Erratum: Protokolle zur Probenvorbereitung, Bildgebung und Analyse für die Knife-edge Scanning Microscopy

Zusammenfassung

Es wurde eine Korrektur zu Präparations-, Bildgebungs- und Analyseprotokollen für die Klingenrand-Scanning-Mikroskopie vorgenommen. Wichtige Änderungen wurden am Nissl-Färbeprotokoll durchgeführt.

Zusammenfassung

Es wurde eine Korrektur zu Probenvorbereitung, Abbildung und Analyseprotokolle für die Kanten-Scanning-Mikroskopie vorgenommen. Wichtige Änderungen wurden am Nissl-Färbeprotokoll durchgeführt.

Protokoll

Es wurde eine Korrektur an Probenvorbereitung, Abbildung und Analyseprotokolle für die Messerkanten-Scanning-Mikroskopie vorgenommen. Das Nissl-Färbeprotokoll wurde modifiziert von:

2. Probenvorbereitung: Nissl

1. Die Maus wird mittels intraperitoneal injizierter Ketamin- und Xylazinlösung tief anästhesiert und anschließend transkardial mit 50 mL Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung bei Raumtemperatur (pH 7,4) perfundiert, gefolgt von 250 mL 10 % neutral gepufferter Formalinlösung bei Raumtemperatur (pH 7,4) und schließlich mit 3,0 cm³ unverdünnter Tusche.
2. Die Ganzkörperperfusion mit Kochsalzlösung und Fixativ ist notwendig, um das Blut aus dem kardiovaskulären System zu entfernen und die Gewebe zu fixieren. Die Perfusion mit Tusche ist erforderlich, um die Gefäßstruktur des kardiovaskulären Systems vollständig zu füllen.
3. Das resultierende Gehirn wird anschließend durch eine Reihe von konzentrierungssteigernden Ethylalkohollösungen (25 %–100 %) dehydriert und dann gemäß dem Protokoll in 1.8–1.9 oben in Araldit-Kunststoff eingebettet. Falls LR-Weiß das Einbettmedium ist, wird dem Protokoll in 1.10 oben gefolgt.
4. Die Maus wird mittels intraperitoneal injizierter Ketamin- und Xylazinlösung tief anästhesiert und anschließend transkardial mit 50 mL Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung bei Raumtemperatur (pH 7,4) perfundiert, gefolgt von 250 mL 10 % neutral gepufferter Formalinlösung bei Raumtemperatur (pH 7,4) und schließlich mit 3,0 cm³ unverdünnter Tusche.
5. Die Ganzkörperperfusion mit Kochsalzlösung und Fixativ ist notwendig, um das Blut aus dem kardiovaskulären System zu entfernen und die Gewebe zu fixieren. Die Perfusion mit Tusche ist erforderlich, um die Gefäßstruktur des kardiovaskulären Systems vollständig zu füllen.
6. Das resultierende Gehirn wird anschließend durch eine Reihe von konzentrierungssteigernden Ethylalkohollösungen (25 %–100 %) dehydriert und dann gemäß dem Protokoll in 1.8–1.9 oben in Araldit-Kunststoff eingebettet. Falls LR-Weiß das Einbettmedium ist, wird dem Protokoll in 1.10 oben gefolgt.
7. Die Maus wird mittels intraperitoneal injizierter Ketamin- und Xylazinlösung tief anästhesiert und anschließend transkardial mit 50 mL Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung bei Raumtemperatur (pH 7,4) perfundiert, gefolgt von 250 mL 10 % neutral gepufferter Formalinlösung bei Raumtemperatur (pH 7,4) und schließlich mit 3,0 cm³ unverdünnter Tusche.
8. Die Ganzkörperperfusion mit Kochsalzlösung und Fixativ ist notwendig, um das Blut aus dem kardiovaskulären System zu entfernen und die Gewebe zu fixieren. Die Perfusion mit Tusche ist erforderlich, um die Gefäßstruktur des kardiovaskulären Systems vollständig zu füllen.
9. Das resultierende Gehirn wird anschließend durch eine Reihe von konzentrierungssteigernden Ethylalkohollösungen (25 %–100 %) dehydriert und dann gemäß dem Protokoll in 1.8–1.9 oben in Araldit-Kunststoff eingebettet. Falls LR-Weiß das Einbettmedium ist, wird dem Protokoll in 1.10 oben gefolgt.

zu:

2. Probenvorbereitung: Nissl

1. Dieses Protokoll folgt eng dem Protokoll von Mayerich et al.⁷
2. Die Maus wird mittels intraperitonealer Injektion von Ketamin und Xylazin tief anästhesiert und anschließend transkardial mit 50 mL phosphatgepufferter Salzlösung bei Raumtemperatur (pH 7,4) und danach mit 250 mL kalter 4%iger, phosphatgepufferter Paraformaldehydlösung (pH 7,4) perfundiert.
3. Anschließend wird die Maus mit 100 mL einer Lösung von 0,1% Thioninfarbstoff in entionisiertem Wasser perfundiert und der Körper für 24 Stunden in den Kühlschrank (4 °C) gestellt.
4. Nach 24 Stunden wird das Gehirn aus der Schädelkalotte entfernt und in eine frische Lösung von 0,1% Thionin gegeben, die sieben Tage lang bei 4 °C belassen wird. Die lange Dauer dieses Verfahrens diente der Sicherstellung einer vollständigen Infiltration des Thionins in die Blockpräparation.
5. Das Gehirn wird danach entfärbt und über einen Zeitraum von 6 Wochen durch eine abgestufte Reihe von Ethanol-Lösungen dehydriert, beginnend mit 50% Ethanol in Wasser bis hin zu 100% Ethanol. Die Ethanolwechsel von 50% auf 70% werden im Kühlschrank (4 °C) aufbewahrt, alle Wechsel mit Ethanolkonzentrationen über 70% erfolgen bei Raumtemperatur.
6. Nach drei Wechseln von Aceton (2–4 Tage in jeder Lösung bei Raumtemperatur) wird das Gehirn anschließend gemäß dem Protokoll in den Abschnitten 1.8–1.9 in Araldit-Kunststoff eingebettet. Falls LR-Weiß das Einbettmedium ist, wird dem Protokoll in Abschnitt 1.10 oben gefolgt.