Method Article

HSV-Mediated Transgene Expression von chimären Konstrukten Behavioral Funktion von GPCR Heteromeren bei Mäusen zu studieren

DOI:

10.3791/53717

⸱

July 9th, 2016

 ,  , 
1Department of Psychiatry, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 2Department of Neurology, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 3Friedman Brain Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Department of Physiology and Biophysics, Virginia Commonwealth University Medical School

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dieser Artikel beschreibt, wie virale Vektoren in die Maus frontalen Kortex zu injizieren Verhaltenstests zu testen, die GPCR heteromeren Bildung erfordern.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Der heteromere Rezeptorkomplex zwischen 5-HT2A und mGlu2 wurde mit einigen der Verhaltensphänotypen in Mausmodellen der Psychose1,2 in Verbindung gebracht. Folglich stellt die Untersuchung struktureller Details der Interaktion zwischen 5-HT2A und mGlu2, die schizophreniebedingte Verhaltensweisen beeinflussen, ein leistungsfähiges translationales Werkzeug dar. Wie bereits gezeigt, wird die Kopf-Zuckungs-Reaktion (HTR) bei Mäusen durch halluzinogene Drogen hervorgerufen und diese Verhaltensreaktion fehlt bei 5-HT2A Knockout (KO)-Mäusen3,4. Darüber hinaus konnte durch die bedingte Expression des 5-HT2A-Rezeptors nur im Kortex gezeigt werden, dass 5-HT 2A-Rezeptor-abhängige Signalwege auf kortikalen Pyramidenneuronen ausreichen, um als Reaktion auf halluzinogene Drogen ein Kopfzucken hervorzucken 3. Schließlich konnte gezeigt werden, dass die durch die Halluzinogene DOI und Lysergsäurediethylamid (LSD) induzierte Kopfzucken-Verhaltensreaktion bei mGlu2-KO-Mäusen signifikant verringert ist5. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass mGlu2 zumindest teilweise notwendig für die 5-HT 2A-Rezeptor-abhängigen psychoseähnlichen Verhaltenseffekte ist, die durch LSD-ähnliche Drogen induziert werden. Dies liefert jedoch keinen Beweis dafür, ob der 5-HT 2A-mGlu2-Rezeptorkomplex für diesen Verhaltensphänotyp notwendig ist. Um diese Frage zu beantworten, wurden Herpes-simplex-Virus (HSV)-Konstrukte zur Expression von mGlu2 oder mGlu2ΔTM4N (mGlu2/mGlu3-chimäres Konstrukt, das den 5-HT 2A-mGlu2-Rezeptorkomplex nicht bildet) im frontalen Kortex von mGlu2-KO-Mäusen verwendet, um zu untersuchen, ob dieser GPCR-heteromere Komplex für die Verhaltenseffekte benötigt wird, die durch LSD-ähnliche Drogen induziert werden 6.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Halluzinogene wie LSD, Psilocybin und Meskalin zu erheblichen Veränderungen im menschlichen Bewusstsein, Kognition und Emotion 7-9. Die Inaktivierung von Serotonin 5-HT 2A - Rezeptor - Signal entweder durch genetische oder pharmakologische Ansätze verursacht deutlich Verhaltensreaktionen auf Halluzinogene in beiden Tiermodellen 3,10 und Menschen 11 gedämpft. Obwohl Halluzinogene anderen Rezeptor - Subtypen binden , 8, die 5-HT 2A -Rezeptor ist als die für die einzigartige Verhaltensaktivität dieser Chemikalien betrachtet.

Gruppe II metabotropen Glutamatrezeptoren (dh., MGlu2 und mGlu3) haben das Ziel beträchtlicher Aufmerksamkeit in Bezug auf den molekularen Mechanismus von Halluzinogenen und deren integrale Rolle Psychose zugrunde liegenden 12. Zuvor wurde gezeigt, dass Mäuse ohne Expression mGlu2 Protein (mGlu2-KO-Mäuse) unempfindlich sind, auf die zelluläre und Verhaltenswirkungen von hallucinogens 5. Es wurde auch vorgeschlagen, dass der 5-HT 2A -Rezeptoren und die mGlu2 einen bestimmten heteromeren Komplex bilden , durch den Serotonin und Glutamat - Liganden um das Muster der G - Protein - Kopplung in lebenden Zellen 1,2 modulieren.

