Xenopus laevis Kaulquappen schwimmen lieber auf der weißen Seite einer schwarz / weißen Tank. Dieses Verhalten wird von ihrer Vision geleitet. Basierend auf diesem Verhalten stellen wir eine einfache Test, um die visuelle Funktion der Kaulquappen zu testen.
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Methodenartikel
Eine einfache Verhaltenstest zur Prüfung von Visual Function in
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Messung der visuellen Funktion in den Kaulquappen der Frösche, Xenopus laevis, ermöglicht Screening für Blindheit in lebenden Tieren. Der optokinetische Reaktion ist eine Vision-basierte, reflexive Verhalten, das in allen getesteten Wirbeltieren beobachtet worden ist. Tadpole Augen sind klein, so wurde der Schwanz Flip Antwort als alternative Maßnahme, die einen geschulten Techniker, um die subtile Antwort aufzeichnen erfordert verwendet. Wir haben eine alternative Verhalten Assay basiert auf der Tatsache, dass Kaulquappen lieber auf der weißen Seite eines Tanks schwimmen, wenn sie in einem Behälter mit sowohl Schwarz-Weiß-Seiten angeordnet. Die hier vorgestellte Test ist eine kostengünstige, einfache Alternative, die eine Antwort, die leicht gemessen wird erstellt. Der Aufbau besteht aus einem Stativ, Webcam und verschachtelte Prüfung Tanks, in den meisten Labors Xenopus leicht verfügbar. Dieser Artikel enthält einen Film, die das Verhalten von Kaulquappen, vor und nach dem Durchtrennen des Sehnervs. Um die Funktion von einem Auge zu testen, sind wir auch Vertretreter Ergebnisse einer Kaulquappe, in dem jedes Auge unterzog Netzhaut Axotomie an aufeinander folgenden Tagen. Zukünftige Studien könnten eine automatisierte Version dieses Tests für die Prüfung der Vision von vielen Kaulquappen auf einmal zu entwickeln.
Einleitung
Xenopus laevis wurden als Modellorganismus zur Augenbildung studieren verwendet. Die Augen entwickeln schnell wachsenden Zeit in weniger als einer Woche zum Testen Gene oder Wege, die einen Einfluss auf die visuelle Entwicklung und Funktion haben. Um visuelle Funktion zu testen, hat die optokinetischen und optomotorischen Reaktion im Zebrafisch und Xenopus Kaulquappen verwendet wurde, bzw. 1,2. Da die Augen von Xenopus Kaulquappen sind relativ kleiner als Zebrafisch, dieser Test erfordert den Einsatz von Spezialgeräten und geschultes Personal, um die subtilen tail-Flip und Blickbewegungsverhalten in Xenopus zu erkennen. ....
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Protokoll
Tierpflege
Die Xenopus laevis Kaulquappen in dieser Studie verwendet wurden nach Verfahren, die von Upstate Medical University IACUC und dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren genehmigt angebaut, aufgezogen und behandelt.
. Ein Pre-Verhalten Setup: Kaulquappen
- Erhalten befruchteten Xenopus-Embryonen aus einer handelsüblichen Quelle oder in vitro zu befruchten Oozyten, wie oben beschrieben 6.
- Zeigen Blastula zu Neuralplatte Embryonen bei 18 ˚ C in 60 mm Petrischalen mit 0,1 X MMR [10 X Marc Geändert Ringer-(MMR)-Lösung Lager (10 mM MgC....
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Ergebnisse
Frühere Berichte haben gezeigt, dass Xenopus Kaulquappen premetamorphic lieber auf der weißen Seite einer schwarz / weißen Tank schwimmen und nannte diesen Test, der Hintergrundfarbe Vorlieben Assay 3 Wir haben diesen Test, um die visuelle Funktion eines Augen von Kaulquappen in testen geändert weniger als eine Woche. Auf diese Weise kann die Augen für die histologische Untersuchung gesammelt werden.
Wir zeigen hier, wie die Reaktion durch visuelle Hinweise ist. In
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Diskussion
Wir berichten hier über eine einfache Vision geführte Verhaltenstest, die leicht in weniger als einer Woche durch minimal geschulte Laborpersonal durchgeführt werden können. Während andere Tests erfordern spezielle Ausrüstung und Know-how in das Verhalten der Tiere, ermöglicht dieser Test ein Schnelltest der visuellen Funktion zu bestimmen. Ein anderer Verhaltenstest, der Visual Avoidance Assay wurde entwickelt, um zu bestimmen, wie Tectum trägt zur visuellen Wahrnehmung in Xenopus 10. Dieser Assay m.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus den National Institutes of Health: EY015748, EY017964 (MEZ) und EY019517 (ASV). Diese Arbeit wurde von der Forschung unterstützt, um Blindheit gebundene Zuwendung an die Augenklinik und die Lions des Zentral New York verhindern. Wir möchten auch unseren Tiertechniker, Matthew Mellini, für seine hervorragende Betreuung der Tiere und für die Intensivierung in in diesem Video Star danken.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1/2 Gallone Flex-Tank mit Abdeckung | eNasco | SB19271M | Größe: 5-3/8" x 7" x 3-3/4" |
| Schwarzes Isolierband | |||
| Weißes Seidenpapier | |||
| Großer Impfplattenteller | VWR | 50809-022 | Größe: Durchmesser 114,3 x & nbsp; H 76,2 mm (4 1/2 x 3") |
| Durasorb Unterlage | VWR | 82004-836 | Größe: 43,2 x 60,1 cm (17 x 24") |
| Kimwipe | Krackeler Scientific, Inc. | 1945-34155-CS | |
| Standardstativ | Verschiedenes iSight | ||
| Kamera oder Webcam | Apple | M8817LL/A | Gut für größere Kaulquappen, aber kleine sind schwer zu sehen |
| Tragbarer Computer | Apple/PC | Verschiedenes | Wir haben ein 13" MacBook, 2 GHz Intel Core 2 Duo mit MacOSX Lion 10.7.5 |
| MiniDV Handycam Camcorder | SONY | DCR-HC42 | verwendetVerbunden über Firewire mit dem Computer mit einem 6-adrigen und 4-adrigen alpha FireWire 400 |
| Handycam-Station | SONY | DCRA-C121 | Dies kann zum Verbinden von Firewire mit der Kamera verwendet werden |
| QuickTime Player Software | Quicktime | Version 10.1 | |
| 26 G Nadel (5/8" Länge) | VWR | BD305115 | |
| Dumont #5 Pinzette | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| Einwegartikel | |||
| Gentamicinsulfat [50 mg/ml] | Fisher Scientific | 17-528Z | Gelagert bei RT |
| Sylgard 184 Silikonelastomer | Fisher Scientific | NC9644388 | |
| Instant ocean | Doctors Foster and Smith | CD-116528 | Stammlösung = 100 g/L gelagert bei RT |
| Natriumphosphat zweibasisch | Sigma Aldrich | S0876 | Stammlösung = 0,4 M gelagert bei RT |
| In vitro befruchtete Embryonen | eNasco | LM00490MX | 100 Embryonen/Einheit |
Referenzen
- Maurer, C. M., Huang, Y. Y., Neuhauss, S. C. Application of zebrafish oculomotor behavior to model human disorders. Rev Neurosci. 22 (1), 5-16 (2011).
- Solessio, E., Scheraga, D., Engbretson, G. A., Knox, B. E., Barlow, R. B. Circadian modulation of temporal properti....
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Nachdrucke und Genehmigungen
