Method Article

Eine einfache und kostengünstige Methode zur Bestimmung der Überempfindlichkeit auf Kälte und Anpassung an der Maus

DOI:

10.3791/52640

⸱

March 17th, 2015

 ,  ,  , 
1MSTP, Neuroscience Program, Washington University in St. Louis, 2Washington University Pain Center, Department of Anesthesiology, Washington University in St. Louis

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Der kalte Plantar-Assay (CPA) misst die Kältereaktion zwischen 30 °C und 5 °C und kann auch die Kälteanpassung messen. Dieses Protokoll beschreibt, wie der CPA zur Messung von Kälteüberempfindlichkeit, Analgesie und Anpassung bei Mäusen verwendet wird.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kälteüberempfindlichkeit ist ein ernstes klinisches Problem, das eine breite Untergruppe von Patienten betrifft und zu einer signifikanten Verschlechterung der Lebensqualität führt. Der kalte Plantar-Assay ermöglicht die objektive und kostengünstige Beurteilung der Kälteempfindlichkeit bei Mäusen und kann sowohl Analgesie als auch Überempfindlichkeit quantifizieren. Die Mäuse werden auf einer Glasplatte akklimatisiert und ein komprimiertes Trockeneispellet gegen die Glasoberfläche unter der Hinterpfote gehalten. Die Latenz bis zur Entnahme aus dem Kühlglas wird als Maß für die Kälteempfindlichkeit verwendet.

Kälteempfinden ist auch wichtig für das Überleben in Regionen mit saisonalen Temperaturschwankungen, und um die Empfindlichkeit aufrechtzuerhalten, müssen die Tiere in der Lage sein, ihre thermischen Reaktionsschwellen an die Umgebungstemperatur anzupassen. Der Cold Plantar Assay (CPA) ermöglicht auch die Untersuchung der Anpassung an Änderungen der Umgebungstemperatur, indem die Kälteempfindlichkeit von Mäusen bei Temperaturen von 30 °C bis 5 °C getestet wird. Mäuse werden wie oben beschrieben akklimatisiert, aber die Glasplatte wird mit Aluminiumboxen (oder Aluminiumfolienpaketen), die mit heißem Wasser, Nasseis oder Trockeneis gefüllt sind, auf die gewünschte Ausgangstemperatur abgekühlt. Die Temperatur der Platte wird in der Mitte mit einer Filament-Thermoelementsonde vom Typ T gemessen. Sobald die Platte die gewünschte Starttemperatur erreicht hat, werden die Tiere wie oben beschrieben getestet.

Dieser Assay ermöglicht das Testen von Mäusen bei Temperaturen von harmlos bis schädlich. Der CPA führt zu eindeutigen und konsistenten Verhaltensreaktionen bei unverletzten Mäusen und kann zur Quantifizierung von Überempfindlichkeit und Analgesie verwendet werden. Dieses Protokoll beschreibt, wie der CPA zur Messung von Kälteüberempfindlichkeit, Analgesie und Anpassung bei Mäusen verwendet wird.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mess kalten Reaktionsfähigkeit bei Nagern ist wichtig für ein besseres Verständnis der möglichen Mechanismen der kalten Empfindlichkeit beim Menschen unter normalen und pathologischen Bedingungen. Der Kalte Plantar Assay (CPA), ursprünglich entwickelt, einige Jahre vor 1, wurde entwickelt, um reproduzierbare und eindeutig murine Verhaltensreaktionen auf einen Kältereiz bei RT ausgeliefert zu generieren. Neuere Verbesserungen dieses Tests wurden auf einem großen Temperaturbereich 2 die reproduzierbare Messung der kalten Empfindlichkeit erlaubt. Beide Varianten sind auch entworfen, um mit relativ hohem Durchsatz und kostengünstig zu handhaben sein.

Ein Großteil der Fortschritte im Verständnis der Mechanismen der kalten Empfindlichkeit mit anderen Verhaltensmethoden vorgenommen. Eine Methode ist die Acetonverdampfungstest, der Tupfen beinhaltet oder Sprühen Aceton auf der Maus Pfote und Messung der Menge an Zeit, die der Maus verbringt schnippte die Pfote 3,4. Leiderdie Antworten auf die Acetonverdampfung werden durch den nassen Gefühl und den Geruch des Aceton verwechselt. Auch kann die Kältereiz, die in der Acetonverdampfungstest angewendet wird auf die Menge an Aceton aufgetragen variieren, und ist schwierig zu quantifizieren. Schließlich müssen unverletzten Mäusen minimal antwortet Aceton als Ausgangswert, so dass es unmöglich ist, Analgesie in Abwesenheit von Überempfindlichkeit bei dieser Methode zu messen.