Strukturell Trans (TM) Domänen 4 und 5 der mGlu2 eine fundamentale Rolle in heteromeren Bildung spielen mit dem 5-HT 2A -Rezeptor - 5. Zusätzlich zeigten weitere Untersuchungen , daß drei Reste am intrazellulären Ende TM4 von mGlu2 angeordnet sind notwendig , um die 5-HT 2A -Rezeptor -mGlu2 Hetero in lebenden Zellen 6 zu bilden.

Auf Basis dieser Erkenntnisse in heterologen Expressionssystemen beobachtet, beschreiben wir die Verwendung von HSV-vermittelte Expression von Wildtyp mGlu2 und mGlu2 / mGlu3 chimären Konstrukten im frontalen Kortex von mGlu2-KO - Mäuse , ob heteromeren Bildung zu testen , zwischen 5-HT 2A und mGlu2 ist notwendig, dass dieKopf-Twitch - Verhalten von halluzinogenen 5-HT 2A -Rezeptor - Agonisten induziert.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HINWEIS: Alle Verfahren für die Tierzucht und Sorgen wurden nach dem Committee (IACUC) Regulierung der Icahn School of Medicine am Berg Sinai Institutional Animal Care und Verwenden durchgeführt. Achten Sie darauf, sterile Handschuhe während des gesamten Verfahrens zu verwenden.

1. Drogen und Virus Vorbereitung

  1. Wirkstoffherstellungs
    1. Bereiten 15,0 ml Ketamin / Xylazin-Narkose von 1,35 ml von 100 mg / ml Ketamin gelöst und 0,75 ml 20 mg / ml Xylazin in 12,9 ml 0,9% Kochsalzlösung. Gründlich mischen Lösung.
  2. Viruspräparation
    1. Klonen Sie die mGlu2 und mGlu2ΔTM4N - Konstrukte in einem bicistronischen Herpes - simplex - Virus (HSV) Vektor nach Standardprotokollen zuvor 6 beschrieben. Paket , um die viralen Partikel wie zuvor beschrieben 6,13,14. Substitution von Resten Ala-677 4,40, Ala-681 4,44 und Ala685 4,48 in mGlu2 für Ser686 4.40, PhE690 4,44 und Gly-694 4,48 in mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) wurden bisher 6 beschrieben worden ist .
      HINWEIS: Es wurde zuvor gezeigt , dass das chimäre Konstrukt HA-mGlu2ΔTM4N an der Plasmamembran mit intaktem G - Protein-abhängige Signalgebung 6 exprimiert wird.
    2. Speichern von viralen Vektoren in -80 ° C, wenn sie nicht in Gebrauch ist. Thaw viralen Vektor auf Eis, und dann aliquotiert in 10 ul Aliquots. Für den chirurgischen Eingriff, halten auf dem Eis.

