Rezeptor-Autoradiographie-Protokoll für die Lokalisierte Visualisierung von Angiotensin II-Rezeptoren

Summary

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Beschreibung der Lokalisation von Angiotensin-II-Typ-1-Rezeptoren im Rattengehirn durch quantitative, densitometrische In-vitro-Rezeptor-Autoradiographie unter Verwendung eines Jod-125-markierten Analogons von Angiotensin II.

Abstract

Dieses Protokoll beschreibt Rezeptorbindungsmuster für Angiotensin II (Ang II) im Gehirn der Ratte ein Radioligand spezifisch für Ang II-Rezeptoren Rezeptor unter Verwendung von Autoradiographie-Mapping durchzuführen.

Gewebeproben werden geerntet und bei -80 ° C gelagert. ist ein Kryostat das Gewebe (Gehirn) und Auftauen montieren die Schnitte auf geladene Objektträger zu koronalen Abschnitt verwendet. Die Objektträger angebrachten Gewebeschnitte werden in ¹²⁵ I-SI-Ang II inkubiert Ang II - Rezeptoren radioaktiv zu markieren. Benachbarte Objektträger werden in zwei Gruppen unterteilt: "unspezifische Bindung" (NSP) in Gegenwart eines Rezeptor sättigenden Konzentration von nicht-radioaktiv markierten Ang II oder ein _AT1 - Ang II - Rezeptor - Subtyp (AT ₁ R) selektive Ang II - Rezeptor - Antagonist und ohne AT ₁ R - Antagonisten "Gesamtbindung". Einer sättigenden Konzentration von AT ₂ Ang II - Rezeptor - Subtyp (AT ₂ R) Antagonist (PD123319, 10 uM) ist auch in der incubatiauf Puffer ¹²⁵ I-SI-Ang II - Bindung an den AT ₁ R Subtyp zu begrenzen. Während eines 30 min Vorinkubation bei ~ 22 ° C, NSP Rutschen ausgesetzt sind 10 uM PD123319 und Losartan, während "Gesamtbindung" Dias 10 uM PD123319 ausgesetzt sind. Die Objektträger werden dann mit ¹²⁵ I-SI-Ang II in Gegenwart von PD123319 für "Gesamtbindung" und PD123319 und Losartan für NSP in Assay - Puffer, gefolgt von mehreren "wäscht" in Puffer inkubiert und Wasser zu entfernen Salz und nicht spezifisch gebundene Radioligand. Die Folien werden mit Schlag-Trockner getrocknet und dann einer Autoradiographie Film belichtet eine spezielle Folie und Kassette. Der Film wird entwickelt und die Bilder werden in einen Computer gescannt für visuelle und quantitative Densitometrie ein proprietäres Bilderzeugungssystem und eine Tabelle verwendet wird. Ein zusätzlicher Satz von Dias werden für die histologische Vergleiche Thionin-gefärbt.

Der Vorteil der Rezeptor-Autoradiographie unter Verwendung ist die Fähigkeit, zu visualisierenAng II - Rezeptoren in situ, in einem Abschnitt einer Gewebeprobe, und anatomisch den Bereich des Gewebes zu identifizieren , indem es zu einem benachbarten histologischen Bezugsabschnitt zu vergleichen.

Introduction

Kardiovaskuläre Erkrankungen weiterhin die häufigste Ursache für Tod und Behinderung in den Vereinigten Staaten zu sein, im Jahr 2011 ¹ mehr als 30% der Todesfälle in den USA verursacht. Aus den jüngsten Statistiken von der American Heart Association zeigen , dass mehr als eine Person in drei hat ein oder mehr Art von kardiovaskulären Erkrankungen. Kardiovaskuläre Forschung weiterhin Fortschritte gegen das Verständnis dieser Krankheit zu machen, aber als Generationen beginnen immer älter es ist zwingend notwendig, diese Bemühungen fortzusetzen. Das Renin-Angiotensin - System (RAS) spielt eine zentrale Rolle bei der Regulation des kardiovaskulären Systems in erster Linie von Atherosklerose, Entzündung, systemische Vasokonstriktion, und die Aktivierung des sympathischen Nervensystems (Figur 1) ^2-8 fördern.

