Methodenartikel

Quantitative Fundus-Autofluoreszenz für die Beurteilung von Netzhauterkrankungen

DOI:

10.3791/53577

11. März 2016

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Das retinale Pigmentepithel (RPE) unterstützt die sensorische Netzhaut durch das Recycling von Nebenprodukten des visuellen Zyklus, die sich als Lipofuszin ansammeln. Diese Produkte sind autofluoreszierend und können in vivo qualitativ abgebildet werden. Hier beschreiben wir eine Methode zur quantitativen Abbildung von RPE-Lipofuszin mittels konfokaler Scanning-Laser-Ophthalmoskopie.

Zusammenfassung

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Das retinale Pigmentepithel (RPE) steht der darüber liegenden sensorischen Netzhaut gegenüber und unterstützt die Funktion des visuellen Systems. Zu den Aufgaben des RPE gehören die Phagozytose und die Prozessierung der äußeren Photorezeptorsegmente durch Lysosomen-abgeleitete Organellen. Diese Abbauprodukte, die gelagert und als Lipofuszin-Granulat bezeichnet werden, bestehen teilweise aus Bisretinoiden, die breite Fluoreszenzabsorptions- und -emissionsspektren aufweisen, die klinisch als Fundus-Autofluoreszenz mit konfokaler Scanning-Laser-Ophthalmoskopie (cSLO) nachgewiesen werden können. Die Ansammlung von Lipofuszin ist mit zunehmendem Alter verbunden, findet sich aber auch in verschiedenen Mustern sowohl bei erworbenen als auch bei vererbten degenerativen Erkrankungen der Netzhaut. Daher ist die Untersuchung des Akkumulationsmusters und die Korrelation dieser Muster mit Veränderungen in der darüber liegenden sensorischen Netzhaut unerlässlich, um die Pathophysiologie und das Fortschreiten der Netzhauterkrankung zu verstehen. Hier beschreiben wir eine Technik, die von unserem Labor und anderen eingesetzt wird und cSLO verwendet, um den RPE-Lipofuszinspiegel sowohl bei gesunden als auch bei kranken Augen zu quantifizieren.

Einleitung

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Das retinale Pigmentepithel (RPE) unterstützt die Funktion der sensorischen Netzhaut durch eine Vielzahl von Prozessen 1. Die altersbedingte Makuladegeneration (AMD) ist die wichtigste Ursache für unheilbar Blindheit in den Industrieländern und wird durch Veränderungen im RPE gekennzeichnet, einschließlich dem Verlust von Pigment, Funktionsverlust und Atrophie. In AMD und in normalen Alterungs akkumuliert der RPE fluoreszierend, Lysosom abgeleiteten Organellen phagozytierten Photorezeptorfragmente, die als lipofuscin Granulat enthält. Die Anhäufung von RPE Lipofuscin ist gedacht worden oxidative Dysfunktion 1 , um anzuzeigen, aber neuere Studien....

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Protokoll

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Ethikerklärung: Alle in diesen Studien teilnehmenden Patienten wurden durchgeführt, so in Übereinstimmung mit genehmigten Institutional Review Board Aufsicht an der New York University School of Medicine.

1. Patientenauswahl und Erste Vorbereitung für Imaging

Hinweis: Die folgenden Materialien werden benötigt: 0,5% Tropicamid ophthalmische Lösung, 2,5% Phenylephrin ophthalmische Lösung, ausgestattet mit cSLO Spektralbereich der optischen Kohärenztomographie (SD-OCT) und interne Fluoreszenz Referenz.

  1. Vor der Bildgebung, entsprechend gesetzt bis cSLO zur Datenerfassung gemäß den Anweisungen des Herste....

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Ergebnisse

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Diese Technik wurde verwendet , qAF sowohl bei gesunden 13 und Krankheitszuständen 10-12 zu studieren. In gesunden Augen (Abbildung 1), AF von dem RPE emittiert wird , relativ gleichförmig durch den Fundus (1A) verteilt. Verringerter Intensität im zentralen Makularegion gesehen aufgrund von Makulapigment von lichtblockierenden und an den Seiten und Ecken des Bildes durch die Optik des Auges und der Kamera. Die Schiffe erscheinen dun.......

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Diskussion

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Abnormal RPE Lipofuszin Verteilung, ob erhöht oder verringert wird, ist ein empfindlicher Marker der Netzhauterkrankung und wird in der Regel mit dem Verlust der sensorischen Retina-Funktion verbunden. Hier beschreiben wir Anwendung qAF zur Bewertung von RPE Lipofuscin. Der Einbau eines internen Fluoreszenz Referenz für variable Laserleistung und Empfindlichkeit des Detektors 9 neben unserer standardisierten Bildgebungstechnik zur Korrektur ermöglicht eine zuverlässige Quantifizierung von NF - Pegel. Unser Zi.......

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Offenlegungen

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STA: keine Offenlegungen, JPG: keine Offenlegungen, RTS: Berater, Ocata Therapeutics.

Danksagungen

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Wir möchten unseren Mitarbeitern danken, Francois Delori, Tomas Burke, und Tobias Duncker.

Forschungsförderung: NIH / NEI R01 EY015520 (RTS, JPG) und unbeschränkte Mittel aus Forschungs Erblindung (RTB) zu verhindern.

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Spectralis HRA + OCTHeidelberg Engineering
0,5 % Tropicamid-Ophthalmische LösungJede Marke kann verwendet werden
2,5 % Phenylephrin Ophthalmische LösungJede Marke kann verwendet werden
Interne FluoreszenzreferenzHeidelberg Engineering
IGOR Pro SoftwareWaveMetrics

Referenzen

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  1. Strauss, O. The retinal pigment epithelium in visual function. Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).
  2. Ach, T., et al. Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium. In....

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Schlagwörter

Fundus AutofluorescenceRetinal Pigment EpitheliumConfocal Scanning Laser OphthalmoscopyLipofuscin QuantificationAge Related Macular DegenerationGeographic Atrophy AnalysisHigh Speed Image AcquisitionMean of 9 FramesInternal Fluorescent ReferencePupil Dilation Protocol

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