Isolierung und Vermehrung von zirkulierenden Tumorzellen aus einer Maus Cancer

Zusammenfassung

Es wurde gezeigt, dass zirkulierende Tumorzellen (CTCs) eine wichtige Rolle bei der Tumormetastasierung spielen. In dieser Arbeit wird ein Verfahren zur Isolierung und Vermehrung von CTCs aus dem Vollblut eines syngenen Maustumormodells der Metastasierung des hepatozellulären Karzinoms (HCC) beschrieben.

Zusammenfassung

Krebsmetastasen sind die häufigste Ursache für krebsbedingte Todesfälle. Neuere Studien haben gezeigt, dass zirkulierende Tumorzellen (CTCs) eine wichtige Rolle bei der Metastasierung von Krebs spielen. Tatsächlich korreliert die Anzahl der CTCs mit der Tumorgröße. In dieser Arbeit wird eine detaillierte Beschreibung einer Methodik zur Isolierung und Vermehrung von CTCs aus einem syngenen Mausmodell des hepatozellulären Karzinoms (HCC) gegeben, die eine nachgelagerte Analyse potenziell wichtiger molekularer Mechanismen der Metastasierung solider Organtumoren ermöglicht. Diese Methode ist effizient und reproduzierbar. Es handelt sich um eine nicht-invasive Technik und hat daher das Potenzial, die invasive Biopsie von Geweben des Menschen zu ersetzen, die mit Komplikationen verbunden sein kann. Daher ermöglicht das hier diskutierte Verfahren die Isolierung und Vermehrung von CTCs aus Vollblutproben, so dass sie untersucht und charakterisiert werden können. Dies hat das Potenzial für zukünftige Adaptionen für klinische Anwendungen wie Diagnose und personalisierte zielgerichtete Therapie.

Einleitung

Die Krebsforschungsgemeinschaft weiß von der Existenz zirkulierender Tumorzellen (CTCs), seit sie erstmals 1869 von Thomas Ashworth beobachtet wurden¹. Seitdem hat sich gezeigt, dass CTCs für die Tumormetastasierung und das Fortschreiten der Erkrankung wichtig sind^2-5. Solide Tumore sind heute weltweit eine der Hauptursachen für Morbidität und Mortalität. CTCs sind seltene Zellen, die aus Primärtumoren stammen und über den Blutkreislauf zu verschiedenen Organen wandern, von denen sich nur ein kleiner Teil schließlich zu Metastasen^2-5 entwickelt. Bemerkenswert ist, dass es eine positive Korrelation zwischen der Tumorgröße und der CTC-Za....

Protokoll

Ethik Hinweise: Alle Tierversuche wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) des Hunter College der City University of New York zugelassen.

1. Pre-Experiment Procedures

1. Nach der Ankunft in der Tierhaltung, zunächst beherbergen 3 BALB / c Mäusen mit einem Käfig mit einem gefilterten oben und Hackschnitzel Betten. Stellen Sie sicher, dass die Mäuse freien Zugang zu Nahrung, Purina Nagetierfutter und Wasser. Bettzeug und Lebensmittel sollte zweimal pro Woche gewechselt werden, während Käfige sollten einmal pro Woche gereinigt werden.
2. Induzieren Narkose bei Mäusen unter Verwendung eines Isofl....

Ergebnisse

Die hier beschriebene Methode hat gezeigt, dass CTC isoliert werden kann. Die Mäuse wurden auf humane Weise zu experimentellen Endpunkt euthanasiert. Der Prozess beteiligt Erstickung mit Kohlendioxid, intra-kardialen Ausbluten und Genickbruch. Ein Schema der wesentlichen Schritte des Verfahrens sind in Fig. 2 dargestellt ist Vollblutproben durch intrakardiale Ausbluten gesammelt wurden, unter Verwendung des oben beschriebenen Protokolls verarbeitet. Nach dem, wurde Zentrifugation verwen.......

Diskussion

In dieser Studie wurde beschrieben, wie CTCs aus dem Vollblut einer syngenen Maus mit HCC isoliert und vermehrt werden können. Ziel dieser Arbeit ist es, die laufenden Studien zu den Mechanismen der Krebsmetastasierung zu verbessern.

Ein Faktor, der zur schlechten Prognose vieler Krebsarten beiträgt, ist die mangelnde rechtzeitige Erkennung und die daraus resultierende weite Verbreitung der Malignität³. CTCs stammen von primären Krebserkrankungen und breiten sich über den Blutkreis.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Heparin Natriumsalz 1 g	VWR	89508-852
BTX Tube Micro 1,5 ml klar NS	VWR	89511-254	1,5 ml  pyrogenfrei eppendorf Tubes
Nadel steril Disp BD 25 G x 1 Zoll	VWR	BD305125	25 g
Nadel Slp Spitze SRNG 1 ml 200 Stück pro Packung	VWR	BD309659	1 ml Spritzenspitze
Spritze 1 ml leur lok Pk 100	VWR	BD309628	1 ml Spritze
VWR Pinzette Tissue 6	VWR	82027-446	Pinzette
Cyromold intrm 15 x 15 x 5 mm PK 100	VWR	25608-924	Cyromold
Cryo-oct compund 4 oz	VWR	25608-930	Oct compound
VWR Objektträger sprfrst 25 x 75 mm PK72	VWR	48311-703	Objektträger
VWR Deckglas #2 22 x 50 mm	VWR	48-382-128	Deckglas
VWR Slide Box True North Fm Pu	VWR	89140-278	Slide Box
Super HT PAP Pen	VWR	89427-058	PAP Pen
Wasser RNASe und DNAse frei 2 L	VWR	101454-204	Nuklease Freies Wasser
Puffer Tris Ultra Pure Grade 500 g	VWR	97061-796	Tris Buffer
Ammonium Chlorid ACS Grade 2, 5 Kg	VWR	97062-048	Ammoniumchlorid-Puffer
Falcon Gewebekulturschale 60 x 15 mm Style Polystyrol	VWR	353002	Gewebekulturschale
Clorox Keimtötendes Bleichmittel, regulär	VWR	89501-620	Clorox Bleiche
PBS, 1x (phosphatgepufferte Kochsalzlösung) ohne Calcium & Magnesium (500 ml)	Thermo Fischer Scientific	21-040-CV	PBS, 1x
DMEM, 1x  mit 4,5 g/L Glukose & L-Glutamin ohne Natriumpyruvat	Thermo Fischer Scientific	10-017-CV	DMEM 1x Medium für BNL 1ME A.7R.1 Zellen
Fötales Rinderserum	Thermo Fischer Scientific	35-010-CV	FBS
Penicillin Streptomycin Lösung, 100x	Thermo Fischer Scientific	30-002-Cl	Penicillin Streptomycin
Sorvall Biofuge pico	Thermo Fischer Scientific	75002411	Zentrifuge mit 13.000 U/min