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Aufgrund der offenen Plastizität des sich entwickelnden Gehirns, ist es wichtig, dass die experimentellen Verfahren, die früheren Erfahrungen werden sorgfältig überprüft und wird versucht, für alle dazwischenliegenden Variablen zu steuern. Aus diesem Grund wird ein Quer Wurf-Design während der taktile Stimulation Verfahren eingesetzt, um sicherzustellen, dass Welpen erhalten ähnliche Erfahrungen in allen anderen Bereichen der Entwicklung. Darüber hinaus ist es auch wichtig, dass mehrere Jungtiere aus mehreren Würfen sind für die Analyse ausgewählt, um die Möglichkeit, dass Effekte resultieren aus einer Vorspannung in einem einzigen Wurf Welpen oder zu vermeiden.
Taktile Stimulation wird angenommen, dass die natürlich vorkommende mütterliche Verhalten nachahmen, Lecken und Putzen, die vermutlich von Vorteil für Nachkommen Entwicklung zu sein. Obwohl frühere Forschung hat betont, die erste Woche des Lebens (P0-P7), um eine kritische Periode für Lecken und Putzen 16 sein, nach 18 Tagen der ta die schiere Größe der Veränderung identifiziertctile Stimulation kann bedeuten, dass, obwohl sensiblen Zeiten gibt, ist längere Belichtungs überlegen. Es ist auch wichtig zu beachten, dass die Jungtiere Empfangen taktile Stimulation in diesem experimentellen Paradigma erleben auch lecken und Pflege von ihren Müttern, damit die taktile Stimulation ist zusätzlich zu den normalen Stimulation durch die Mutter verabreicht. Schließlich muss man sich auch bewusst Region abhängige Änderungen. Obwohl taktile Stimulation während der Entwicklung erhöht dendritischen Komplexität im präfrontalen Kortex, bedeutet dies nicht garantieren, dass strukturelle Veränderungen dieser Art wird sich in allen Hirnregionen sein. Es ist möglich, dass neuronale Morphologie in anderen Hirnregionen wie dem parietalen Kortex, würde in einem auffallend andere Art und Weise auf die gleiche Erfahrung zu reagieren. , Weil die taktile Stimulation Verfahren ist leicht verwaltet und stellt keine Gefahr für den Nachwuchs oder Absetzbecken, die das Potenzial, als ein wertvolles Werkzeug für viele Forschungsstudien zur Verbesserung der Entwicklung zum Ziel zu dienen hat jedochal Ziele.
Bezüglich Golgi-Cox-Färbung von Hirngewebe sind die entscheidenden Schritte zur erfolgreichen Visualisierung von neuronalen Zellen, wie folgt: 1) Es muss eine ausreichende Durchblutung des Gehirns mit Kochsalzlösung sein. Falsche oder unzureichende Perfusion der Hirngewebe führt zu Blutgefäß-Artefakte, die es schwierig, tatsächlich neuronale Zellen sichtbar durch das Labyrinth der Blutgefäße, aber auch kompliziert die Fähigkeit, Neuronen zu fotografieren Malerei zu machen. 2) perfundierten Gehirn sollte in Golgi-Cox-Lösung und Saccharose-Lösung im Dunkeln gelagert werden. Speichern des Hirngewebe im Dunkeln reduziert die Hintergrundfärbung des Gewebes, was wiederum die Wahrscheinlichkeit des erfolgreichen Visualisierung Qualität neuronalen Zellen. 3) Das Hirngewebe ist in Saccharose-Lösung nach der 14 Tage Lagerung im Golgi-Cox-Lösung gespeichert. Wenn das Gewebe in 30% Saccharose-Lösung für 2-5 Tage eingetaucht, sind die Köpfe biegsamer bewegend und Reißen der Abschnitte verhindert, wennSchneiden. Es ist wichtig, Hirngewebe von der Saccharose-Lösung für eine erhöhte Zeitperioden verbleibenden verhindern (es sei denn, die Saccharoselösung kontinuierlich durch frische Lösung ersetzt), weil längerer Lagerung in Saccharose verringert die Qualität der Färbung. 4) Schließlich, sobald Folien wurden gebeizt und Abdeckung gerutscht, sollten sie genügend Zeit, um vor der Anzeige mit einem Mikroskop trocknen gegeben werden. Wenn Folien dürfen nicht ausreichend trockene Luft, kann das Gewebe zu verdunkeln, wodurch erfolgreiche Visualisierung von kortikalen Neuronen.
Stabile Änderungen in psychologische Funktion und Verhaltens-Reaktionen, die in Reaktion auf Erfahrungen auftreten, werden vermutlich durch Reorganisation neuronaler Morphologie und synaptischer Verbindungen 17 erleichtert werden. Da diese Strukturänderungen eine messbare Ressource für erfahrungsabhängige Plastizität, ist die Verwendung eines zuverlässigen Färbeverfahren wichtig. Diese Vibratoms basierend Golgi-Cox Färbeverfahren bietet zuverlässige Fleckening von feinen Ästen und dendritischen Dornen, die nicht offensichtlich sein, kann mit anderen Protokollen wie Celloidin-Einbettung. Die Besonderheit des Golgi-Cox-Verfahren beruht auf seiner Fähigkeit, nur einen kleinen Teil der neuronalen Elemente (1-10%), die Rückverfolgung einzelner Neuronen für große Entfernungen ermöglicht färben. Trotz der Tatsache, dass nur ein kleiner Bruchteil der Neuronen mit dem Farbstoff imprägniert, Zellen, sichtbar gemacht werden, halten alle Funktionen, einschließlich Zellkörper, Dendriten, Axonen und Dendriten. Wenn darüber hinaus das Färbungsverfahren korrekt durchgeführt wird, werden die gefärbten Zellen zeichnen sich klar und deutlich gegen einen transparenten Hintergrund, weil andere kortikalen Strukturen bleiben ungefärbt und transparent. Aufgrund der Erkenntnis, dass die anhaltende Veränderungen in der äußeren Funktionieren muß die Plastizität des Nervensystems, dh die Fähigkeit von Neuronen, ihre Struktur und Konnektivität zu ändern, stellt die Golgi-Cox Färbeverfahren Forscher mitzuverlässige Technik zu visualisieren und quantifizieren diese Plastizität.