Eine weitere klassische Test für Kälte Reaktionen ist die Tail-Flick-Test, in dem die Latenz zum Rücktritt wird gemessen, nachdem der Schwanz ist in kaltem Wasser 5,6 eingetaucht. Während die Verhaltensreaktionen in diesem Test eindeutig sind, und der Assay misst Antworten auf eine bestimmte Temperatur, müssen die Tiere während der Prüfung zurückgehalten werden, die kalte Reaktionsfähigkeit durch gut beschriebene spannungsinduzierte analgetische Mechanismen 7 verändern kann.

Ein weiteres häufig verwendetes Werkzeug ist die kalte Platte Test, der die VerhaltensmaßeReaktionen von Mäusen, nachdem sie auf einem Peltier-Kühlplatte 8-10 platziert werden. Während dieses Tool liefert Informationen über Tier Reaktionen bei bestimmten Temperaturen, wurde auch uneinheitlich verwendet; verschiedenen Gruppen haben verschiedene Arten von Reaktionen einschließlich Anzahl der Sprünge 8,11, die Latenz bis zum ersten Ansprechen 8,11- 13 gemessen wird, und die Anzahl der Pfote hebt 11,13,14 mit sehr unterschiedlichen Ergebnissen. Die Kaltplattentest ist auch relativ geringen Durchsatz, da nur ein Tier zu einem Zeitpunkt getestet werden, und es ist eine teure und zerbrechliche Peltier-Vorrichtung erfordert.

Das 2-Plattentemperatur Präferenztest ist eine häufig verwendete Derivat der Kaltplattentest, das die relative Zeitdauer, die Tiere ausgeben 2 verbundenen Platten mit unterschiedlichen Temperaturen 9,15- 17 misst. Ein weiteres ähnliches häufig verwendete Test ist der Wärmegradient Assay, in dem die Zeitdauer, die Mäuse zu verbringen in unterschiedlichen Temperaturzonenim Bereich zwischen 5 ° C und 45 ° C auf einer langen Metallplatte gemessen 16. Obwohl diese Assays erlauben den Vergleich von Temperaturen, ist es unklar, ob das Verhalten darstellt Temperatur Abneigung oder Temperatur bevorzugt.

Schließlich ist die dynamische Kaltplattenassay wurde verwendet, um zu messen, wie Mäusen, auf sich ändernde Umgebungstemperatur 18 reagieren. Diese Methode geht darum, Mäuse auf einem RT Peltier-Vorrichtung und Rampen es bis zu 1 ° C während der Messung, wie viel die Mäuse springen oder lecken ihre Pfoten auf verschiedenen Plattentemperaturen. Während dieses Tests, wie Mäusen Anpassung an eine Kühlumgebung, es keine Möglichkeit zu testen, wie Mäusen, die Kältereiz zu reagieren in der Einstellung eines kühleren Umgebungstemperatur. Zusätzlich erfordert es eine teure Ausrüstung durchzuführen und bietet keine Möglichkeit, Mäuse zu Prüfeinrichtungen vor der Messung ihrer kalten Empfindlichkeit akklimatisieren.

Um diese Tests zu ergänzen, überprüft der CPA die ACCLIMAted Antworten auf eine gut definierte Kältereiz bei einer Vielzahl von Temperaturbereichen, oder während des Prozesses der Anpassung an kalten Umgebungstemperaturen. Es kann bis zu 14 Mäuse in einer Zeit mit unseren aktuellen Gerät zu testen, mit dem Potenzial, für High-Throughput-Tests kostengünstig skaliert werden.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle Mausprotokolle wurden in Übereinstimmung mit National Institutes of Health Leitlinien und wurden von der Tierstudien Ausschuss der Washington University School of Medicine (St. Louis, MO) zugelassen.

