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Ob das Studium eine Autoimmunerkrankung gerichtet an das zentrale Nervensystem (ZNS), wie experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE, 1), oder die Immunantwort auf eine Infektion des ZNS, wie Kinderlähmung, Lyme Neuroborreliose oder Neurosyphilis, ist es oft notwendig, um die ZNS-infiltrierenden Immunzellen zu isolieren.
In diesem Video-Protokoll zeigen wir, wie man mononukleären Zellen (MNC) aus dem ZNS der Ratte mit EAE zu isolieren. Der erste Schritt dieses Verfahrens erfordert eine kardiale Perfusion der Nager mit einer Kochsalzlösung, um sicherzustellen, dass kein Blut in den Blutgefäßen Bewässerung des ZNS bleibt. Jede Kontamination mit Blut wird künstlich erhöhen die Anzahl der scheinbaren ZNS-infiltrierenden multinationalen Unternehmen und kann die scheinbare Zusammensetzung des Immunsystems zu infiltrieren ändern. Wir haben dann zeigen, wie das Gehirn und das Rückenmark der Ratte für nachfolgende Kanalkrümmung entfernen, um ein Single-Cell-Suspension herzustellen. Diese Suspension wird auf einem Zwei-Schicht-Percoll-Gradienten getrennt, um die Multis zu isolieren. Nach dem Waschen werden diese Zellen dann bereit, alle erforderlichen Verfahren zu unterziehen.
Mononukleären Zellen isoliert mit diesem Verfahren sind lebensfähig und können für die Elektrophysiologie, Durchflusszytometrie (FACS), oder der Biochemie eingesetzt werden. Wenn die Technik unter sterilen Bedingungen durchgeführt wird (unter Verwendung von sterilen Instrumenten in einer Gewebekultur Haube) können die Zellen auch in Gewebekultur gezüchtet werden. Eine bestimmte Zellpopulation kann weiter gereinigt werden entweder mit magnetischen Trennverfahren oder eine FACS.