2. Chirurgie

  1. Chirurgie Vorbereitung
    1. Wiegen Sie die Maus und injizieren Maus mit geeigneten Dosis von Ketamin / Xylazin-Cocktail (Details siehe 1.1.1).
    2. Überprüfen Sie die Maus, um zu sehen, wenn sie richtig betäubt, quetschen Fuß und Schwanz für Schmerzreaktion, wenn nicht in der Lage, eine Antwort zu entlocken, wird die Maus richtig betäubt.
    3. Shave Mauskopf von der Basis des Schädels an der Spitze der Nase mit Klipper. Bewerben ophthalmische Gel auf die Maus afterward Blindheit der Maus zu verhindern.
    4. Legen Sie jede Spritze auf den Stereotaxierahmen. kippen dann senkrecht Abschnitt jedes Arms des stereotaktischen Rahmen, so dass sie 10 Grad weg von der normal sind. Sicherzustellen, dass die Arme geneigt ist, so daß die Nadeln einander zugewandt sind.
    5. Reinigen jede Spritze durch die Nadel mit 70% Ethanol gefüllt wird. Füllen die Nadel mindestens drei Mal, um sicherzustellen, dass die Spritze sauber ist.
    6. Sobald die Nadel gereinigt wurde, spülen Sie die Nadel durch die Nadel mit doppelt destilliertem H 2 O Füllung Sobald gespült, füllen jede Nadel mit 1,3 & mgr; l doppelt destilliertem H 2 O. Drehen Sie den Kolben der Spritze zu lösen 0,3 ul doppelt destilliertem H 2 O. Wenn Wasser Perlen an der Spitze der Nadel vorsichtig abwischen, Wasser entfernt. Wenn nichts aus der Spritze kommt, drücken Sie den Kolben vollständig nach unten und dann Reinigung der Spritze wiederholen.
    7. Nach dem Befüllen mit Wasser, dann die Spritze nach oben ziehen Befüllen der Spritze mit0,5 l Luft.
    8. Sobald die Luft und das Wasser in der Spritze sind, sorgfältig die Spritze mit 1,3 & mgr; l der Viruslösung füllen. An dieser Stelle dafür sorgen, dass das gesamte Volumen in der Spritze 2,8 & mgr; l ist. Wieder drehen Sie die Spitze der Spritze 0,3 ul Virus freizusetzen. Wenn Flüssigkeit Perlen an der Spitze der Nadel vorsichtig abwischen, Flüssigkeit entfernt. Wenn nichts aus der Spritze kommt, drücken Sie den Kolben vollständig nach unten und dann Reinigung der Spritze wiederholen.
  2. Chirurgie
    1. Bringen Sie die Maus an den Stereotaxierahmen, um sicherzustellen, das Stereotaxierahmen so einzustellen, dass der Schädel Ebene und flach ist. Bewerben povodine-Jod auf die exponierte Kopfhaut. Mit einem Skalpell, machen Sie einen sagittalen Schnitt entlang der Mittellinie des Schädels innerhalb des belichteten rasierten Bereich. Dann fügen Sie die Bürette Klemmen an die Haut an der Einschnittstelle, um sicherzustellen, dass der Schädel ausgesetzt bleibt.
    2. Verwenden Sie H 2 O 2 , um die Knochenhaut herauslösen , um die Nähte des ExposesSchädel. Nun, da die Bregma und Nähte sichtbar sind, sollten Sie die Stereotaxierahmen anzupassen, um sicherzustellen, dass der Schädel Ebene ist.