1. Vorbereitung der Testplatte und Gehäuse

  1. Reinigen Sie die Glasoberfläche.
  2. Fixierung des T-Typ Faser Thermoelementsonde an der Oberfläche in der Mitte der Glasplatte mit Labor Band.
  3. Legen Sie die Tiergehege auf der Glasplatte in einer Linie entlang der Mitte der Platte.
  4. Schrauben Sie die Thermoelementsonde durch das Zentrum Tiergehege und stecken Sie in den Datenlogger. Drehen Sie den Datenlogger an, während Deaktivierung des Auto-Shutdown-Funktion, und befestigen Sie den Datenlogger an den Computer mit dem mitgelieferten Kabel.
    1. Wenn die Aufzeichnung der Plattentemperatur während des Experiments, öffnen Sie die Datenlogger-Software Aufnahme Plattentemperaturen zu beginnen.
    2. Falls erforderlich, stellen Sie die Software neuKabel die Plattentemperatur einmal pro Sekunde.
    3. Starten Sie die Aufnahme Temperaturen mit Hilfe der Software mit dem Thermodatenlogger verpackt.
  5. Trennen Sie das Gehäuse mit schwarzen Einsätzen, um visuelle Interaktion zwischen Mäusen verhindern.
  6. Position unterhalb des Glasspiegel, so dass die Unterseite der Gehäuse aus einer bequemen Sitzposition sichtbar ist.

2. Erwärmung / Abkühlung der Glasplatte

  1. Füllen Aluboxen mit erwärmtem Wasser, nassem Eis oder Trockeneis und positionieren Sie sie angemessen auf die Glasplatte (Aluminiumfolie Pakete mit Trockeneis gefüllt können auch, um das Glas zu kühlen verwendet werden; Abbildung 1) 2.
    1. Für die Prüfung bei 30 ° C, positionieren Sie die Aluboxen etwa 0,25 '' von den Tiergehegen (2B) 2.
      1. Legen Sie einen beheizten Wasser Zirkulator auf beiden Seiten der Glasplatte. Stellen Sie den Thermostat auf 45 - 60 ° C, und unsE ist die Alu-Boxen mit einem stetigen Strom von heißem Wasser (1C) 2 zu füllen.
      2. Positionieren Sie die Umwälzpumpen, dass das heiße Wasser aus den Aluboxen entwässert direkt zurück in das Reservoir des Thermostaten auf jeder Seite (Abbildung 1 C) 2.
    2. Für die Prüfung bei RT, lassen Sie die Felder leer (Abbildung 2) 2.
    3. Für die Prüfung bei 17 ° C, stellen Sie die Boxen etwa 0,25 '' von den Tiergehegen auf beiden Seiten füllen und mit nassem Eis (Abbildung 2) 2.
    4. Für die Prüfung bei 12 ° C, stellen Sie die Boxen etwa 1,25 '' von den Gehäusen zu beiden Seiten und füllen mit Trockeneis (Abbildung 2) 2.
    5. Für die Prüfung bei 5 ° C, stellen Sie die Boxen etwa 0,25 '' von den Gehäusen zu beiden Seiten und füllen mit Trockeneis (Abbildung 2) 2.
      1. Beim Abkühlen des Glases mit Trockeneis, stellen Sie sicher, für eine ausreichende Belüftung, um CO 2 Aufbau im Raum zu verhindern.
  2. Warten Sie, bis das Glas, um den gewünschten Temperaturbereich zu erreichen.
  3. Fügen Sie die Maus, um die Gehäuse auf der Platte.
    ANMERKUNG: Eine Rauschgenerator verwendet werden, um Lärmbelästigungen zu verringern.
  4. Warten Sie, bis die Mäuse zu akklimatisieren.
    HINWEIS: In unserer Einrichtung das dauert etwa 2,5 Stunden, aber das kann deutlich auf Basis von Tierhaltung und Umgangsbedingungen variieren.
  5. Halten Sie das Glas auf dem gewünschten Temperaturbereich, indem sichergestellt wird, dass die Boxen voll von erwärmtem Wasser, nassem Eis oder Trockeneis gehalten.
    HINWEIS: Mit unserem Gerät müssen die Kisten mit Eis etwa jede 90 Minuten wieder aufgefüllt werden.
    HINWEIS: Für die 17 ° C Bedingung, ist es hilfreich, das meiste Wasser aus den Aluminium-Boxen durch die Ablauflöcher vor dem Nachfüllen mit Eis zu leeren. Dadurch wird die Temperatur besser, und pr stabilisierenVeranstaltungsüberlauf
    HINWEIS: Die genaue Höhe der Trockeneis wird saisonal variieren, aber in der Regel halten die Boxen mehr als ¼ voll über die gesamte Länge der Box wird die Temperatur konstant zu halten.

