Dieses Protokoll beschreibt einen Hochdurchsatz-Assay zum Testen der Eiablagepräferenzen von Drosophila melanogaster bei Einzeltierauflösung. Dieser Assay bietet eine einfache, effiziente und skalierbare Plattform zur Identifizierung von Genen und Schaltkreiskomponenten, die einen einfachen Entscheidungsprozess steuern.
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Methodenartikel
Assay mit hohem Durchsatz Eiablage Präferenzen der einzelnen zu untersuchen
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Vor kurzem Eiablage bevorzugt von Drosophila als genetisch manipulierbaren Modell entstand die neuronale Grundlage einfacher Entscheidungsprozesse zu studieren. Bei der Auswahl von Standorten um ihre Eier abzulegen, sind weibliche Fliegen der Lage, die relative Attraktivität ihrer Optionen Ranking und die Auswahl von "größeren von zwei Waren." Allerdings sind die meisten Eiablage bevorzugt Assays sind nicht praktisch, wenn man will, eine systematische genetische Screening-Ansatz zu übernehmen für die Schaltung Basis zu suchen, diese einfache Entscheidungsprozess zugrunde liegen, wie sie sind populationsbasierte und arbeitsaufwendig einzurichten. Um den Durchsatz des Studiums der Eiablage Präferenzen der einzelnen Frauen zu erhöhen, entwickelten wir individuelle Kammern, die jeweils gleichzeitig Assay Eiablage Vorlieben von bis zu dreißig Einzel sowie ein Protokoll fliegt, die jedes Weibchen sorgt für eine hohe Eiablagerate (so dass ihre Präferenz ist leicht erkennbar und überzeugender). Unser Ansatz ist einfach auszuführenund produziert sehr konsistente Ergebnisse. Darüber hinaus können diese Kammern mit verschiedenen Aufsätzen ausgestattet werden, um Video die Eiablage Tiere Aufnahme zu ermöglichen und Licht für die Optogenetik Studien zu liefern. Dieser Artikel enthält die Baupläne für diese Kammern Herstellung und das Verfahren zur Herstellung der Fliegen in diesen Kammern untersucht werden.
Einleitung
Drosophila melanogaster ist ein leistungsfähiger genetischer Modellorganismus, um die neuronalen Grundlagen von Verhaltensweisen zu untersuchen. Die rasante Entwicklung genetischer Werkzeuge zur gezielten Manipulation von Neuronen und das Aufkommen ausgefeilter Verhaltensanalysewerkzeuge haben unsere Fähigkeit, die Schaltkreismechanismen zu entschlüsseln, die den sensomotorischen Transformationsprozessen verschiedener angeborener und erlernter Verhaltensweisen zugrunde liegen1-3, erheblich verbessert.
Die Eiablage von Drosophila ist ein geeignetes Modell, um die neuronalen Grundlagen einfacher Entscheidungsproz....
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Protokoll
1. Flies Vorbereitung zu test
- Kultur fliegt auf Standard-Melasse / cornmeal Medien bei Inkubator bei 25 ° C und 65% Luftfeuchtigkeit. Achten Sie darauf, nicht die Fläschchen überfüllen. Zum Beispiel setzen 8 Frauen und 6 Männer in einen schmalen Essen Fläschchen.
Hinweis: Die "narrow Essen Fläschchen" verwendet hier einen Innendurchmesser von 2,3 cm. Wir typischerweise etwa 10 ml fly Nahrung in jedem Fläschchen abgefüllt. Die Fliege Essen Rezept wir verwendet wird hier beschrieben: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html. - 2 - 3 Tage nach dem Schlüpfen Weibchen, bereiten Fläschchen mit frischer Hefe - Paste....
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Ergebnisse
Die Eiablage Kammern bestehen aus mehreren Teilen zusammengesetzt: ein Substrat (unten) Stück, einen Teiler (Mitte) Stück, eine Lade (oben) Stück, und 2 Schiebetüren (1A - D). Diese Stücke werden verwendet , um unabhängig Setup Fliegen und Substraten vor Eiablage Experimenten. 1F zeigt , wie Fläschchen aussehen sollte , wenn weibliche Fliegen bereit für Eiablage sind. Wenn Fliegen eine Wahl zwischen einem einfachen und einem Substrat Saccharose-haltige S.......
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Diskussion
Die Kammern und Protokolle hier beschrieben haben mehrere Verbesserungen gegenüber früheren Eiablage Assays. Erstens erhöhen sie den Durchsatz erheblich Präferenzen der einzelnen Tiere Untersuchung. Jede Kammer kann 30 einzelne Frauen-Assay und es dauert weniger als eine Stunde einzurichten. Zweitens erhöhen sie die Konsistenz der Eiablage Präferenzen gegenüber früheren Methoden. Die Standardisierung der Abmessungen der Arena, Größe der Eiablage Substrate und Abstand zwischen den Substraten macht es leichter, die Ergebn.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Danksagungen
Wir danken dem Duke Physics Shop, insbesondere Phil Lewis, für die Hilfe beim Bau des Verhaltensapparates und der Anhänge und bei der Erstellung der Zeichnung. Diese Arbeit wird von den National Institutes of Health unter der Fördernummer R01GM100027 finanziert.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Ultrareine Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| Saccharose | Sigma | S0389 | |
| Wasserbad | Fisher | 15-462-6Q | |
| LifeCam Cinema Webcam | Microsoft | H5D-00013 | |
| Rote LEDs | Cree | C503B-RAN-CA0B0AA1 | |
| Eiablagekammern | Speziell angefertigte | ||
| Kamerahalterungen | Speziell angefertigte | ||
| LED-Halterungen | Speziell angefertigte | ||
| Fly-Fläschchen (schmal) | Genesee | 32-116 v. Chr |
Referenzen
- Perisse, E., Burke, C., Huetteroth, W., Waddell, S. Shocking revelations and saccharin sweetness in the study of Drosophila olfactory memory. Curr. Biol. 23 (17), 752-763 (2013).
- Yamamoto, N. C., Koganezawa, M. Genes and circuits of courtship behaviour in Drosophi....
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Nachdrucke und Genehmigungen