Der RAS ist ein Hormonsystem, das aktiviert wird, wenn juxtaglomerulären Zellen der Niere in den Blutstrom Renin in Reaktion absondern, um Blutdruck verringert, erhöht sympathetic Stimulation oder verminderte Natriumfluss durch die Macula densa. Renin-Angiotensinogen metabolisiert (in der Leber synthetisiert) Angiotensin I zu bilden (Ang I). Ang I wird dann durch das Angiotensin-Converting-Enzym (ACE), ein Ektoenzym auf der luminalen Seite des vaskulären endothelialen Zellen metabolisiert, hauptsächlich in den Lungen und Nieren, Angiotensin II zu bilden (Ang II), das Haupt Effektor Peptid der RAS. Ang II ist in der Lage aktivierenden zwei Rezeptorsubtypen; der Typ 1 - Rezeptor (AT ₁ R) und der Typ - 2 - Rezeptor (AT ₂ R), die beide die das kardiovaskuläre System zu regulieren, beibehalten Flüssigkeits- und Elektrolyt Homöostase und sind nun die kognitive Funktion zu beeinträchtigen , und neurodegenerative Krankheitsprozessen ^8,9 betrachtet. Eine lokale, gehirnspezifische RAS wird berichtet, Ang II unabhängig zu synthetisieren. Im Gehirn wird das Vorläuferprotein Angiotensinogen in Astroglia ¹⁰ durch ein Renin-ähnliches Enzym zu Ang I ³ möglicherweise Prorenin umgewandelt synthetisiert, gebunden an den Rezeptor Prorenin¹¹ und überführt anschließend durch das Angiotensin-Converting - Enzym zu Ang II , die reichlich auf der extrazellulären Oberfläche von Neuronen im Gehirn ¹² exprimiert wird. Diese intrabrain erzeugt Ang II ist der Agonist für das Gehirn AT ₁ und AT ₂ Rezeptoren , die von durch Blut übertragbaren Ang II isoliert sind.

Während die AT ₁ R eine wichtige physiologische Rolle spielt, ist es für seine pathophysiologischen Wirkungen im ganzen Körper besser bekannt ist , in erster Linie das Herz - Kreislauf - System und die Nieren (Abbildung 2) zu beeinflussen. Wenn Ang II an den R AT ₁ bindet, verursacht es eine Vasokonstriktion; zunehmende Resistenz des Blutdrucks, um den Blutfluss und erhöht. Es fördert auch die Synthese und Sekretion von Aldosteron und Vasopressin, zu einer erhöhten Natrium- und Wasserretention führt. Diese Effekte können auch ischämischer Hirnschädigung und kognitiven Störungen induzieren und an der Parkinson-Krankheit, Alzheimer-Krankheit und Diabetes sowie kürzlich Lernen und Gedächtnis beeinflussen ^13-15 identifiziert. Es gibt eine Rückkopplungsschleife in der RAS daß AT ₁ R auf den juxtaglomerulären Zellen in der Niere inhibiert Renin - Sekretion. Interessanterweise im Allgemeinen die AT ₂ R Gegen regelt die Wirkung von AT ₁ R, was zu Vasodilatation, Neuritenwachstum, axonalen Regeneration, Anti-Proliferation und cerebroprotection unter vielen anderen ^16-20. Der R AT ₂ hat auch als Ziel für Anti-Bluthochdruck und vor kurzem, anti-Krebsmittel ²¹ identifiziert. Die Bestimmung der Lokalisierung und Dichte von Ang II-Rezeptoren in verschiedenen Geweben und wie werden sie durch verschiedene Behandlungen und Krankheitszuständen mit quantitativen densitometrischen Rezeptor Autoradiographie die Rolle spielt, die RAS in bestimmten Krankheiten aufdecken helfen beeinflusst.

