Hier wird die Methode zur Etablierung eines syngenen Mausmodells eines orthotopen Blasentumors beschrieben, um die Anti-Tumor-Wirksamkeit des bakteriellen Proteins HP-NAP zu bewerten.
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In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Blasenkrebs ist eine der häufigsten bösartigen Erkrankungen des Urogenitaltraktes. Die intravesikale Injektion von Bacillus Calmette-Guérin (BCG) ist die Goldstandardbehandlung für den hochgradigen nicht-muskelinvasiven Blasenkrebs (NMIBC). Da jedoch die behandlungsbedingten Nebenwirkungen relevant sind, werden neuere biologische Reaktionsmodifikatoren mit einem besseren Nutzen-/Nebenwirkungsverhältnis benötigt.
Die Mikroumgebung des Tumors kann sowohl die Tumorentwicklung als auch die Wirksamkeit der Therapie beeinflussen. Um ein gutes Modell zu erhalten, ist es wünschenswert, Tumorzellen in das Organ zu implantieren, von dem der Krebs ausgeht.
In diesem Protokoll beschreiben wir ein Verfahren zur Etablierung eines Tumors in der Blasenhöhle weiblicher Mäuse und zur anschließenden Verabreichung von Therapeutika; letzteres wird durch unsere Verwendung des neutrophilen Aktivierungsproteins Helicobacter pylori (HP-NAP) veranschaulicht. Eine vorläufige chemische Verbrennung der Schleimhaut, gefolgt von der Injektion der Maus-Urothelkarzinom-Zelllinie MB49 mittels Harnröhrenkatheterisierung, ermöglicht es den Zellen, sich an die Blasenschleimhaut anzuheften. Nach einer Phase, die erforderlich ist, um eine anfängliche Proliferation der Zellen zu ermöglichen, werden die Mäuse mit HP-NAP behandelt, das erneut über eine Katheterisierung verabreicht wird. Die Antitumoraktivität von HP-NAP wird bewertet, indem das Tumorvolumen, das Ausmaß der Nekrose und der Grad der Vaskularisation zwischen Vehikel- und HP-NAP-behandelten Tieren verglichen werden.
Einleitung
Blasenkrebs ist eine der häufigsten Krebserkrankungen des Urogenitaltrakts, mit fast 75.000 neue Fälle jedes Jahr in den USA 1. Hohe Rezidiv erfordern lebenslanges Follow-up, die Blasenkrebs eine der teuersten Krebsarten behandelbar machen. Der Goldstandard für die Behandlung hochgradigen NMIBC ist transurethralen Resektion, gefolgt von intravesikale Immuntherapie mit BCG. Obwohl der genaue Mechanismus der Antitumoraktivität von BCG, muss noch vollständig aufgeklärt werden, wird akzeptiert, dass die Aktivierung der zellvermittelten Immunantwort der T-Helfer (Th) 1 und zytotoxische T (Tc) 1-Zellen angereichert ist für Der Erfolg der Therapie 2. <....
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Protokoll
Alle Verfahren für die Behandlung der Tiere wurden von der italienischen Gesundheitsministerium (DM 204/2011-B) genehmigt worden.
1. Tiere
- Wachsen C57BL6 / J weiblichen Mäusen zu 8 Wochen in einzeln belüfteten Käfigen mit microisolation Filter.
Hinweis: Frauen werden bevorzugt, da die anatomische Anpassung ihrer äußeren urogenitalen Gerät macht die Katheterisierung einfacher als bei Männern.
2. Zellkultur
- Aufrechterhaltung der Maus Urothelkarzinom Zelllinie MB49 in RPMI 1640 Medium mit 10% hitzeinaktiviertem fötalem Rinderserum und 50 ug / ml Gentamicin ergänzt bei 37 ° C in ....
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Ergebnisse
Abbildung 1 zeigt die Kathetertechnik; die Maus katheterisiert und mit 0,5 x 10 6 MB49-Zellen eingeimpft. 3 Tage nach der Injektion von Tumorzellen wird eine Behandlung mit HP-NAP gestartet, um ihnen zu ermöglichen, an der Blasenwand zu befestigen und zu vermehren. Alle Tiere in der Kontrollgruppe gehörenden Entwicklung des Tumors; einige von ihnen vor dem Ende des 13-Tage-Zeitraum auf Grund der Verstopfung der Harnröhre sterben.
Nach der ersten Injektion mit HP-N.......
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Diskussion
Der Großteil der Fortschritte in der Krebstherapie erfordern Tests in Tiermodellen, bevor klinische Studien. Die Möglichkeit, das Studium der Tumorbiologie in vivo, unter Ausnutzung der Tier-Modelle, ist ein entscheidender Werkzeug für Forscher untersuchen Krebs Pathogenese, so dass die Bewertung der unterschiedlichen Therapieansätze. Orthotopen Modellen bleibt der Goldstandard 14-15, sowohl wegen der riesigen Menge an Zelllinien, die Einrichtung eines Tumor-Modell, und weil sie die Umgebung des natü.......
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Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde von Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro, italienische Ministerium für Universität und Forschung, Projekte und Prin Progetti di Ricerca di Ateneo, gewähren N ° CPDA137871, Fondazione Cariplo unterstützt wird, gewähren N ° 2011-0485 zu MdB, und durch Finanziamento Giovani Studiosi, Universität Padua, um Gaia Codolo.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Materialien | |||
| C57BL/6J weibliche Mäuse | Harlan Italien (Udine, Italien) | ||
| MB49 Zellen | gewonnen von Prof. O'Donnel, University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa, USA | ||
| RPMI | Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA) | R8758 | |
| FBS | Sigma-Aldrich | F7524 | |
| PBS | Sigma-Aldrich | D1408 | 10X, zu verdünnen in pyrogenem Wasser |
| Flask | Becton Dickinson (Franklin Lakes, New Jersey, USA) | 353135 | |
| Spritze 1ml | Becton Dickinson | 301358 | |
| Trypsin | Life Technologies (Waltham, Massachusetts, USA) | ||
| Gentamycin | Life Technologies | 15710-049 | |
| Xilor | Bio 98 s.r.l. (Mailand, Italien) | 2% Xylazin | |
| Zoletil | Virbac (Carros, Frankreich) | 359713301992 | 5% Zolazepam + 5% Tiletamine |
| 24G Katheter | Terumo (Rom, Italien) | SR+DM2419PX | |
| HCl | Carlo Erba Reagenzien (Mailand, Italien) | 403871 | flüssiges |
| NaOH | JT Baker (Center Valley, Pennsylvania, USA) | 10095011 | Pulver |
| Ausrüstung | |||
| Chirurgisches Skalpell | Albion Surgical Limited (Sheffield, England) | ||
| Mikrotom | Leica Microsystem ( Wetzlar, Deutschland) | RM2235 | |
| Objektträger | VWR International (Radnor, Pennsylvania, USA) | 631-0108 | |
| Bildanalysator | Zeiss (Jena, Deutschland) | Cyres System | |
Referenzen
- Siegel, R., Ma, J., Zou, Z., Cancerstatistics Jemal, A. CA Cancer J Clin. 64, 9-29 (2014).
- Saint, F., et al. Prognostic value of a T helper 1 urinary cytokine response after intravesical bacillus Calmette-Guerin treatment for superficial bladder cancer. J Urol. 167, 364-367 (2002).
- Shahin, O., Thalmann, G. N., Rentsch, C., Mazzucchelli, L., Studer, U. ....
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Nachdrucke und Genehmigungen
