Nachsäulenderivatisierung Mit Reaktionsfluß High Performance Liquid Chromatography Columns

Summary

Es wird ein Protokoll für die Verwendung von Reaktionsfluss-Hochleistungsflüssigkeitschromatographiesäulen für Methoden vorgestellt, die Post-Säulen-Derivatisierung (PCD) verwenden.

Abstract

Ein Protokoll für die Verwendung von Reaktionsfluss-Hochleistungsflüssigkeitschromatographiesäulen für Methoden, die Postsäulenderivatisierung (PCD) verwenden, wird vorgestellt. Eine große Schwierigkeit bei der Anpassung der PCD an moderne HPLC-Systeme und -Säulen ist der Bedarf an großvolumigen Reaktionsspulen, die das Mischen der Reagenzien und die anschließende Derivatisierungsreaktion ermöglichen. Dieses große Totvolumen in der Nachsäule führt zu einer Bandenverbreiterung, was zu einem Verlust der beobachteten Trenneffizienz und der Detektion in der Empfindlichkeit führt. Bei der Reaktionsfluss-Nachsäulenderivatisierung (RF-PCD) werden die Derivatisierungsreagenzien gegen den Fluss der mobilen Phase in einen oder zwei der äußeren Anschlüsse der Reaktionsflusssäule gepumpt, wo sie mit dem Säulenabfluss in einer Fritte vermischt werden, die in der Säulenendverschraubung untergebracht ist. Diese Technik ermöglicht ein effizienteres Mischen des Säulenabflusses und der Derivatisierungsreagenzien, was bedeutet, dass das Volumen der Reaktionsschleifen minimiert oder sogar ganz eliminiert werden kann. Es wurde festgestellt, dass RF-PCD-Methoden in Bezug auf die beobachtete Trenneffizienz und das Signal-Rausch-Verhältnis besser abschneiden als herkömmliche PCD-Methoden. Ein weiterer Vorteil der RF-PCD-Techniken ist die Möglichkeit, das aus dem zentralen Anschluss kommende Abwasser in seinem underivatisierten Zustand zu überwachen. RF-PCD wurde derzeit an einem relativ kleinen Bereich von Nachsäulenreaktionen getestet, es gibt jedoch derzeit keinen Grund zu der Annahme, dass RF-PCD nicht an eine bestehende Ein- oder Zweikomponentenreaktion nach der Säulenderivatisierung angepasst werden könnte (solange beide Reagenzien gleichzeitig zugegeben werden).

Introduction

Hochleistungs-Flüssigkeits-Chromatographie (HPLC), gekoppelt mit Nachsäulenderivatisierung (PCD) ist ein leistungsfähiges Werkzeug, das bei der Lösung einer Reihe von Fragen im analytischen Labor nützlich ist. Es kann verwendet werden , um Verbindungen zu detektieren , die ansonsten nicht nachweisbar mit der Suite von ^1,2 verfügbaren Detektoren sind, um das Signal des Zielanalyten erhöhen, was niedrigere Nachweisgrenzen und Bestimmungs ^3-5 oder selektiv ermöglicht Derivatisierung eines Zielanalyten , um zu vermeiden , Matrixeffekte ^6. Üblicherweise verwendete PCD Reaktionen schließen die Reaktion von Aminen, wie Aminosäuren, mit ortho....

Protocol

Achtung: Bitte beachten Sie Sicherheitsdatenblätter (MSDS) für alle Materialien und Reagenzien vor der Verwendung (dh MSDS für Methanol). Achten Sie darauf, den Einsatz aller geeigneten Praktiken Sicherheit bei Lösungsmitteln und High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Eluent Handhabung. Stellen Sie sicher, angemessene Nutzung von Engineering-Kontrollen von HPLC, Analysenwaage und Detektor Instrumentierung, und sorgen für die Verwendung persönlicher Schutzausrüstung (Schutzbrille, Handschuhe, Kittel, in voller Länge Hosen und geschlossene Schuhe).

Hinweis: Dieses Protokoll beschreibt 3 Methoden der Reaktionsströmungs Nachsäulenderivatisierung (RF-PCD) -Techniken, d....

Results

Die erste PCD - Verfahren, die zur Verwendung von RF-PCD wurde die Derivatisierung von Antioxidantien mit der 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazil Radikal (DPPH) ^{• 24} angepasst. Diese Reaktion wurde durch Koleva et al vorgestellt. ²⁵ und seit weit verbreitet ist. Die Detektion beruht auf der Entfärbung des DPPH ^• Radikale in Gegenwart von reaktiven Sauerstoffspezies, damit die Anwesenheit von Antioxidationsmitteln führt zu einem Abfall in der beobachteten Extinktion. Die DPP.......

Discussion

RF-PCD ermöglicht die effiziente Durchmischung des Derivatisierungsreagens mit dem HPLC Abstrom säulennachgeordneten ohne die Verwendung von Reaktionsspulen, die Effekte der Bandverbreiterung zu minimieren und die Trennleistung verbessert. RF-PCD Methoden wurden auch Verbesserungen in der Signalantwort in Bezug auf Nachweisverfahren gezeigt. Camenzuli et al. ²⁸ war die erste die Verwendung von Reaktionsströmungsspalten mit DPPH ^• zum Nachweis von ROS in einer Espressokaffeeprobe zu melden........

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
HPLC-Instrument	Agilent	1290 Serie HPLC
Zusätzliche Pumpe(n) für Derivatisierungssystem	Shimadzu	LC-20A
RF Säule			Nicht-kommerzieller
PEEK-Schlauch	Sigma Aldrich	Z227307
Säulenstopfen			Geliefert mit Säule
PEEK-Rohrschneider	Sigma Aldrich	Z290882
Analysenwaage Waage			4-Punkt-Analysenwaage
Stoppuhr			Nicht-wissenschaftliche Geräte
		zur Eluentensammlung	Jedes kleine Fläschchen mit flachem Boden ist geeignet, z. B. , HPLC-Fläschchen
HPLC-Fläschchen			Abhängig vom verwendeten Instrument
Gefäße für mobile Phasen und Derivatisierungslösung(en)	Sigma Aldrich	Z232211
General Laboratory Glaswaren			Messkolben, Pippetten etc. Menge und Volumen hängen von der Probenvorbereitungsmethode ab.
Methanol	Sigma Aldrich	34860
DPPH	Sigma Aldrich	D9132
Ammoniumacetat	Sigma Aldrich	17836
Ammoniak	Sigma Aldrich	320145	Ätzendes
Acetonitril	Sigma Aldrich	34998
Fluorescamin	Sigma Aldrich	F9015
4- Aminoantipyren	Acros Organics BVBA	AC103151000
Kaliumferricyanid	AnalaR	B10204-30