Eine modifizierte Methode zur Heterotope Maus Herz-Transplantation

Zusammenfassung

Es wird eine Technik für das mikrochirurgische Verfahren zur heterotopen Transplantation von Herzen bei Mäusen demonstriert, einschließlich vereinfachter Methoden für die Spenderentnahme und die Anastomose der Empfängergefäße.

Zusammenfassung

Mäuse werden oft als Herztransplantation Spender und Empfänger in Studien der Transplantationsimmunologie aufgrund der Vielzahl von transgenen Mäusen und Reagenzien zur Verfügung eingesetzt. Eine Schwierigkeit ist aufgrund der geringen Größe des Tieres und der erheblichen technischen Herausforderungen der Mikrochirurgie in der Herztransplantation beteiligt vorgestellt. Insbesondere kann eine hohe Rate von technischen Defekt früh nach der Transplantation des Empfängers Tod und postoperative Komplikationen wie Hinterbeinlähmung oder eines nicht-schlagenden Herzens führen. Hier wird die Technik für die vollständige Maus heterotope Herztransplantation demonstriert, mit Ernten des Spenderherzens und die anschließende Implantation in eine Empfängermaus. Das Spenderherz unmittelbar nach der in-situ-Perfusion mit heparinisierter Kochsalzlösung und Kalttrennung der aufsteigenden Aorta und Lungenarterie entnommen. Der Empfänger beinhaltet die Erstellung der abdominalen Aorta und Vena cava inferior (IVC), gefolgt vonEnd-zu-Seit-Anastomose der Aorta Spender zum Empfänger Aorta unter Verwendung einer einzigen Lauf 10-0 Mikronaht und eine ähnliche Anastomose des Spenders Pulmonalarterie mit dem Empfänger IVC. Nach der Operation wird das Tier wird mit 0,6 ml physiologischer Kochsalzlösung subkutan injiziert und man ließ sie auf 37 ° C Heizkissen erholen. Die Ergebnisse aus 227 Maus Herztransplantationen sind mit einer Erfolgsrate bei 48 h 86,8% zusammengefasst. Von den 13,2% Ausfälle innerhalb 48 Stunden, 5 (2,2%) erlebt Hinterbeinlähmung, 10 (4,4%) hatten eine nicht-schlagenden Herzen durch ischämische Verletzungen und / oder Thrombose zu pfropfen, während 15 (6,6%) starben innerhalb von 48 Stunden .

Einleitung

Tiermodelle der Organtransplantation können wertvolle Informationen für die Verbesserung der Behandlung der klinischen Transplantation Patienten. Mausmodelle sind besonders nützlich für die Untersuchung der Immunmechanismus der Organtransplantatabstoßung oder Annahme durch die breite Palette von genetisch veränderten Mäusen und spezifisch für Mäuse, die nicht für andere Tiermodelle ^3.1 verfügbar sind Reagenzien. Eine Herausforderung, mit Maus-Modellen der Transplantation ist die geringe Größe der Spender und Empfänger, die erhebliche technische Fähigkeiten, um zufriedenstellende Ergebnisse zu erreichen erfordert.

Eine Technik w....

Protokoll

Vor Beginn der Experimente, die Zustimmung ihrer Animal Care Ethik-Kommission des betreffenden Institution für die geplanten Experimente. Pflegen Mäuse im Einklang mit den Anforderungen Ihrer Einrichtung. Das folgende Protokoll wurde von der Universität Sydney und Royal Prince Alfred Hospital Gremien genehmigt worden.

Vor Beginn der Operation sollten alle Geräte sorgfältig gereinigt und durch Eintauchen in 80% Ethanol sterilisiert werden. Einige Institute sehen vor dem Autoklavieren dies kann jedoch feinen mikrochirurgischen Instrumente langfristig beschädigen. Wenn möglich Verwendung sterilen Einweg-Geräte.

1. ....

Ergebnisse

Nach einer ersten Trainingszeitraum wurden 227 Fälle von Maus heterotopen Herztransplantation in unserer Gruppe analysiert. Die Erfolgsrate innerhalb der ersten 24 Stunden war 90,3% und nach 48 Stunden war 86,8%. Von den 30 (13,2%) Ausfälle innerhalb 48 Stunden, 5 (2,2%) erlebt Hinterbeinlähmung und musste eingeschläfert werden, 10 (4,4%) hatten eine nicht-schlagenden Herzen durch Transplantat Ischämie Verletzungen und / oder Thrombose, während 15 (6,6%) starben innerhalb von 48 Stunden. Einige experimentelle Transplant.......

Diskussion

Maus Herztransplantation ist eine anspruchsvolle mikrochirurgische Verfahren, die erhebliche chirurgische Geschick zu meistern erfordert. Der schwierigste Aspekt ist der kleine Durchmesser der Gefäße. Darüber hinaus ist es notwendig, den Empfängerbetriebszeit und Blutung zu begrenzen. Die Technik für Herztransplantations-Maus wurde zuerst von Corry et al. im Jahr 1973 und anschließend von Mottram et al ^12. Unsere Modifikationen umfassen die folgenden Punkte. Zum einen unmittelbaren Durchblut.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Operationsmikroskop	Leica, Heerbrugg, Schweiz	M651	10-25-fache Vergrößerung
Anästhesiegerät	Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australien	Vett3	Kann ein Gemisch aus Isofluran und Sauerstoff in die Luft abgeben
Bedienungstafel		für Baumarkt oder Büro	Dichter Kork oder Synthetik, der Pins aufnehmen
kann Heparinisierte Kochsalzlösung (5 U/ml, 4 ° C)	Pfizer, USA	FW25	In 1 ml Spritze mit 23 G Nadel auf Eis
Normale Kochsalzlösung (37 ° C)	AstraZeneca Pty Ltd, Australien	4538	In 1 ml Spritze mit 23 G Nadel auf warmem Pad
Nähte 10- Nylon, 5-0 Vicryl	Ethicon, Inc. NJ, USA	2870G/J421H
Buprenorphin (0,05 mg/kg in 0,1 ml Kochsalzlösung)	Reckitt Benckiser, Sydney, Australien		In 1 ml Spritze mit 23 G Nadel auf Eis
Ampcillin (5 mg/kg in 0,1 ml Kochsalzlösung)	Aspen, Sydney, Australien		In 1 ml Spritze mit 23 G Nadel auf Eis
Gel Foam	Pharmacia & Upjohn Co. USA	801289304	In kleine Stücke geschnitten
Hochtemperatur-Kautergerät	Medtronic, USA	8444000
Heizkissen/Rechtstemperatur	Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790
Mikrochirurgische Instrumente:	Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.,
Mikronadelhalter	Shanghai, China	WT2020
Mikroschere	"                  "	WT1020
Mikrozange (gerade Spitze)	"                  "	WA3010
Mikrozange (gebogene Spitze)	"                  "	WA3020
Micromoskito-Klemmen (1 Paar)	"                  "	W40350
Mikrogefäße atraumatische Klemmen (1 Paar)	"                  "	W40130/W40150

Lieferant