Rezeptor-Autoradiographie wurde seit über 30 Jahren als wirksames Verfahren zum Anzeigen der Anwesenheit von Angiotensin I verwendetI - Rezeptoren und andere Komponenten der RAS im Gehirn und anderen Geweben der Ratte, Maus, Meerschweinchen, Hund und Mensch unter einer Vielzahl von experimentellen Bedingungen ^22-34. Die Bedeutung Ang II - Rezeptoren der Lokalisierung innerhalb des Gehirns ist , dass eine funktionelle Neuroanatomie zu den Aktionen der Ang II im Gehirn anwenden kann, beispielsweise auf das Vorhandensein von AT ₁ R in paraventricularis Nukleus des Hypothalamus (PVN) eine Funktion von Ang II im Gehirn zu stimulieren Vasopressin, Oxytocin oder Corticotropin-Releasing-Hormon (CRH) Freisetzung oder Aktivierung des sympathischen Nervensystems. So Medikamente, die den AT ₁ R blockieren könnten mit Überaktivität des Gehirns RAS assoziiert einige dieser PVN-vermittelte Effekte zu verringern. Unfertige legt nahe , dass die Verwendung von AT ₁ R - Antagonisten posttraumatische Belastungsstörung (PTSD) -induzierte Freisetzung von CRH verringern und lindern die Symptome von PTSD (Hurt et al., Zur Veröffentlichung eingereicht). Der PVN, subfornicalOrgel (SFO) und Amygdala zur Regulierung der Homöostase, Appetit / Durst, Schlaf, Gedächtnis, emotionale Reaktionen bekannt, und sind die Zielgebiete dieser Demonstration Studie. Diese Regionen wurden durch Sammeln Koronalschnitte eines Gehirns auf Mikroskop-Objektträger untersucht, und Behandeln der Schnitte mit spezifischen Inhibitoren zusammen mit einem spezifischen Radioligand für Ang II-Rezeptoren. In dieser Studie wurden alle Materialien und Reagenzien zusammen mit vorgeschlagen Anbieter aufgelistet sind, wurde Jod-125 verwendet , um einen Ang II - Rezeptor - Antagonist radioaktiv zu markieren, Sarcosin ^1, Isoleucin ⁸ Ang II (SI Ang II), die dann als mono ¹²⁵ I gereinigt wurde -SI Ang II Methoden unter Verwendung von HPLC wie zuvor ³⁵ beschrieben. Die Verwendung dieser hohen spezifischen Aktivität Radioligand ermöglicht die Visualisierung von Bereichen mit niedriger, mittlerer und hoher Rezeptordichte nach dem Belichten der radiomarkierten Abschnitte Röntgenfilm. Durch den Film mit Gehirn Paste Standards kalibriert bekannten Mengen von Jod-125 enthält, die spezifische MengeRezeptor Ang II in einem Bereich Bindung kann quantifiziert werden. In experimentellen Untersuchungen kann die Ang II-Rezeptor in den Gehirnen von Versuchspersonen Bindung in den Gehirnen von Kontrollpersonen, die verglichen werden. Dies kann angeben, ob die Wirkungen von Ang II in Reaktion auf eine genetisch bedingte Erkrankung verändert sind, phänotypische Abnormalität, Krankheitszustand oder medikamentöse Behandlung. Dieses Wissen kann dann zur Entwicklung von Therapien angewendet werden, Krankheiten, die mit Dysregulation des RAS verbunden zu behandeln. Alternative Techniken , die Rezeptor identifizieren Bindungsstellen, aber mit reduzierter anatomischen Auflösung sind Bindungsassays , die Gewebemembran - Zubereitungen verwenden aus Gewebehomogenisate abgeleitet, die mit dem Radioligand über einen Bereich von Konzentrationen Radioligand - Bindungsaffinität als die Dissoziationskonstante (K _D zu bewerten inkubiert ) und die maximale Bindungskapazität (B _max) des Gewebes von Interesse.

Das hier beschriebene Protokoll kann in fünf Haupt Co gebrochen werdenmponents: Vorbereiten Gewebeschnitten für Receptor Autoradiographie; Rezeptor-Autoradiographie; Filmbelichtung und Entwicklung; Histologie; und Densitometrische Bildanalyse.

Protocol

Alle Tierverfahren für diese Studie durchgeführt von der Institutional Animal Care und Use Committee von Nova Southeastern University in Übereinstimmung mit dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren genehmigt wurden, ^8. Auflage (The National Academies Press, Washington, DC, 2011 ).

