Eine einfache Methode für die automatisierte Festphasenextraktion von Wasserproben für die immunologische Analyse von kleinen Schadstoffe

Summary

Ein Protokoll für die Extraktion und Vorkonzentration von Östradiol aus Wasserproben unter Verwendung eines automatisierten und miniaturisierten Systems wird vorgestellt.

Abstract

Eine neue Methode zur Festphasenextraktion (SPE) des Umweltwasserproben vorgeschlagen. Der entwickelte Prototyp ist kostengünstig und benutzerfreundlich und ermöglicht eine schnelle, automatisierte und einfache SPE durchzuführen. Die vorkonzentrierte Lösung ist mit der Analyse durch Immunoassay kompatibel ist, mit einem niedrigen Gehalt an organischem Lösungsmittel. Es wird ein Verfahren zur Extraktion und Vorkonzentrierung natürliche Hormon 17β-Östradiol in 100 ml Wasserproben beschrieben. Umkehrphasen-SPE mit Octadecyl-Silica Sorbens durchgeführt, und die Elution wird mit 200 ul Methanol 50% v / v durchgeführt. Elutionsmittel wird durch Zugabe von VE-Wasser, die Menge an Methanol senken verdünnt. Nach der Vorbereitung der Säule manuell SPE wird das gesamte Verfahren automatisch innerhalb von 1 h durchgeführt. Am Ende des Prozesses wird Estradiol-Konzentration durch Verwendung eines handelsüblichen Enzym-gekoppelten Immunsorbens-Test (ELISA) gemessen. 100fach Vorkonzentration erreicht wird und der Methanolgehalt in 10% v / v. Vollständige Wiederherstellungen des Molekülswerden mit 1 ng erreicht / L versetzt entionisiertem und synthetischem Meerwasserproben.

Introduction

Probenvorbereitung ist ein wichtiger Schritt in jedem Analyseprozess. Insbesondere die Entfernung von Matrixeffekten, Verminderung von Interferenzen, und die Anreicherung des Analyten erforderlich sind, um präzise Ergebnisse zu erhalten, und zu erreichen geringe Nachweisgrenzen. Endokrin wirksamen Substanzen (EDCs) sind von besonderer Bedeutung wegen ihrer Wirkung auf die lebenden Organismen, auch wenn in sehr geringen Konzentrationen in der Umwelt. Das natürliche Hormon 17β-Estradiol ist auf dem EU-Wasserverschmutzung Merkliste vorhanden und neigen zu der Liste der im Rahmen der Europäischen Wasserrahmenrichtlinie geregelt prioritären Stoffe aufgenommen werden. Fest....

Protocol

Hinweis: Das folgende Protokoll beschreibt auf 100 ml Wasserprobe mit C18 Sorbens und Elution mit 50% v / v Methanol die SPE durchgeführt. Die angereicherte Probe wird verdünnt, um 10% V / V Methanol vor der Analyse mit einem Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) -Kit erreichen.

1. Vorbereitung der Reagenzien

1. Bereiten Sie die Wasserproben
   1. Vor jeder weiteren Schritt, filtern jeder 100 ml Wasserprobe mit 0,2 um Porengröße Filter.
   2. Spike-Bringen der Probe mit gewünschten Konzentration durch Verdünnen geeigneten Volumen Referenzlösung in einem Volumen von Wasser. B. Vorbereitung 100 ml Wasserprobe mit 100 ng / ....

Results

Reproduzierbarkeit der Sorbenspackung wurde durch Trocknen ausgewertet und Gewichten des pipettierten Sorbens in Glasfläschchen und das Ergebnis ist in Fig. 1 Reproduzierbarkeit der zum Zeitpunkt der Injektion gezeigt wurde 100 ml-Proben getestet, wie in Abb. 2 in der anfänglichen Konzentration und Pre- gezeigten konzentrierte stockte Proben wurden unter Verwendung eines handelsüblichen ELISA-Kit für die 17β-Estradiol be.......

Discussion

Ein neues Verfahren zur Herstellung von Wasserproben, gefolgt von Analyse unter Verwendung von Immunoassay vorgeschlagen. Das Gerät ermöglicht es, Festphasenextraktion automatisiert und benutzerfreundliche Art und Weise durchzuführen.

Die Filtration der Wasserprobe vor der Injektion in das System ist kritisch. Etwaige Partikel noch in der Lösung vorhanden wäre möglicherweise verursachen Verstopfung des fluidischen Netzwerk und behindern die SPE-Säule. Ein weiterer wichtiger Schritt ist die V.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Filtermembran 0,2 μ Mio. Porengröße	Merck	Millipore GNWP04700	Für die Probenfiltration
Nylonmembran 11 μ m Porengröße	Merck Millipore	NY1104700	Für SPE-Säule
Einweg-Biopsie-Stanze 5 mm	Medical Budget	39302439
Nucleodur C18 ec	Macherey Nagel	713550.01	50 μ m Partikeldurchmesser
Synthetisches Meerwasser	Sigma Aldrich	SSWS500-500ML
Methanol	VWR
17beta-Östradiol Standard	Enzo Life Science		300 ng/ml
17beta-Östradiol ELISA Kit	Enzo Life Science	ADI-900-008	96 Vertiefungen, Bereich 30 - 3.000 ng/L