3. Prüfung der Mäuse bei Fest Temperaturen

  1. Außerhalb des Verhaltensraum, füllen einen Eiskübel etwa zur Hälfte mit Trockeneis.
  2. Mit einem Hammer oder Gummihammer, quetschen Sie das Trockeneis zu einem feinen Pulver.
    HINWEIS: Durch Überladen des Eimer wird es schwierig, vollständig das Trockeneis zu Pulver zermalmen.
  3. Mit einem geraden Rasierklinge oder einer Schere, schneiden Sie die Spitze einer 3-ml-Spritze.
  4. Unter Verwendung einer 21 G Nadel, stoßen 3 Löcher auf gegenüberliegenden Seiten der Spritze (insgesamt 6 Löcher).
    HINWEIS: Diese Löcher werden den Druck durch Sublimation erzeugt verringern, während Zusammendrücken des Trockeneis. Der Cut-off-Spritze für mehrere Versuche wieder verwendet werden.
  5. Nehmen Sie die Spritze, Trockeneis-Pulver und ein Hand Stoppuhr in die Verhaltensraum.
  6. Füllen Sie die Spritze Kammer zur Hälfte mit Trockeneispulver. Halten Sie das Schnittende der Spritze vor einem flachen Gegenstand, und fest komprimieren das Pulver mit dem Kolben. Achtung; die Kunststoff-Kolben kann sich verbiegen oder brechen aus dem Druck. Wenn dies geschieht, ersetzen Sie den Kolben aus einer neuen Spritze.
  7. Verlängern Sie die Spitze des Druck Trockeneis-Pellets über den Rand der Spritze.
  8. Versuchsmäuse, die vollständig in Ruhe.
    1. Bei 30 ° C, 23 ° C und 17 ° C, Testmäuse, die alle 4 Pfoten auf dem Glas und nicht bewegen, aber nicht vollständig eingeschlafen 19.
    2. Bei 12 ° C und 5 ° C, Testmäuse, die auf 2 oder 4 Pfoten Pfoten und nicht bewegen oder springen werden.
  9. Mit den Spiegel für Targeting, vorsichtig, aber fest drücken Sie die Flach Pellet bündig an der Glasoberfläche unter dem Maushinterpfote (1A) 2. Starten Sie den Handauslöser.
  10. Stoppen Sie den Timer und nehmen Sie die Tablette, wenn die Maus bewegt sich weg von der gekühlten Glas.
    HINWEIS: Diese Rücklaufbewegung kann vertikal oder horizontal sein.
    1. Wenn die Maus bewegt sich nur kurz die Pfote und dann gibt es an der Kühlfläche, weiterhin Timing und anregend, bis die Maus macht eine dauerhafte Abkehr.
      Hinweis: Unser Labor verwendet eine maximale Anregung Zeit von 20 sec für Mäuse in der Mehrzahl der Fälle.
  11. Wiederholen Sie diesen Testverfahren bis mindestens 3 Werte auf jeder Pfote jedes Tieres gesammelt werden. Separate Studien testen gegen Pfoten auf der gleichen Maus um mindestens 7 min, und einen separaten aufeinanderfolgenden Studien auf eine einzelne Pfote um mindestens 15 min.
  12. Falls erforderlich, mit verschiedenen Dicken von Glas an verschiedene Abkühlungsgeschwindigkeiten (Figur 3) 1 zu erzeugen.
    HINWEIS: Die Kühlrate ist umgekehrt proportional mit der Dicke des Glases korreliert.

4. Prüfung der Mäuse während der kalten Anpassung

Hinweis: Dies ist ein alternatives Protokoll, das Testen als Glas plat erlaubtE abkühlt, anstatt einmal die Platte stabilisiert hat und die Mäuse wurden vollständig an die kalte Umgebung angepasst.