1. Vorbereiten Gewebeschnitten für Receptor Autoradiographiestift

1. Nach dem Opfer, Ernte frische Hirngewebe und in Alufolie wickeln und in einen -20 ° C Gefrierschrank so schnell wie möglich. Um die richtige Form beibehalten, legen Gehirne in einem Gehirnform, die das Innere des Schädels simuliert, in Alufolie wickeln und in eine - 20 ° C Gefrierschrank. Nach 30 min Ort Gewebe in einem verschließbaren Gefrierkombination Aufbewahrungstasche und für die Langzeitlagerung zu einem -80 ° C Gefrierschrank bewegen.
   1. Besorgen Sie sich die frisch gefrorene Gewebeprobe von Interesse aus dem -80 ° C Gefrierschrank und Transfer zu einem Kryostaten auf ein Minimum von -10 ° C und maximal 18 ° C eingestellt, Auftauen zu vermeiden.
   2. Legen Sie die Probe auf die Gewebehalterung mit einem Glykol und Harzbasis Einbettmediums nur ein kleiner Teil der Probe in das Medium eingebettet wird. Für Gehirn ist das Gehirn vertikal montiert in der koronalen Ebene zu ermöglichen sectioning.
2. Legen Sie das Gewebe montieren auf dem Mikrotom innerhalb des Kryostaten und ziehen Sie sie fest an ihrem Platz. Sicherstellen, dass die linken und rechten Seite des Gehirns sind in den gleichen antero-posterior-Koordinaten, und die dorso-ventralen Achse senkrecht zu häufig verwendeten Gehirn Atlanten.
3. Beginnen mit der gewünschten Dicke Schneiden (20 & mgr; m empfohlen) und Auftauen die Schnitte auf Objektträger in vertikaler Richtung Halterung eine größere Oberfläche des Raumes in der Folie zu haben. Sammeln Schnitte auf Objektträger in aufeinanderfolgende Gruppen von fünf, dh der erste Satz von Schiebern versehen sind 1-1, 1-2, 1-3, 1-4 und 1-5 (Figur 3).
4. Nach einer Reihe von Folien mit Abschnitten Befüllen lufttrocknen lassen Folien für bis zu 1 Stunde, dann die sli platzierendes in einem Kunststoff-Gleitkastens in einer selbstdichtenden Gefrierschrank Aufbewahrungstasche, und bei -20 ° C.

2. Receptor Autoradiographiestift

ACHTUNG: Die Radioaktivität. Verwenden Sie Schutzkleidung Radioaktivität zu behandeln. Die Entsorgung wird bei Einrichtung abhängig und müssen Richtlinien folgen richtig (Halbwertszeit 60 Tage) oder abgeholt werden von einem zertifizierten Unternehmen zu zerfallen.

1. Entfernen Sie die "-1" und "-2" Dias von Interesse aus dem -20 ° C Gefrierschrank und montieren in Schiebegriffe (Abbildung 5). Montieren Sie die "-1" Dias zusammen für "nicht-spezifische" Behandlung, und die "-2" Folien für 'total' Behandlung. "Nicht-spezifische" Gläser enthalten 10 uM Endkonzentrationen von PD123319 einem AT ₂ R - Antagonisten, und Losartan ein AT ₁ R - Antagonisten, in Testmedium Puffer (AM5) (Tabelle 1), die "Gesamt" Bindung Gläser werden nur 10 enthalten uM PD123319 in AM5.
2. Kehren Sie die Rutschegreift die Dias in die Vorinkubation Färbetrog mit 35-40 ml AM5 und entsprechende Inhibitoren für 30 Minuten bei Raumtemperatur gefüllt zu platzieren. Starten Sie nachfolgende Sätze in ihrer Vorinkubation Bad in 4-Minuten-Intervallen.
3. Objektträger sofort aus der pre Inkubationslösung übertragen an die Inkubation slide mailers 10 ml AM5 enthält, sowie eine vorbestimmte Konzentration von ¹²⁵ I-SI-Ang II (berechnet in Abbildung 4) mit den jeweiligen Inhibitoren für 60-90 min bei Raum Temperatur. Wenn ausreichend Radioligand ist, kann 10 Folien platziert werden in modifizierten Schiebegriffe (Rücken an Rücken) und mit ¹²⁵ I-SI-Ang II in Färbetrog inkubiert.
4. Platz gleitet zurück in die Schiebegriffe (falls erforderlich), Fleck, und spülen Sie vorsichtig zur Verwirbelung 1-2 sec in 400 ml destilliertem Wasser in zwei getrennten Behältern.
5. Die Objektträger nacheinander in vier Coplin Gläser mit 35-40 ml AM5 für genau 1 min jeweils (wie in Abbildung 4 dargestellt </ Strong>).
6. Nach der letzten 1 Minute Spülen, vorsichtig schwenken die Abschnitte für 1-2 sec in vier Änderungen eiskaltem destilliertem Wasser.
7. Föhnen Sie die Folien mit kühler Luft (Achtung: heiße Luft verflüchtigt sich die radioaktive Verbindung) unter Verwendung von vier Haartrockner aus verschiedenen Winkeln für 4 min (Abbildung 5) eingerichtet, bis alle Abschnitte trocken sind, dann legen Sie auf einem Papiertuch.
8. Berg Träger mit Gewebe auf einen Karton für Apposition zu einem Röntgenfilm mit doppelseitigem Klebeband nach oben zeigt.
9. Berg mindestens eine, ¹²⁵ Jod Kalibrierstandard Schieber auf jedem Karton (Abbildung 6).
   Hinweis: Kalibrierstandards von Hirn Paste bestehen gründlich mit ¹²⁵ Jod an eine Verbindung gebunden gemischt , um einen Phenolring enthält, verdichtet durch Zentrifugation in einer 1 ml Tuberkulin - Spritze, die mit der gleichen Dicke wie die Gehirnschnitte geschnitten Kryostaten und auftauen montiert auf Mikroskop Dias. Alternativ Standards ¹²⁵ I KalibrierungKunststoffharz bei 20 & mgr; m Dicke geschnitten können kommerziell erhalten werden. Das Kunststoffharz in diesen Standards schirmt den Film partiell vor der Strahlung, so dass eine Gewebeäquivalenz von ~ 40% sollten in die Kalibrierungs berücksichtigt werden.

