartikel
Isolierung von Primär Myofibroblasten aus Maus und Mensch Colon Tissue
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Myofibroblasten eine Stromazellen des Magen-Darm-Trakt (GI), die gewonnen hat beträchtliche Aufmerksamkeit für seine kritische Rolle in vielen Funktionen GI. Während mehrere Myofibroblasten Zelllinien sind im Handel erhältlich, diese Zellen in vitro zu untersuchen, Forschungsergebnisse aus einer Zelllinie, experimentelle Zellkulturbedingungen ausgesetzt haben inhärente Beschränkungen aufgrund der übermäßig reduktionistischen Art der Arbeit. Einsatz von Primär Myofibroblasten bietet einen großen Vorteil in Bezug auf die Bestätigung in einer Zelllinie identifiziert experimentellen Befunde. Isolierung von primären Myofibroblasten aus einem Tiermodell erlaubt die Untersuchung von Myofibroblasten unter Bedingungen, die stärker nachzuahmen der Krankheitszustand untersucht. Isolation von Primär-Myofibroblasten aus menschlichen Dickdarmgewebe bietet wohl die wichtigsten experimentellen Daten, da die Zellen kommen direkt von Patienten mit der Grunderkrankung. Wir beschreiben eine etablierte Technik, die u seintilized Primär Myofibroblasten sowohl aus Maus und Mensch Dickdarmgewebe zu isolieren. Diese isolierten Zellen wurden charakterisiert, um alpha-smooth muscle Aktin und Vimentin-positiven und-negativen Desmin, im Einklang mit subepithelialen Myofibroblasten Darm sein. Primär Myofibroblasten Zellen in Zellkultur gezüchtet und für experimentelle Zwecke über eine begrenzte Anzahl von Durchgängen verwendet werden.
Einleitung
Die Regelung der Funktionstrakt gastrointestinale (GI) ist mit komplexen, dynamischen Wechselwirkungen zwischen der Schleimhautschicht und der zugrunde liegenden Mesenchym. Diese Interaktionen dienen in der Regel, um die Homöostase aufrecht zu erhalten, kann aber auch auf die Entwicklung von Krankheitszuständen führen, unter pathologischen Bedingungen ein. Myofibroblasten sind eine Subpopulation von Stromazellen an der Epithelschicht, die in einer Umgebung mit parakrin Zell-Subpopulationen, um eine Reihe von kritischen Prozessen, die GI-Trakt Schleimhautregeneration, Reparatur und Fibrose 2 einschließen, regeln, welcher unterhalb kommunizieren. ....
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Protokoll
1. Erhalten Colon Tissue
Maus
Ein Protokoll zum Tierversuch durchzuführen, detailliert die Gründe und Ziele der Forschung, vorgelegt und von unserem institutionellen Amt für Tierforschung Aufsicht genehmigt wurde.
- Euthanize die Maus mit inhalativen Isofluran durch Genickbruch folgte.
- Machen Sie einen ventralen Mittellinienschnitt, Einfahren der Dünndarm entfernt und Identifizierung der Doppelpunkt. Fahren Sie die Blase und Gebärmutter (falls vorhanden), die seitlich und Identifizierung des Schambeins und schneiden Sie es mit einer feinen Schere, um den Mastdarm aus.
- Präparieren Sie ....
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Ergebnisse
Einmal isoliert, primäre menschliche Myofibroblasten in Zellkultur gezüchtet und über eine begrenzte Anzahl von Durchgängen verwendet werden (bis zu Passage 4). Diese Zellen werden als ein-smooth muscle Aktin und Vimentin positiv gekennzeichnet, und Desmin-negativ (Abbildung 1A), im Einklang mit Darm subepithelialen Myofibroblasten 5,7. Sie haben auch eine charakteristische stern Morphologie (Fig. 1B). Primär Myofibroblasten kann dann verwendet werden, um eine Zelllinie ident.......
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Diskussion
Die allgemeine Technik ist ähnlich wie bei der Verwendung von entweder Maus-oder menschlichen Kolon. Diese Technik kann auch verwendet werden, um Myofibroblasten aus dem Dünndarm zu isolieren. Konkrete Angaben zur Isolierung von Myofibroblasten aus 1. Maus und 2. menschlichen Dickdarm werden nachstehend erörtert.
1. Maus Colon
Spülung des Dickdarms Maus wird durch Anbringen eines 4 in 16 g Popper stumpfendig Nadel an einem Ende des Dickdarms erleichtert. Dies hilft .......
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Offenlegungen
Autoren haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde vom National Institutes of Health Grants 5KO8DK085136-02 bis JY unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name des Reagenzes | Firma | Katalognummer | Bemerkungen (optional) |
| Dispase I | Invitrogen/GIBCO | #17105-041 | |
| Kollagenase D | Roche | #1 088 858 | |
| 4 in, 16 G Popper stumpfe Nadel | Fisher | #14-825-16K |
Referenzen
- Armaka, M., et al. Mesenchymal cell targeting by TNF as a common pathogenic principle in chronic inflammatory joint and intestinal diseases. J. Exp. Med. 205, 331-337 (2008).
- Powell, D. W., et al. Paracrine cells important in healt....
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Nachdrucke und Genehmigungen
