Eine einfache Verhaltenstest zur Prüfung von Visual Function in Xenopus laevis

Summary

Xenopus laevis Kaulquappen schwimmen lieber auf der weißen Seite einer schwarz / weißen Tank. Dieses Verhalten wird von ihrer Vision geleitet. Basierend auf diesem Verhalten stellen wir eine einfache Test, um die visuelle Funktion der Kaulquappen zu testen.

Abstract

Die Messung der visuellen Funktion in den Kaulquappen der Frösche, Xenopus laevis, ermöglicht Screening für Blindheit in lebenden Tieren. Der optokinetische Reaktion ist eine Vision-basierte, reflexive Verhalten, das in allen getesteten Wirbeltieren beobachtet worden ist. Tadpole Augen sind klein, so wurde der Schwanz Flip Antwort als alternative Maßnahme, die einen geschulten Techniker, um die subtile Antwort aufzeichnen erfordert verwendet. Wir haben eine alternative Verhalten Assay basiert auf der Tatsache, dass Kaulquappen lieber auf der weißen Seite eines Tanks schwimmen, wenn sie in einem Behälter mit sowohl Schwarz-Weiß-Seiten angeordnet. Die hier vorgestellte Test ist eine kostengünstige, einfache Alternative, die eine Antwort, die leicht gemessen wird erstellt. Der Aufbau besteht aus einem Stativ, Webcam und verschachtelte Prüfung Tanks, in den meisten Labors Xenopus leicht verfügbar. Dieser Artikel enthält einen Film, die das Verhalten von Kaulquappen, vor und nach dem Durchtrennen des Sehnervs. Um die Funktion von einem Auge zu testen, sind wir auch Vertretreter Ergebnisse einer Kaulquappe, in dem jedes Auge unterzog Netzhaut Axotomie an aufeinander folgenden Tagen. Zukünftige Studien könnten eine automatisierte Version dieses Tests für die Prüfung der Vision von vielen Kaulquappen auf einmal zu entwickeln.

Introduction

Xenopus laevis wurden als Modellorganismus zur Augenbildung studieren verwendet. Die Augen entwickeln schnell wachsenden Zeit in weniger als einer Woche zum Testen Gene oder Wege, die einen Einfluss auf die visuelle Entwicklung und Funktion haben. Um visuelle Funktion zu testen, hat die optokinetischen und optomotorischen Reaktion im Zebrafisch und Xenopus Kaulquappen verwendet wurde, bzw. ^1,2. Da die Augen von Xenopus Kaulquappen sind relativ kleiner als Zebrafisch, dieser Test erfordert den Einsatz von Spezialgeräten und geschultes Personal, um die subtilen tail-Flip und Blickbewegungsverhalten in Xenopus zu erkennen. ....

Protocol

Tierpflege

Die Xenopus laevis Kaulquappen in dieser Studie verwendet wurden nach Verfahren, die von Upstate Medical University IACUC und dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren genehmigt angebaut, aufgezogen und behandelt.

. Ein Pre-Verhalten Setup: Kaulquappen

1. Erhalten befruchteten Xenopus-Embryonen aus einer handelsüblichen Quelle oder in vitro zu befruchten Oozyten, wie oben beschrieben ^6.
2. Zeigen Blastula zu Neuralplatte Embryonen bei 18 ˚ C in 60 mm Petrischalen mit 0,1 X MMR [10 X Marc Geändert Ringer-(MMR)-Lösung Lager (10 mM MgC....

Results

Frühere Berichte haben gezeigt, dass Xenopus Kaulquappen premetamorphic lieber auf der weißen Seite einer schwarz / weißen Tank schwimmen und nannte diesen Test, der Hintergrundfarbe Vorlieben Assay ³ Wir haben diesen Test, um die visuelle Funktion eines Augen von Kaulquappen in testen geändert weniger als eine Woche. Auf diese Weise kann die Augen für die histologische Untersuchung gesammelt werden.

Wir zeigen hier, wie die Reaktion durch visuelle Hinweise ist. In

Discussion

Wir berichten hier über eine einfache Vision geführte Verhaltenstest, die leicht in weniger als einer Woche durch minimal geschulte Laborpersonal durchgeführt werden können. Während andere Tests erfordern spezielle Ausrüstung und Know-how in das Verhalten der Tiere, ermöglicht dieser Test ein Schnelltest der visuellen Funktion zu bestimmen. Ein anderer Verhaltenstest, der Visual Avoidance Assay wurde entwickelt, um zu bestimmen, wie Tectum trägt zur visuellen Wahrnehmung in Xenopus ^10. Dieser Assay m.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1/2 Gallone Flex-Tank mit Abdeckung	eNasco	SB19271M	Größe: 5-3/8" x 7" x 3-3/4"
Schwarzes Isolierband
Weißes Seidenpapier
Großer Impfplattenteller	VWR	50809-022	Größe: Durchmesser 114,3 x & nbsp; H 76,2 mm (4 1/2  x  3")
Durasorb Unterlage	VWR	82004-836	Größe: 43,2 x 60,1 cm (17 x 24")
Kimwipe	Krackeler Scientific, Inc.	1945-34155-CS
Standardstativ		Verschiedenes iSight
Kamera oder Webcam	Apple	M8817LL/A	Gut für größere Kaulquappen, aber kleine sind schwer zu sehen
Tragbarer Computer	Apple/PC	Verschiedenes	Wir haben ein 13" MacBook, 2 GHz Intel Core 2 Duo mit MacOSX Lion 10.7.5
MiniDV Handycam Camcorder	SONY	DCR-HC42	verwendetVerbunden über Firewire mit dem Computer mit einem 6-adrigen und 4-adrigen alpha FireWire 400
Handycam-Station	SONY	DCRA-C121	Dies kann zum Verbinden von Firewire mit der Kamera verwendet werden
QuickTime Player Software	Quicktime	Version 10.1
26 G Nadel (5/8" Länge)	VWR	BD305115
Dumont #5 Pinzette	Fine Science Tools	11295-10
Einwegartikel
Gentamicinsulfat [50 mg/ml]	Fisher Scientific	17-528Z	Gelagert bei RT
Sylgard 184 Silikonelastomer	Fisher Scientific	NC9644388
Instant ocean	Doctors Foster and Smith	CD-116528	Stammlösung = 100 g/L gelagert bei RT
Natriumphosphat zweibasisch	Sigma Aldrich	S0876	Stammlösung = 0,4 M gelagert bei RT
In vitro befruchtete Embryonen	eNasco	LM00490MX	100 Embryonen/Einheit