    3. Richten Sie die Nadelspitzen der Spritzen mit dem Bregma und notieren Sie die Koordinaten des Bregma. Berechnen Sie die Koordinaten des in denen die Nadeln werden eingefügt.
      1. Für die Rostra-Cauldal (RC) Ebene, fügen Sie 1,6 mm auf die aufgezeichneten RC Bregmas Koordinaten (+1,6 von Bregma). Für die Dorsal-Ventral (DV) -Ebene, subtrahieren 2,4 mm von den DV Bregmas Koordinaten aufgezeichnet (-2,4 von Bregma).
      2. Schließlich wird für die Medial Lateral (ML) Ebene, fügen Sie 2,6 mm auf die aufgezeichneten ML Bregmas Koordinaten (+2,6 von Bregma). Für alle Koordinaten, müssen Sie beide linken und rechten Koordinaten aufzeichnen, da dies eine bilaterale Injektion ist.
    4. Bringen Sie die Nadeln auf die gewünschten Koordinaten. Markieren Sie die Orte, wo die Nadeln werden eingefügt werden und mit einem Bohrer, bohren Sie die markierten Bereiche.
    5. Mit einem Wattestäbchen wipe überschüssiges Blut oder Knochenfragment entfernt.
    6. Bringen die Nadeln an den Schädel, wo die Spitzen der Nadeln die Oberfläche des Gehirns berühren. Dann senken Sie die Nadeln auf die gewünschten Koordinaten sie langsam zu senken.
    7. Sobald die Nadeln an den gewünschten Koordinaten sind, langsam um den Inhalt der Spritze zu injizieren, indem der Kolben der Nadel 0,1 & mgr; l pro Minute über einen Zeitraum von 5 min (insgesamt 0,5 & mgr; l) zu drehen.
    8. Sobald die Injektion vorgenommen wurde verlassen die Spritze in der Rinde für weitere 5 min.
  3. Closing Up / Pflege
    1. Entfernen Sie die Nadeln von der Maus Cortex stetig und langsam. Dann entfernen Sie die Maus vom Stereotaxierahmen.
    2. Bewerben Cyanacrylat (dermale Kleber) an die Basishautlappen aus dem Einschnitt und dann mit einer Pinzette die Hautlappen greifen und legen Sie sie zusammen.
    3. Lassen Sie den Cyanacrylat zu trocknen. Platzieren Sie die Maus im Käfig über ein Heizkissen (Heizkissen, wenn der surg optionalische Suite ist unter RT von 37 ° C gehalten - ansonsten nicht notwendig). Achten Sie darauf, mit der Maus auf einem Papiertuch zu setzen, um sicherzustellen, dass Bettwäsche nicht auf Operationsstelle haftet.
    4. In Abhängigkeit von der Länge des chirurgischen Verfahrens, sicherzustellen, dass die Mäuse innerhalb von 30 aus der Narkose ist - 60 min nach dem Verfahren. Nach der Operation wird das Tier in seinem eigenen Käfig gesetzt und überwacht, bis er bewusst wird, bevor sie ihre Zimmer zurückkehren zu erholen. Keine Analgetika sind postoperativ eingesetzt, weil sie die Ergebnisse unserer Experimente verändern können, die von einigen der Gehirn biochemische Wege zu modifizieren. Allerdings Tiere überwacht werden, bis sie aus der Narkose am Tag der Operation erholen und täglich nach der Operation auf Anzeichen einer Infektion und Bewertung von Schmerz / Not.

