Vorbereitung einer Blutkultur Pellet Rapid Identifizierung von Bakterien und Antibiotika Empfindlichkeitsprüfung

Zusammenfassung

Eine schnelle Bakterienpellet Herstellung von einer positiven Blutkultur kann als eine Probe für Anwendungen wie die Identifizierung durch MALDI-TOF, Gram-Färbung, antibiotische Resistenzprüfung und PCR-basierte Tests verwendet werden. Die Ergebnisse können schnell auf Ärzte mitgeteilt, das Ergebnis von Patienten mit Infektionen der Blutbahn zu verbessern.

Zusammenfassung

Blutstrominfektionen und Sepsis sind eine der Hauptursachen für Morbidität und Mortalität. Der Erfolg von Patienten mit Bakteriämie, hängt von einer schnellen Identifizierung des Erregers zu führen optimale Behandlung mit Antibiotika. Die Analyse der Gram Flecken aus positiver Blutkultur kann schnell durchgeführt werden und bereits erhebliche Auswirkungen auf die antibiotische Therapie. Jedoch ist die genaue Identifikation des Erregers erforderlich, um die optimale gezielte Behandlung etablieren. Wir stellen Ihnen hier eine einfache und schnelle Zubereitung von Bakterienpellet einer positiven Blutkultur, die als Probe für mehrere wesentliche Downstream-Anwendungen wie Identifikation durch MALDI-TOF-MS, antibiotische Empfindlichkeitsprüfung (AST) durch Scheibendiffusionstest oder automatisierte AST-Systemen verwendet werden können und durch automatisierte PCR-basierten Diagnosetests. Die Leistung dieser direkt auf die Blutkultur Bakterienpellets angewendet unterschiedliche Identifikationssysteme und AST ist sehr similar auf die Leistung in der Regel aus isolierten Kolonien auf Agar-Platten gezüchtet wurden. Im Vergleich zu herkömmlichen Ansätzen, die schnelle Beschaffung eines Bakterienpellet reduziert die Zeit, um sowohl Identifikation und AST zu melden. So kann nach einer Blutkultur Positivität Identifizierung durch MALDI-TOF in weniger als 1 Stunde in der Erwägung Ergebnisse AST durch automatisierte Systeme AST oder Scheibendiffusionstests innerhalb von 8 bis 18 h, jeweils angegeben werden. Ebenso können die Ergebnisse einer schnellen PCR-basierten Assays, um den Kliniker mitgeteilt weniger als 2 Stunden nach dem Bericht einer Bakteriämie. Zusammen zeigen diese Ergebnisse, dass die rasche Erstellung eines Blutkultur Bakterienpellet hat einen signifikanten Einfluss auf die Identifizierung und AST Bearbeitungszeit und damit auf das erfolgreiche Ergebnis von Patienten mit Infektionen der Blutbahn.

Einleitung

Bakteriämien und Sepsis bei hospitalisierten Patienten sind eine der Hauptursachen von Morbidität und Mortalität. So ist die Sterblichkeit im Zusammenhang mit Infektionen Blutbahn in etwa 14% bis 37% der stationären Patienten beobachtet und kann auf 35% auf Intensivstationen Patienten ^1-3 erhöhen. Die schnelle Identifizierung des Erregers ist entscheidend zu führen optimale antimikrobielle Behandlung und den erfolgreichen Abschluss der antimikrobiellen Therapie ^4,5 zu erhöhen. Die schnelle Analyse von Gram Flecken aus positiver Blutkultur hat bereits einen erheblichen Einfluss auf die Anpassung der antimikrobiellen Therapie ^6,7, aber ....

Protokoll

Dieses Protokoll wurde entwickelt und validiert nach den Forschung und Entwicklungsprozesse und ethische Regeln unserer Einrichtung, bevor er als Routinewerkzeug implementiert.

