Ein verbessertes Verfahren zur schnellen Intubation der Luftröhre in Mice

Zusammenfassung

Dieser Artikel stellt eine schnelle und einfache Methode zur Bleomycin direkt in die Luftröhre Maus über Intubation verabreicht wird. Die wichtigsten Vorteile dieser Methode sind, dass sie in hohem Maße reproduzierbar, leicht zu beherrschen ist, und nicht spezialisierte Ausrüstung oder langwierige Wiederherstellungszeiten erfordern.

Zusammenfassung

Trotz einiger anatomischer und physiologischer Unterschiede sind Mausmodelle weiterhin ein wesentliches Werkzeug für die Untersuchung menschlicher Lungenerkrankungen. Die Bleomycin-Toxizität ist ein häufig verwendetes Modell, um sowohl akute Lungenschäden als auch Fibrose zu untersuchen, und es wurden mehrere Methoden zur Verabreichung von Bleomycin (und anderen toxischen Wirkstoffen) in die Lunge entwickelt. Viele dieser Ansätze, wie z. B. die transtracheale Instillation, haben jedoch inhärente Nachteile, einschließlich der Notwendigkeit starker Anästhetika und Überlebensoperationen. In dieser Arbeit wird über eine schnelle, reproduzierbare Methode der intratrachealen Intubation berichtet, die eine milde Inhalationsanästhesie, die Visualisierung der Luftröhre und die Verwendung eines Surrogat-Spirometers zur Bestätigung der Exposition umfasst. Als Wirksamkeitsnachweis wurde 8-12 Wochen alten C57BL/6-Mäusen entweder 2,0 E/kg Bleomycin oder ein gleichwertiges Volumen PBS verabreicht, und sowohl die Schadens- als auch die fibrotischen Endpunkte wurden nach der Exposition gemessen. Dieses Verfahren ermöglicht es den Forschern, eine große Kohorte von Mäusen in relativ kurzer Zeit mit geringen Kosten und minimaler Nachsorge zu behandeln.

Einleitung

Trotz einiger anatomischen und physiologischen Unterschiede, ^ein Mausmodell weiterhin für die Modellierung menschlichen Biologie und Pathogenese der Erkrankung. ^{2 von einer} Haltung Standpunkt, Mäuse sind leicht zu handhaben, haben eine geringe Brutzeit, eine beschleunigte Lebensdauer und sind relativ preiswert von unschätzbarem Wert sein unterzubringen. Mit der Entwicklung der verschiedenen genetischen Stämme und Strategien (z. B. bedingte Knock-outs, Reporter Mäusen Abstammung-Tracing-Ansätze, etc.), sowie die große Auswahl an erhältlichen Reagenzien (z. B. Antikörper, rekombinante Proteine, Inhibitoren, etc.), Mäuse sind zu e....

Protokoll

Die Institutional Animal Care und Verwenden Komitees (IACUC) an der University of Washington und Cedars-Sinai Medical Center haben das Tier Arbeit notwendig für diese Studien zugelassen.

1. Vorbereitung

1. Sterilisieren sowohl dem stumpfen Ende einer Pinzette und den Niederhalter über Autoklaven.
2. Mit einem biologischen Sicherheitsschrank, bereiten eine Arbeits Lager von BLM in PBS aus dem gefriergetrocknetes Pulver. Beschallen die Lösung für 10 min bei 35 kHz auch sicherzustellen Mischen.
   Hinweis: Ein Gesamtvolumen von 30 bis 45 & mgr; l wird empfohlen Pipettieren Variation am unteren Ende zu verhindern, und Erstickung mit größeren Vo....

Ergebnisse

Intubierten Mäusen wurden täglich auf Gewichtsverlust und Not überwacht und getötet, 4, 10 oder 17 Tage später durch eine intraperitoneale Injektion von 2,5% 2,2,2-Tribromethanol. Bronchoalveoläre Lavage (BAL) wurde in drei Waschungen mit PBS gesammelt, wie an anderer Stelle beschrieben ²¹ und die rechte Lunge wurde in 10% Formalin, Paraffin eingebettet und gefärbt mit Masson Trichrom der von der University of Washington Histology and Imaging ^{Kern 22}

Diskussion

In Fällen, in denen Aerosolisierung aufgrund der begrenzten Verfügbarkeit Reagenz unpraktisch ist, Sicherheit oder Kosten, ist direkte tracheale Verabreichung eine überlegene Methode zur Abgabe von exogenen Mitteln in die Lungen ¹⁶ Transtracheale Instillation diese weit verbreitet zu bewerkstelligen ist. Jedoch, wie bei allen chirurgischen Eingriff, es führt auch damit das Potential für durch das Verfahren verursachten Komplikationen selbst und nicht notwendigerweise das Mittel eingeflößt wurde. ¹³.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Bleomycin zur Injektion, 30 Einheiten/Fläschchen	APP Pharmaceuticals, LLC	103720	Für beste Ergebnisse sollte BLM in PBS suspendiert, aliquotiert und als lyophilisierte Aliquote für den einmaligen Gebrauch gelagert werden.
Stumpfe Endzange
Zungenspatel (d. h. gebogene Valleylab-Klingenelektrode, 2,4 Zoll)	Covidien	E1551G	Vor Gebrauch eine 45-Grad-Biegung 1,5 cm von der Klingenspitze entfernt. Ein geeigneter Drücker kann auch aus jedem Metallwerkzeug ähnlicher Abmessungen hergestellt werden.
Exel Safelet Katheter 22G x 1"	Exel International	26746
1 ml Einweg-Tuberkulinspritze mit Slip-Tip (200/sp, 1600/ca)	BD	309659
0,2 ml Pipettierer und Filterspitzen
Fiber-Lite Illuminator. Modell 181-1: Modell 180 in Verbindung mit der Standard-Dual-Schwanenhalsbeleuchtung	von Dolan Jenner Industries, Inc.	181-1	LED-Beleuchtungen mit geringerer Leistung werden nicht empfohlen, da sie die Luftröhre nicht ausreichend beleuchten.
Intubationsboard			siehe Diagramm 1.
Farbiges Etikettenband: 0,5  in. Breit	Fisherbrand	15-901-15A
Sauerstoff
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, 1X	Corning	21-040-CV	Das Produkt sollte steril
sein Unsterile Seide Schwarz Geflochtene Nahtspule, 91,4 m, Größe 4-0	Harvard Apparat	517698
Tisch-Anästhesiegerät Isofluran	Highland Medical Equipment		http://www.highlandmedical.net/
Slide Top Induktions-Maus-Isofluran-Kammer	MIP / Anästhesie Technologies	AS-01-0530-SM
FORANE (Isofluran, USP) Flüssigkeit zur Inhalation 100 mL	Baxter	1001936040
Nanozoomer Digitales Pathologiesystem	Hamamatsu
IgM ELISA Quantifizierungskit	Bethyl Laboratorien	E90-101