3. Leiter Zuckungsreaktion Experiment

  1. Konfiguration
    1. Führen Sie alle Verhaltenstests von 10.00 Uhr bis 14.00 Uhr, 2 - 3 Tage nach stereotaCTIC Injektion viraler Partikel.
    2. Auflösen von (±) -1- (2,5-Dimethoxy-4-iodphenyl) -2-aminopropan-hydrochlorid (DOI) in eine 0,9% ige Kochsalzlösung auf 2,0 mg / kg. Auch bereiten eine 0,9% ige Kochsalzlösung.
    3. Bereiten Sie einen Käfig (28 x 18 x 15 cm) ohne Betten und ein Tri-Pod verwenden, stellen Sie eine Kamera, so dass der Blick auf die Videokamera direkt über dem Käfig ist.
    4. Habituate die Mäuse in den Raum für mindestens 4 Stunden vor dem Beginn des Experiments.
    5. Stellen Sie einen Camcorder, um den Kopf zucken aufzunehmen.
  2. Experiment
    1. Positionieren Sie die Kamera so, dass sie direkt über einen eigenen Käfig ist. Kalibrieren Sie die Kamera so, dass das gesamte Heimkäfig im Blickfeld ist.
    2. Wiegen Maus und Maus intraperitoneal injizieren mit geeigneten Dosis von entweder 0,9% Kochsalzlösung oder DOI (0,01 ml / g). HINWEIS: Wenn eine Maus 25 Gramm wiegt, zu verwalten Dosis bis zu einem Gesamtvolumen von 0,25 ml.
    3. Platzieren Sie jede Maus zurück in ihre Heimat Käfig for 10 min. Nach 10 min Platz Maus in die Mitte des leeren Käfig nach Hause, und bestätigen Sie, dass es in dem Sichtfeld der Kamera keine blinden Flecken sind. Drücken Sie Aufzeichnung am Camcorder. Verlasse den Raum.
      HINWEIS: Mausbewegungen und verschiedene darin Verhaltensreaktionen (... Kopf zucken, Ohr kratzen, etc. verweisen auf zusätzliche Datentabelle 1 von Gonzalez-Maeso et al 2007 für die vollständige Liste der Verhaltensreaktionen induziert durch DOI) 3, wird aufgezeichnet 30 Minuten. Daher ist es wichtig, keine toten Winkel in dem Sichtfeld aufgezeichnet sind.
    4. Nach 30 Minuten stoppen Sie den Camcorder und Platz Maus wieder in Original-Käfig Aufnahme. Wiederholen Sie diesen Vorgang für jede Maus.
  3. Überprüfung
    1. Lassen Sie jeden Schiedsrichter Überprüfung die Bänder an die experimentellen Bedingungen der Maus blind machen (dh., Drogen während der Kopf verwendet zucken Experiment oder Virus während der intrakranielle Injektion verwendet wird )). Aufzeichnung manuell jeder Kopf zucken throughout das Video.
      HINWEIS: Kopfzucken als schnelle Schütteln Kopfbewegung durch eine Maus (ergänzende Video) durchgeführt definiert.
    2. Für jede Maus, im Durchschnitt die endgültige HTR Antwort von den drei Summen der blinden Schiedsrichter. Dann Gruppe diese Werte durch experimentellen Bedingungen und Durchführung von statistischen Analyse (dh., T-Test oder ANOVA).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vorherige Ergebnisse zeigen , dass die Kopf zucken murine Verhaltensreaktion zuverlässig und robust durch Halluzinogene hervorgerufen, und es fehlt die in 5-HT 2A -KO Mäuse 3. Darüber hinaus hat es sich gezeigt , dass der Kopf-Zuckungsreaktion durch die halluzinogene 5-HT 2A -Agonisten DOI und LSD ausgelöst deutlich in mGlu2-KO - Mäusen 5 verringert wurde. Obwohl jedoch frühere Ergebnisse überzeugend zeigen , dass 5-HT 2A und mGlu2 w...