3. Film Belichtung und Entwicklung

1. Fahren Sie mit einer Dunkelkammer mit einem Riemen-zurück Röntgenkassette und Autoradiographie Film. Öffnen Sie die Kassette und legen Sie den Karton mit Dias innen (Abbildung 6).
   1. Schalten Sie das Licht aus, und schalten Sie den Dunkelkammerlicht. Öffnen Sie vorsichtig die Schachtel mit den X-Ray Film, ein Film zu entfernen, und legen Sie den Film glänzenden Seite nach oben (mit dem gezackten Rand auf der unteren rechten Ecke) oben auf den Schlitten in der Kassette. Schließen Sie die Kassette vorsichtig und verdrehen Sie die Verriegelungsstangen Licht (Abbildung 6) heraus zu versiegeln. Belichten der Objektträger für mehrere Tage bis mehrere Wochen bei -20 ° C.
2. In der Dunkelkammer, öffnen Sie die Kassette und fahren Sie mit dem Filmentwicklungs process.
   1. Legen Sie die Dias in die Fächer nacheinander; Entwickler für 2 min, Wasser 5% Eisessig für 30 Sekunden enthält, und Fixiermittel für 5 min. Die Filme werden die in eine Schale gelegt mit Wasser 20 Minuten lang läuft, dann nicht länger als 10 Sekunden in Photoflo gestellt und gehängt.
      Anmerkung: Die Belichtungszeit wird empirisch bestimmt und mehrere Filme mit unterschiedlichen Belichtungszeiten beinhalten kann: lange genug messbare Signale von den Bereichen mit geringer Bindungs ​​zu erhalten, aber nicht so lange, wie der Film durch Bereiche mit hoher Bindungs ​​zu sättigen. Sobald akzeptablen Belichtungen erhalten werden, dann mit dem nächsten Schritt fort.

4. Histologie

1. Bereiten Sie die Thionin - Farbstoff und Färbereagenzien (Tabelle 2, Abbildung 7).
   1. Legen Sie die "-3" Folien in der Folienträger, und die Übertragung in der angegebenen Reihenfolge mit entsalztem Wasser beginnt für 1 min, dann Thionin-Farbstoff-Lösung für 10 min, gefolgt von drei Einbrüche in deionized Wasser und einer 30 sec waschen in VE-Wasser.
   2. Im Anschluss an das Wasser, legen Sie die Dia-Rack in Ethanol wäscht wie folgt; 50%, 70% und 90% für 30 sec, gefolgt von zwei Waschungen Ethanol bei 100% für je 1 min. Schließlich legen Sie die Objektträgergestell in Xylol für 3 Minuten, dann übertragen auf einen zweiten Xylol-Lösung für 5 min.
2. Jeweils einen Objektträger in einer Zeit aus dem letzten Xylolbad und decken die obere Kante des Schlittens mit einer Harzbasis in einem organischen Lösungsmittel Eindeckmediums, und legen Sie eine 24 mm x 60 mm Deckglas auf die Folie. Lassen Sie Folien ausreichend trocken für ~ 48 Stunden und dann scannen in den Computer bei 2.400 dpi Graustufen.