  1. Folgen Sie den in Abschnitt 1 Einrichten des Geräts aufgeführten Hinweise.
  2. Folgen Sie den in Kapitel 3 werden auf Baseline-Messungen bei Raumtemperatur (7A) 2 nehmen Anweisungen.
  3. Pre-Kühlung der Aluminiumboxen mit Trockeneis.
  4. Sobald Ausgangsrückzugslatenzen gemessen wurden, positionieren Sie die vorgekühlte Boxen auf der Platte etwa 1,25 '' von den Gehäusen zu beiden Seiten (7A, Pfeil mit der Aufschrift "Trockeneis hinzugefügt") 2.
  5. Befolgen Sie die in Abschnitt 3, Maß zu nehmen, wie die Glasplatte abkühlt, die Messungen so oft wie möglich Anweisungen.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Verhaltens-Antworten von Mäusen ausgelöst beginnend bei 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C und 12 ° C sind in hohem Maße reproduzierbar (4A) 20. Um die Kältereiz unter der Hinterpfote erzeugt messen, wurden Mäuse mit einer Ketamin / Xylazin / Acepromazin anästhesiert Cocktail und die Pfoten wurden auf dem Glas auf einem T-Typ-Thermoelement Filament (4B) 20 befestigt. Das Glas gekühlt, erwärmt, um die gewünschte Testbereich wurde. Obwohl die Platte gleichmäßig entlang der L...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Der CPA kann verwendet werden, um die Kälteempfindlichkeit und Kälteadaptation bei Mäusen zu beurteilen. Es bietet eine erschwingliche und effiziente Möglichkeit, Kältereaktionen bei unkontrollierten, akklimatisierten Tieren in einer Vielzahl von Temperaturbereichen zu messen. Es bietet auch eine eindeutige Verhaltensreaktion mit einer leicht zu quantifizierenden und zu analysierenden Ausgangsvariablen. Es wurde bereits verwendet, um Veränderungen der Kälteempfindlichkeit zu beurteilen, die durch Entzündungen1

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren haben nichts offenzulegen

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren möchten sich bei den Beiträgen des gesamten Gereau Lab für die Bearbeitung von Manuskripten bedanken. Diese Arbeit wird durch die NINDS-Mittel 1F31NS078852 für DSB und NINDS-Fonds NS42595 für RWG unterstützt.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Thermoelementsonde vom Typ TPhysitempIT-24pWird verwendet, um die Oberflächentemperatur des Glases zu messen (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)
GlasplatteLokale Glasfirma (in St. Louis, Stemmerich Inc)Wir verwenden Pyrexglas (Borosilikatfloat). Unser Labor verwendet in der Regel 1/4'', aber auch 3/16'' und 1/8'' sind nützlich
Thermischer DatenloggerExtechEA15Thermologger zur Verfolgung der Glastemperatur (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 ml SpritzeBD309657Die Oberseite wird abgeschnitten und Trockeneis wird in der Spritze komprimiert, um eine kalte Sonde zu erzeugen
ComputerWenn Sie einen Extech-Logger verwenden, funktioniert jeder Pc. Aluminiumboxen
Washington University in St. Louissind 3 Zoll lang, 4,5 Zoll breit und 3 Zoll hoch mit einem versiegelten Deckel. In einer kurzen Seite jeder Box befindet sich ein 1/2-Zoll-Loch, das in der Nähe des Bodens gebohrt ist. Diese Löcher werden mit Gummihahnen gefüllt, wenn die Boxen mit nassem Eis oder heißem Wasser gefüllt werden.
Beheizter WasserzirkulatorVWRJedes Wasserzirkulatormodell mit Pumpe funktioniert
21 G NadelBD305165Die genaue Nadelstärke ist nicht wichtig
Handtimer Jeder Handtimerfunktioniert
SpiegelJeder flache Spiegel funktioniert
der

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice. Plos ONE. 7 (6), 8(2012).
  2. Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice. Journal of Neuroscience Methods. , (2014).
  3. Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain. Pain. 59 (3), 369-376 (1994).
  4. Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice. Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).
  5. Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate. Pain. 56 (2), 155-166 (1994).
  6. Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists. European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).
  7. Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats. Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).
  8. Karashima, Y., et al. TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).
  9. Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo. Pain. 150 (2), 340-350 (2010).
  10. Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats. Molecular pain. 1, 36(2005).
  11. Colburn, R. W., et al. Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice. Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).
  12. Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. TRPM8 is required for cold sensation in mice. Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).
  13. Bautista, D. M., et al. The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold. Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).
  14. Obata, K., et al. TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury. The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).
  15. Tang, Z., et al. Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8. Nature communications. 4, 2179(2013).
  16. Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).
  17. Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. The cellular code for Mammalian thermosensation. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).
  18. Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -J., Barrot, M., Poisbeau, P. Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents. The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).
  19. Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state. The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).
  20. Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo. Pain. , (2014).
  21. Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).
  22. Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate. Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).
  23. Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain. Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).
  24. Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate. The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).
  25. Zhang, H., et al. Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).
  26. Wang, H., Zylka, M. J. Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cold Plantar AssayCold SensitivityMouse AdaptationDry Ice PelletGlass PlateThermocouple ProbeWithdrawal LatencyAnalgesia MeasurementHypersensitivity TestTemperature Acclimation

Related Articles