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zusammen mit früheren Ergebnissen in mGlu2-KO - Mäusen 5 sind die Ergebnisse mit und mGlu2 mGlu2 / mGlu3 chimären Konstrukten , die nicht bilden schlagen die 5-HT 2A Rezeptor - Komplex -mGlu2 in kultivierten Zellen, die die 5-HT 2A -mGlu2 heteromeren Rezeptor - Komplex in Maus frontalen Kortex ist erforderlich Kopfzucken Verhalten von LSD-ähnlichen halluzinogene 5-HT 2A -Rezeptor - Agonisten zu induzieren. Eine Einschränkung dieses Verfahrens ist, dass es nicht zu einem subzel...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH R01MH084894 beteiligte sich an der Finanzierung dieser Studie. Wir möchten Drs danken. Yasmin Hurd und Scott Russo am Mount Sinai School of Medicine für die Spende von Mäusen und die Verwendung ihrer Operation und Verhalten Einrichtungen während der Dreharbeiten zu dieser Arbeit.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
mGlu2 bicitronic Herpes-simplex-Virus (HSV) Vektor MIT CoremGlu2 und mGlu2DTM4N wurden unter der Kontrolle des CMV-Promotors in den bicistronischen HSV-GFP-Virusvektor p1005+ HSV, der GFP exprimiert, subkloniert. Die Viruspartikel wurden von der Viral Core Facility am McGovern Institute (MIT) produziert. Für weitere Informationen wenden Sie sich bitte an die Direktorin, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu)
mGlu2Δ TM4N bicitronisches Herpes-simplex-Virus (HSV) Vektor MIT CoremGlu2 und mGlu2DTM4N wurden unter der Kontrolle des CMV-Promotors in den bicistronischen HSV-GFP-Virusvektor p1005+ HSV, der GFP exprimiert, subkloniert. Die Viruspartikel wurden von der Viral Core Facility am McGovern Institute (MIT) produziert. Für weitere Informationen wenden Sie sich bitte an die Direktorin, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu)
GFP bicitronic herpes simplex virus (HSV) vector MIT CoremGlu2 und mGlu2DTM4N wurden unter der Kontrolle des CMV-Promotors in den bicistronischen HSV-GFP-Virusvektor p1005+ HSV, der GFP exprimiert, subkloniert. Die Viruspartikel wurden von der Viral Core Facility am McGovern Institute (MIT) produziert. Für weitere Informationen wenden Sie sich bitte an die Direktorin, Dr. Rachael Neve (rneve@mit.edu)
Xylazin Lloyd ListNr. 4811-20ml, NADA #139-236, NDC-Code(s): 61311-481-101,35 ml Ketamin (100 mg/ml) + 0,75 ml Xylazin (20 mg/ml) werden in 12,0 ml 0,9%iger Kochsalzlösung verdünnt
Ketamin VedcoKetaVed-10ml, NADA #200-029, NDC-Code(s): 50989-161-061,35 ml Ketamin (100 mg/ml) + 0,75 ml Xylazin (20 mg/ml) werden in 12,0 ml 0,9%iger Kochsalzlösung verdünnt
Ophthalmisches GelFisher ScientificNC0550805
Burret-ClipsFisher ScientificNC9268369
Feder chirurgische KlingeFisher ScientificNC9032736
Wasserstoff PeroxidFisher Scientific19-898-919 
Hamilton SpritzeFisher Scientific14815203
Hamilton™ Abnehmbare Nadeln mit kleiner Nabe (33 Ga)FisherScientific 14816206
Akku-MikrobohrschrauberFisherScientific NC9089241
Dermabond Dermal AdhesiveFisherScientific NC0690470
(±)-1-(2,5-Dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropanhydrochlorid (DOI)Sigma-Aldrich42203-78-1in 0,9%iger Kochsalzlösung bis zu einer Konzentration von 2,0 mg/kg
gelöst

