Imaging Durch die Puppenhülle von<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Mark B Keroles; Sonya K Dusseault; Chuchu Liu; Masood R Mohammed; Christy M Vadakkan; Jessica H Amiel; Samantha N Abel; Elena R Bensoussan; Benjamin L Russell; James Baker

doi:10.3791/51239

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Methodenartikel

Imaging Durch die Puppenhülle von

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DOI:

10.3791/51239

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23. Januar 2014

Mark B Keroles¹ , Sonya K Dusseault¹ , Chuchu Liu¹ , Masood R Mohammed¹ , Christy M Vadakkan¹ , Jessica H Amiel¹ , Samantha N Abel¹ , Elena R Bensoussan¹ , Benjamin L Russell¹ , James Baker¹

¹Department of Biology, University of Miami

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Papier zeigt die Verwendung eines schnellen konfokalen Mikroskop, um Bildzelle Verhalten direkt durch die Puppenhülle. Nach dem Verlassen der Puppenhülle intakt ist, erlaubt dieses Verfahren die Beobachtung und Messung von dynamischen Zellprozesse im Stadium der Drosophila-Entwicklung, die schwer direkt zu studieren.

Zusammenfassung

Der langjährige Einsatz von Drosophila als Modell für Zell-und Entwicklungsbiologie hat eine Reihe von Tools ergab. Gemeinsam haben diese Techniken Analyse von Zell-und Entwicklungsbiologie aus einer Vielzahl von methodischen Blickwinkeln ermöglicht. Echtzeit-Bildgebung ist eine neue Methode zur Beobachtung dynamischer Zellprozesse, wie Zellteilung oder Zellbeweglichkeit. Nachdem in uncharacterized mutmaßlichen Zellzyklus-Proteine wurde es wichtig, Mitose in situ zu beobachten mit Live-Aufnahmen isoliert Mutationen. Die meisten Live-Imaging-Studien in Drosophila haben sich auf die embryonalen Stadien, die wegen ihrer geringen Größe und optische Klarheit zugänglich Manipulation und Beobachtung sind konzentriert. In diesen Phasen des Zellzyklus wird jedoch ungewöhnlich, dass es eine oder beide der Spalt Phasen fehlt. Im Gegensatz dazu haben Zellen des Puppen Flügel von Drosophila eine typische Zellzyklus und eine Zeit des schnellen Mitose sich über etwa 20 Stunden der Puppenentwicklung zu unterziehen. Es ist leicht zu iekb.html und zu isolieren, Puppen der geeigneten Stadium der Mitose in situ zu fangen. Montage intakt Puppen, sofern die beste Kombination aus Handhabbarkeit und Haltbarkeit während der Bildgebung, so dass Experimente für mehrere Stunden mit minimalen Auswirkungen auf Zell-und Tier Rentabilität führen. Das Verfahren ermöglicht die Beobachtung der Merkmale so klein wie oder kleiner als, fly-Chromosomen. Anpassung der Einstellungen des Mikroskops und die Details der Montage erlaubt Verlängerung der Herstellung von Membran Dynamik benachbarter Zellen und fluoreszenzmarkierte Proteine, wie Tubulin visualisieren. Diese Methode funktioniert für alle getesteten fluoreszierende Proteine und Submikrometerbereich Funktionen über eine Vielzahl von Zeitskalen zu erfassen. Während an der äußeren 20 um der Puppe mit einem herkömmlichen konfokalen Mikroskop beschränkt ist, kann dieser Ansatz zur Beobachtung Protein und Zelldynamik im Puppen Geweben in vivo allgemein bei der Untersuchung von Zell-und Entwicklungsbiologie in diesen Geweben nützlich sein.

Einleitung

Der Essig, Drosophila melanogaster, ist ein gut etabliertes Modell für die Untersuchung viele Aspekte der Biologie. Drosophila Forschung hat eine reiche Geschichte von genetischen Experimenten, die anspruchsvolle Formen der Genmanipulation einschließlich der Expression, Knockdown und Mutation ermöglicht. Mit dem Aufkommen des fluoreszierenden Proteins Etiketten, hat dieses Repertoire erweitert, um Untersuchungen von Zellen und Proteinen in lebenden Tieren umfassen. Die Fliegenembryo ist ein ausgezeichnetes System für solche Studien, wie sie ist klein und optisch klar so tief, hochauflösende Bildgebung in vivo ^03.01. Andere ....