1. Herstellung einer Blutkulturbakterienpellet durch Ammoniumchlorid Erythrozyten-Lyseverfahren

1. Vorbereitung einer positiven Blutkultur für nachfolgende Zentrifugation.
   1. Sterilisieren Blutkultur Kappe. Fügen Sie 70% Ethanol auf die Kappe der Flasche und zu brennen.
      HINWEIS: Führen Sie diesen Schritt unter einer Steril ausführen nicht.
   2. Bewegen Sie die Flasche an einer Steril. Sammeln von 5 ml der Blutkultur mit einer 20 G Spritze.....

Ergebnisse

In der Studie von Prod'hom et al. ¹⁵ durchgeführt wurden Bakterienpellets durch Ammoniumchlorid-Lyse Zentrifugation von 122 positive Blutkultur von 78 Patienten erhalten durch MALDI-TOF MS analysiert. Von 122 positiven Blutkultur wurden 95 (77,9%) richtig auf Artenebene und eine (0,8%) an der Gattungsebene identifiziert. Die restlichen 26 (21,3%) Blutkultur-Pellets gab keine sichere Identifizierung mittels MALDI-TOF. Unter denen waren 21 gram-positive Bakterien, darunter 13 Streptokokken und 5 Koagul.......

Diskussion

Im Vergleich zu herkömmlichen positiven Blutkultur diagnostische Ansätze, die schnelle Beschaffung eines Bakterienpellet mit Hilfe der Ammoniumchlorid-Lyse Zentrifugation Ansatz reduzieren die Zeit, um die Identifizierung von 16 bis 24 h und die Zeit bis AST von 24 bis 48 Stunden zu melden (Abbildungen 1 und berichten 3).

Rasche Einführung von geeigneten Antibiotika-Therapie ist entscheidend, um das Ergebnis von Patienten mit Infektionen der Blutbahn zu verb.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
20 G Nadel	Terumo, Leuven, Belgien	NN-2038R
50 ml Falcon Tube	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	352070	50 ml Zentrifugenröhrchen
Ammoniumchlorur	Merck, Darmstadt, Deutschland	101145
Kaliumhydrogencarbonat	Fluka, St. Louis, MO, USA	60340
Ameisensäure	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	F0507	Entzündlich, ätzend
α-Cyano-4-hydroxyzimtsäure	Fluka, St. Louis, MO, USA	70990	Akute Toxizität
Acetonitril	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	271004	Entzündliche, akute Toxizität
Trifluoressigsäure	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	T6508	Ätzend, akute Toxizität
Vitek 2 60 Instrument	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Frankreich	27202	Automatisiertes mikrobielles Systeminstrument
Vitek 2 Gram-positive (GP) Karte	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Frankreich	21342	automatisierter GP  Ausweis
Vitek 2 AST-P580 Karte	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Frankreich	22233	automatisiertes mikrobielles AST-System
Vitek 2 Gramnegative (GN) Karte	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Frankreich	21341	automatisierter GN  Ausweis
Vitek 2 AST-N242 Karte	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Frankreich	413391	automatisiertes mikrobielles AST-System
Xpert MRSA	Cepheid, Sunnyvale, CA, USA&	nbsp; GXMRSA-100N-10	Nukleinsäure-Amplifikationstechnologie MRSA
GeneXpert IV Instrument	Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA	GXIV-4-D	Nukleinsäure-Amplifikationstechnik Instrument
Microflex LT MALDI-TOF MS Gerät	Bruker Daltonics, Bremen, Deutschland	BDAL Microflex LT/SH
MSP 96 Zielstahl BC	Bruker Daltonics, Bremen, Deutschland	280799	MALDI Zielplatte
Densitometer Densicheck Instrument	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Frankreich	27208
MALDI Sepsityper kit 50	Bruker Daltonics, Bremen, Deutschland	8270170
Mac Conkey Agar	Biolife, Mailand, Italien	4016702
Mueller-Hinton-Agar	Oxoid, Hampshire, England	CM0337	Mueller-Hinton-Agar (MH)
MHF-Agar	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Frankreich	43901	Mueller-Hinton-Agar-Agar (MHF)
BD Columbia III Agar	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	254071	Blut-Agar
BD Schokoladen-Agar	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	254089	Schokoladen-Agar
BD Schaedler Agar	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	254084	Schaedler Agar