5. Densitometrische Bildanalyse

1. Legen Sie den Film glänzende Seite nach unten, mit dem gezackten Rand auf der unteren linken Ecke und scannen eine proprietäre Scanner der Lage, die Filmdichte Informationen ohne jegliche Verzerrung in dem Abbildungssystem Computer zu übertragen.
2. Öffnen Sie die proprietäre Bildgebungs sysTEM- und verwenden die Kalibrierungsbalken Kalibrierstandards für zukünftige densitometrische Analyse der Bilder auf dem Film (- 12 Figuren 9) herzustellen.
3. Messen Sie Bereiche von Interesse entweder durch eine Vorlage zur Gründung oder empirisch umreißt die Bereiche von Interesse. Die Daten werden die gesammelten und basierend auf dem Film getrennt, entweder Kontrolle oder Wildtyp (Abschnitt) und Region. Stellen Sie sicher , Dichte (fmol / g) enthalten, Scan - Bereich und die gesamte Zielgebiet in Messungen (Abbildung 9).
   1. Stellen Sie den Scanbereich Bars indem sichergestellt wird, dass Region von Interesse fällt zwischen den Parametern der Hervorhebung (Abbildung 10).
   2. Exportieren von Daten in eine Tabelle (Tabelle 4). Multiplizieren Sie die Dichte mal die Gesamtzielbereich, dann teilen Sie durch den Scan-Bereich, um den Wert für die Bindung von diesem spezifischen Bereich zu erhalten. Sobald dies für alle Messwerte durchgeführt wird, das Substrat die etablierte unspezifische von insgesamt die spezifische Bindung p zu ergebenübel nehmen. Mittelwerte können auch für diese Werte durchgeführt werden.

Results

Der Überblick über den Stoffwechselweg des Renin-Angiotensin - System ist in Abbildung 1 und den direkten Fokus auf die Angiotensin - II - Rezeptor - Subtypen (AT ₁ R und AT ₂ R) dargestellt ist in Abbildung 2 beschrieben. Abbildung 3 zeigt die Übertragung von koronalen Hirn Schnitte auf Objektträger, die in Figur 4 gesehen werden dann mit einer vorbestimmten ¹²⁵ I-siang II - Konzentratio...

Discussion

Das beschriebene Protokoll identifiziert die Visualisierung von "total" und "nicht-spezifische" Bindung des Radioliganden in benachbarten Abschnitten der koronalen Abschnitte eines Nagetier Gehirn zuvor geerntet und bei -80 ° C gelagert, und jedes Gewebe leicht auf praktisch sein kann, dass hat anatomisch Unterbauten, die Differential-Display Mengen an Rezeptoren oder Radioligand-Bindungsstellen aufgelöst. Die Verfahren im Protokoll beschrieben sind einfach und die Analyse ist entscheidend für die ko...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
500 ml Kunststoffbecher	Fisher	02-591-30
24 mm x 60 mm Deckgläser	Fisher	22-050-25
Autoradiographie-Bildgebungsfilm 24 mm x 30 cm	Carestream-Biomax MR Film	891-2560
Bacitracin (aus Bacillus licheniformis)	Sigma	B-0125
Kartonbogen 8 x 11	Halbmond Illustrationskarton #201	201
Coplin Jars	Fisher Scientific	E94
Gewerbliche Haartrockner	Conair	Modell SD6X
Einweg-Kulturröhrchen	Fisher	14-961-26
EDTA (Dinatriumsalz, Dihydrat)	USB Corporation	15-699
Ethanol	Fisher	16-100-210
Formulary Substitute für D-19 Developer	Photographers Formulary, Inc.	01-0036
Eisessig	Fisher	A38 SI-212
Histoprep/OCT	Fisher	SH75-125D
Film Fixer	Kodak	5160320
Photo flo	Kodak	1464502
Losartan	Fisher/Tocris	37-985-0
MCID™ Core 7.0	MCID	N/A
NaCl	Fisher	S271
Peel-A-Way Objektträgergriffe	VWR	48440-003
Permount	Fisher	SP15-100
PD123319	Fisher	13-615-0
Premium geladene Objektträger, fein geschliffene Kante	Premiere Mikroskop Objektträger	9308W
125I Liganden	Perkin Elmer	NEX- 248
125SI-Ang II	George Washington University	Radiojodiert von Dr. Speth
Slide Mailers	Fisher Scientific	HS15986
Natriumdibasisches Phosphat wasserfrei (Na2PO4)	Fisher	RDCS0750500
Natriumacetat (wasserfrei)	Fisher	BP333-500
Thionin	Fisher	T409-25
Röntgenkassette (10 x 12)	Spectronics Corporation	Viereckige
Xylol-Kassette	Fisher	X3P-1GAL