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fribourg, M., et al. Decoding the Signaling of a GPCR Heteromeric Complex Reveals a Unifying Mechanism of Action of Antipsychotic Drugs. Cell. 147 (5), 1011-1023 (2011).
  2. Gonzalez-Maeso, J., et al. Identification of a serotonin/glutamate receptor complex implicated in psychosis. Nature. 452 (7183), 93-97 (2008).
  3. Gonzalez-Maeso, J., et al. Hallucinogens Recruit Specific Cortical 5-HT(2A) Receptor-Mediated Signaling Pathways to Affect Behavior. Neuron. 53 (3), 439-452 (2007).
  4. Gonzalez-Maeso, J., et al. Transcriptome fingerprints distinguish hallucinogenic and nonhallucinogenic 5-hydroxytryptamine 2A receptor agonist effects in mouse somatosensory cortex. J Neurosci. 23 (26), 8836-8843 (2003).
  5. Moreno, J. L., Holloway, T., Albizu, L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Metabotropic glutamate mGlu2 receptor is necessary for the pharmacological and behavioral effects induced by hallucinogenic 5-HT2A receptor agonists. Neurosci Lett. 493 (3), 76-79 (2011).
  6. Moreno, J. L., et al. Identification of Three Residues Essential for 5-HT2A-mGlu2 Receptor Heteromerization and its Psychoactive Behavioral Function. J Biol Chem. 287, 44301-44319 (2012).
  7. Geyer, M. A., Vollenweider, F. X. Serotonin research: contributions to understanding psychoses. Trends Pharmacol Sci. 29 (9), 445-453 (2008).
  8. Nichols, D. E. Hallucinogens. Pharmacol Ther. 101 (2), 131-181 (2004).
  9. Hanks, J. B., Gonzalez-Maeso, J. Animal models of serotonergic psychedelics. ACS Chem Neurosci. 4 (1), 33-42 (2013).
  10. Fiorella, D., Rabin, R. A., Winter, J. C. Role of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in the stimulus effects of hallucinogenic drugs. II: Reassessment of LSD false positives. Psychopharmacology (Berl). 121 (3), 357-363 (1995).
  11. Vollenweider, F. X., Vollenweider-Scherpenhuyzen, M. F., Babler, A., Vogel, H., Hell, D. Psilocybin induces schizophrenia-like psychosis in humans via a serotonin-2 agonist action. Neuroreport. 9 (17), 3897-3902 (1998).
  12. Moreno, J. L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Group II metabotropic glutamate receptors and schizophrenia. Cell Mol Life Sci. 66 (23), 3777-3785 (2009).
  13. Kurita, M., et al. HDAC2 regulates atypical antipsychotic responses through the modulation of mGlu2 promoter activity. Nat Neurosci. 15 (9), 1245-1254 (2012).
  14. Kurita, M., et al. Repressive Epigenetic Changes at the mGlu2 Promoter in Frontal Cortex of 5-HT2A Knockout Mice. Mol Pharmacol. 83 (6), 1166-1175 (2013).
  15. Rives, M. L., et al. Crosstalk between GABAB and mGlu1a receptors reveals new insight into GPCR signal integration. Embo J. 28 (15), 2195-2208 (2009).
  16. Milligan, G. The Prevalence, Maintenance and Relevance of GPCR Oligomerization. Mol Pharmacol. (84), Epub ahead of print 158-169 (2013).
  17. Ferre, S., et al. G protein-coupled receptor oligomerization revisited: functional and pharmacological perspectives. Pharmacol Rev. 66 (2), 413-434 (2014).
  18. Gonzalez-Maeso, J. GPCR oligomers in pharmacology and signaling. Mol Brain. 4 (1), 20(2011).
  19. Gonzalez-Maeso, J. Family a GPCR heteromers in animal models. Front Pharmacol. 5, 226(2014).
  20. Dragulescu-Andrasi, A., Chan, C. T., De, A., Massoud, T. F., Gambhir, S. S. Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) imaging of protein-protein interactions within deep tissues of living subjects. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (29), 12060-12065 (2011).
  21. Calebiro, D., et al. Single-molecule analysis of fluorescently labeled G-protein-coupled receptors reveals complexes with distinct dynamics and organization. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (2), 743-748 (2013).
  22. Fonseca, J. M., Lambert, N. A. Instability of a class a G protein-coupled receptor oligomer interface. Mol Pharmacol. 75 (6), 1296-1299 (2009).
  23. Hern, J. A., et al. Formation and dissociation of M1 muscarinic receptor dimers seen by total internal reflection fluorescence imaging of single molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (6), 2693-2698 (2010).
  24. Hlavackova, V., et al. Sequential inter- and intrasubunit rearrangements during activation of dimeric metabotropic glutamate receptor 1. Sci Signal. 5 (237), 59(2012).
  25. Irannejad, R., et al. Conformational biosensors reveal GPCR signalling from endosomes. Nature. 495 (7442), 534-538 (2013).
  26. Calebiro, D., Nikolaev, V. O., Persani, L., Lohse, M. J. Signaling by internalized G-protein-coupled receptors. Trends Pharmacol Sci. 31 (5), 221-228 (2010).
  27. Celada, P., Puig, M. V., Diaz-Mataix, L., Artigas, F. The hallucinogen DOI reduces low-frequency oscillations in rat prefrontal cortex: reversal by antipsychotic drugs. Biol Psychiatry. 64 (5), 392-400 (2008).
  28. Béïque, J. -C., Imad, M., Mladenovic, L., Gingrich, J. A., Andrade, R. Mechanism of the 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated facilitation of synaptic activity in prefrontal cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (23), 9870-9875 (2007).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

GPCR HeteromersHSV Transgene ExpressionFrontal Cortex InjectionHead Twitch ResponseStereotactic SurgerymGlu2 Knockout Mice5 HT2A ReceptorBehavioral PhenotypesImmunocytochemistryWestern Blot

Related Articles