A Quick Phänotypische Neurologische Scoring System zur Bewertung der Krankheitsprogression im SOD1 G93A-Mausmodell der ALS

Summary

Dieses Videoprotokoll beschreibt eine sensitive, zuverlässige und schnelle Methode zur Bewertung der neuromuskulären Defizite in einem transgenen Mausmodell der amyotrophen Lateralsklerose.

Abstract

Die transgene SOD1-G93A-Maus ist das am weitesten verbreitete Tiermodell für amyotrophe Lateralsklerose (ALS). Bei ALS TDI haben wir ein phänotypisches Screening-Protokoll entwickelt, das in diesem Video demonstriert wird und das die neuromuskuläre Funktion von SOD1-G93A-Mäusen zuverlässig und schnell bewertet. Dieses Protokoll umfasst ein einfaches neurologisches Scoring-System (NeuroScore) zur Beurteilung der Funktion der Hintergliedmaßen. NeuroScore konzentriert sich auf die Funktion der Hintergliedmaßen, da Defizite der Hintergliedmaßen das früheste berichtete neurologische Anzeichen einer Erkrankung bei SOD1-G93A-Mäusen sind. Das von ALS TDI entwickelte Protokoll bietet eine unvoreingenommene Beurteilung des Beginns der Parese (leichte oder teilweise Lähmung), des Fortschreitens und der Schwere der Lähmung und ist sensitiv genug, um medikamenteninduzierte Veränderungen im Krankheitsverlauf zu identifizieren. In diesem Bericht minimiert die Kombination eines detaillierten Manuskripts mit einem Video die Mehrdeutigkeiten bei der Bewertung und die Variabilität zwischen den Experimentatoren, so dass das Protokoll von anderen Laboratorien übernommen werden kann und Vergleiche zwischen Studien möglich sind, die an verschiedenen Orten stattfinden. Wir glauben, dass dieses Videoprotokoll ein hervorragendes Trainingsinstrument für gegenwärtige und zukünftige ALS-Forscher sein kann.

Introduction

Seit ihrer Entwicklung in der Mitte der 1990er Jahre die SOD1 G93A-transgenen Mausmodell ist die am weitesten verbreitete Tiermodell der amyotrophen Lateralsklerose (ALS) ^1. Diese transgenen Mausmodell wurde gentechnisch verändert, um eine mutante Form des menschlichen Cu / Zn Superoxid-Dismutase 1 (SOD1) -Gen beherbergt, das ALS-assoziierten Glycin-zu-Alanin-Mutation an der Aminosäure 93 (G93A) überexprimieren. Die Mutation G93A ist eine von vielen Mutationen im SOD1-Gen, die zusammen Make-up etwa ein Fünftel der familiären ALS Fällen ^2.

Die SOD1-G93A-Modell hat sich zu einem Arbeitspferd der ALS Arzneimittelentwick....

Protocol

Alle Versuche werden in Übereinstimmung mit den von den National Institutes of Health Guide für die Pflege und Verwendung von Tieren beschriebenen Protokollen durchgeführt und wurden von ALS TDI Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) zugelassen.

1. Tiere, Wohnen und Studiendesign

Anmerkung:. Die SOD1 G93A-Maus Kolonie wurde von der hohen Kopien B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur Stamm ursprünglich von Gurney et al ⁷ hergestellt abgeleitet. Die Kolonie wird derzeit von der Kreuzung transgene C57BL / 6-SJL Männchen mit Wildtyp C57BL / 6-SJL F1 Weibchen gehalten. Die F1-Tiere s....

Results

Die neurologischen Notendaten für die 90 männlichen und 94 weiblichen nicht behandelten SOD1-G93A Mäusen studierte an ALS TDI beim 2014 wurden ausgewertet. Die Ergebnisse zeigen, dass männliche Mäuse haben typischerweise eine aggressivere Krankheitsprogression als weiblichen Mäusen, wie durch einen höheren Anteil an deren Lebensdauer bei NS 1 im Vergleich zu Weibchen belegt. NS 2 und NS 3 auftreten, mit nahezu gleicher Häufigkeit auf Geschlechter. NS 0 wurde aus der Analyse ausgeschlossen, weil es als ein "normaler" Phä.......

Discussion

In diesem Bericht beschreiben wir eine schnelle und einfache Video-Protokoll, die, wenn sie richtig angewendet wird, ist in der Lage, zuverlässige Beurteilung der Krankheitsprogression bei SOD1-G93A Mäusen und Identifizierung von Arzneimittel-induzierter Veränderungen. Während verschiedene Gruppen haben phänotypische Scoring-Systeme für die SOD1-G93A Mäusen ^8-10 entwickelt, haben sie oft keine ausreichende Angaben über das Verfahren und die für die Replikation unzureichend. Als Ergebnis werden Scoring-Systeme.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur-Stamm	The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME	002726	Mäusestamm, der in dieser Studie verwendet
Breeders	Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA		Erhaltung der Kolonie
Scale	Navigator OHAUS, Parsippany, NJ	Modell N14120	Zum Wiegen von Mäusen
Nutra-GelH	Bio-Serv, Flemington, NJ		Nassfutter Wird kranken Mäusen zur Verfügung gestellt
Bestrahlte Labortierdiät	Harlan, Indianapolis, IN	2918-111914M	Chow-Diät
Sani-Chips in Laborqualität	Harlan Teklad, Indianapolis, IN	7090	Einstreu
JMPH	SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC	v10.0.2	Statistiksoftware
Microsoft Excel	Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA	Excel 2013 (v 15.0)	Tabellenkalkulationssoftware
GraphPad Prism 5	GraphPad software Inc., La Jolla, CA	v5.4	Grafiksoftware
Mouse Huts	Bio-Serv, Flemington, NJ	K3272	Für die Anreicherung der Umwelt