Die Autoren stellen ein Protokoll zum Sammeln von Schweinenasentüchern vor, um Influenza-A-Viren nachzuweisen und zu isolieren.
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Methodenartikel
Nasal Tücher für Influenza-A-Virus-Erkennung und Isolierung von Schweine
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Überwachung der Influenza-A-Viren bei Schweinen ist entscheidend für die menschliche und tierische Gesundheit, weil Influenza A-Virus schnell entwickelt sich in Schweinepopulationen und neue Stämme werden laufend entstehen. Schweine sind in der Lage, die von verschiedenen Abstammungslinien von Influenza A-Virus so dass sie wichtige Wirte für die Entstehung und Aufrechterhaltung von neuartigen Influenza A-Virus-Stämmen infiziert werden. Sampling Schweine in diverse Einstellungen wie kommerziellen Schweinefarmen, landwirtschaftliche Messen und Märkten für lebende Tiere ist wichtig, einen umfassenden Überblick über die derzeit zirkulierenden IAV-Stämme bereitzustellen. Der aktuelle Goldstandard Schlachttier- Sampling-Technik (dh Sammlung von Nasenabstrichen) ist arbeitsintensiv, weil sie körperliche Zurückhaltung der Schweine erfordert. Nasen Tücher beinhalten Reiben eines Stückes Stoff durch die Schnauze des Schweins mit minimalen oder keiner Beeinträchtigung des Tieres. Die Nasen wischen Verfahren ist einfach durchzuführen und nicht Personal mit professionellen Veterinär- oder Tier Handling Ausbildung. While etwas weniger empfindlich als Nasenabstriche sind Virenerkennung und Isolation gewählten Standort gewährleisten, stellen Nasen wischt eine tragfähige Alternative zum Abtasten einzelner Schweine bei niedriger Belastung Probenahmeverfahren erforderlich sind. Das Verfahren Protokoll beschreibt die notwendigen Schritte, um eine lebensfähige Nasen sammeln wischen von einem einzelnen Schwein.
Einleitung
Influenza-A-Viren (IAV) verursachen Atemwegserkrankungen in vielen Arten, darunter Hausgeflügel, Schweinen und Menschen. Durch Neuordnung der segmentierten IAV Genom schnelle virale Evolution kann auftreten, und neue IAV Stämme häufig auftauchen. Schweine sind eine Spezies, die als Mischgefäß für die Neuordnung der iAVS von mehreren Wirtsarten dienen können 1. Derzeit gibt es drei Haupttypen von IAV häufigsten verwendete unter den nordamerikanischen Schweinen (H1N1, H1N2, H3N2) im Umlauf, aber mehrere IAV Einführungen von Menschen haben innerhalb dieser Subtypen führte zu umfangreichen IAV Vielfalt. 2 schnelle Entwicklung der iAVS infizier....
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Protokoll
Alle Schweine in der Sammlung der folgenden Daten verwendet werden, wurden unter der Ohio State University Institutional Animal Care und Verwenden Committee geschützt (Tiernutzung Protokollnummer 2009A0134-R1).
1. Herstellung der Virustransportmedium und Probensammlung Vials
- In 37 g Brain Heart Infusion zu 900 ml gereinigtem Wasser und mischen mit einem Rührstab und einem Magnetrührer unter Erwärmen auf 70 ° C, um das Pulver vollständig aufzulösen.
- Autoklavieren der Brühe bei 121 ° C für 15 min. Kühle auf der Tischplatte, bis die Brühe Raumtemperatur erreicht. Im Kühlschrank bei 4 ° C über Nacht, wenn nötig.
- ....
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Ergebnisse
Erfolgreiche Anwendung dieser Methode ergibt rRT-PCR ergibt sich, dass, begleitet mit der Verwendung eines internen Kontroll während der RNA-Extraktion und rRT-PCR, hat Show Proben enthalten PCR-Inhibitoren in jedem Umwelt Trümmern hob während der Probenahme. Nach der Probenimpfung sollte Virusisolierung Brunnen frei von sichtbaren Umwelt Schutt aus der Probe. Es gibt vernünftige Vereinbarung zwischen rRT-PCR-Ergebnisse und die Virusisolierung Ergebnisse mit dem Verständnis, dass PCR ergibt oft eine höhere IAV positive .......
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Diskussion
Sammeln von Proben von Schweinen unter Verwendung von Polyester-bestückte Nasenabstrichen hat bei der Durchführung von IAV Überwachung bewährt; jedoch die Verwendung des Nasenabstrich Verfahren behindert Überwachungsbemühungen aufgrund der erforderlichen Verwendung einer Schlinge zur Zurückhaltung. Nasal Tücher stellen eine Weiterentwicklung der aktuellen Schweinestichprobentechniken, um Stress auf die Menschen und Schweinen während der Probenahme zu minimieren. Während das Verfahren seit entwickelt und in Ausstellungss.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde teilweise mit Bundesmitteln von den Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS), dem National Institute of Allergy and Infectious Diseases, den National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, unter der Vertragsnummer finanziert. HHSN272201400006C.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| BBL Gehirn Herz Infusion | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
| Penicillin G Natriumsalz | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 μg |
| Streptomycinsulfat | AMRESCO LLC | 0382 | |
| Gentamicin Lösung | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
| Amphotericin B Lösung | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
| Kanamycin Sulfat | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
| TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
| Nalgen Diagnostikflaschen | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE mit weißem PP-Verschluss |
| Dermacea Mullschwamm, 8-lagig | Covidien | 441211 | 5,08 cm > 5,08 cm (2 Zoll & mal 2 Zoll) |
| Nitril Untersuchungshandschuhe | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |
Referenzen
- Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications. J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).
- Nelson, M. I., Vincent, A. L. Reverse zoonosis of influenza to swine: ne....
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Nachdrucke und Genehmigungen
