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Methodenartikel

Gleichzeitige Detektion von c-Fos Aktivierung von mesolimbischen und mesocorticalen Dopamine Belohnung Seiten Nach Naive Zucker und Fett Verschlucken in Ratten

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DOI:

10.3791/53897

⸱

24. August 2016

 ,  , 
1Behavioral and Cognitive Neuroscience Cluster, Psychology Doctoral Program, The Graduate Center, CUNY, New York, NY, 2Department of Psychology, Queens College, CUNY, Flushing, NY, 3Behavioral and Cognitive Neuroscience Cluster, Psychology Doctoral Program, The Graduate Center, CUNY, Flushing, NY

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Das Ziel dieser Studie ist Belohnung bezogenen verteilten Gehirnnetzwerken zu identifizieren, indem eine zuverlässige immunhistologische Technik zelluläre c-fos-Aktivierung begrenze gleichzeitige Änderungen in Dopaminbahnen und Anschlußstellen nach neuartigen Aufnahme von Fett und Zucker in Ratten zu messen.

Zusammenfassung

In dieser Studie wird zelluläre c-fos-Aktivierung Effekte neuartiger Einnahme von Fett und Zucker auf Gehirn Dopamin (DA) Wege bei Ratten zu bewerten. Die Aufnahme von Zucker und Fette sind durch ihre angeborene Attraktionen sowie gelernt Vorlieben vermittelt. Gehirn Dopamin, insbesondere Meso-limbischen und Meso-kortikalen Projektionen aus dem ventralen Tegmentum (VTA), wurde in beiden dieser ungelernten und gelernt Antworten gebracht. Das Konzept der verteilten Netzwerken im Gehirn, wobei mehrere Standorte und Sender / Peptid-Systemen interagieren, wurde schmackhafter Nahrungsaufnahme vermitteln vorgeschlagen, aber es gibt Hinweise empirisch demonstriert solche Aktionen. So entlockt Zuckeraufnahme DA Freisetzung und erhöht c-fos-like Immunreaktivität (FLI) aus einzelnen VTA DA Projektionszonen einschließlich der Nucleus accumbens (NAC), der Amygdala (AMY) und medialen präfrontalen Kortex (mPFC) sowie die dorsale Striatum. Ferner sind diese Website zentrale Verwaltung von selektiven DA-Rezeptor-Antagonisten ins differentiell Erwerb und die Expression von konditionierten Geschmacksvorlieben von Zucker oder Fette hervorgerufen reduzieren. Ein Ansatz, mit dem zu bestimmen, ob diese Seiten als ein verteiltes Netzwerk Gehirn als Reaktion auf Zucker oder Fettaufnahme in Wechselwirkung wäre gleichzeitige beurteilen, ob die VTA und seine wichtigsten mesotelencephalic DA Projektionszonen (prälimbischen und infralimbischen mPFC, Kern und Schale der NAK, basolateralen und zentral-cortico-medialen AMY) würde sowie die dorsale Striatum koordinierte Display und gleichzeitiger FLI Aktivierung nach oraler, unkonditionierten Aufnahme von Maisöl (3,5%), Glukose (8%), Fructose (8%) und Saccharin (0,2 %) Lösungen. Dieser Ansatz ist ein erfolgreicher erster Schritt bei der Ermittlung der Machbarkeit der zellulären c-fos-Aktivierung gleichzeitig in allen relevanten Gehirn Sites mit Belohnung bezogenes Lernen in der Einnahme von schmackhafte Nahrung bei Nagetieren zu studieren.

Einleitung

Gehirn Dopamin (DA) hat in zentralen Antworten auf die Aufnahme von Zucker schmackhaft durch vorgeschlagen hedonischen 1,2, Aufwand im Zusammenhang mit 3 und Gewohnheit-basierte 4,5 Wirkungsmechanismen in Verbindung gebracht. Der primäre DA Weg in diese Effekte verwickelt ihren Ursprung im ventralen Tegmentum (VTA) und Projekte auf den Nucleus accumbens (NAC) Kern und Schale, die basolaterale und zentral-cortico-medialen Amygdala (AMY) und der prälimbischen und infralimbischen medial präfrontalen Kortex (mPFC) (siehe Bewertungen 6,7). Die VTA wurde in Saccharose Aufnahme 8,9 und DA Freisetzung beobachtet folgende Aufnahme von Zucker in der NAC 10-15, AMY 16,17 und mPFC 18-20 gebracht. Fettaufnahme stimuliert auch DA NAC 21 freigeben, und eine andere DA-reiche Projektionszone der dorsalen Striatum (Nucleus caudatus-Putamen) wurde auch im Zusammenhang mit DA-vermittelten 22,23 Fütterung. Kelley 24-27 vorgeschlagen , dass diese mehrere ProjektIonenzonen dieser DA-vermittelten System gebildet , um eine integrierte und interaktive verteilte Netzwerk Gehirn durch umfangreiche und intime Verbindungen 28-34.

Zusätzlich zu der Fähigkeit der DA D1 und D2 - Rezeptor - Antagonisten Aufnahme von Zucker zu reduzieren 35-37 und Fette 38-40 hat DA Signalisierung auch in der Vermittlung der Fähigkeit von Zuckern und Fetten herzustellen konditionierten Geschmackspräferenzen (CFP) in Verbindung gebracht 41- 46. Mikroinjektionen eines DA D1 - Rezeptor - Antagonist in das NAC, AMY oder mPFC 47-49 Erwerb von GFP durch intragastric Glukose ausgelöst beseitigen. Während Mikroinjektionen von entweder DA D1 oder D2 - Rezeptor - Antagonisten in die mPFC Erwerb von Fructose-GFP 50 eliminiert werden der Erwerb und die Expression von Fructose-CFP differentiell von DA - Antagonisten in der NAC und AMY 51,52 blockiert.

Die c-fos - Technik 53,54 wurde verwendet neuronale activatio zu untersuchenn durch schmackhaft Aufnahme und neuronale Aktivierung induziert. Der Begriff "c-fos-Aktivierung" wird im gesamten Manuskript verwendet werden und wird operativ durch eine erhöhte Transkription von c-Fos während der neuronalen Depolarisation definiert. Sucrose Aufnahme erhöht fos-like Immunreaktivität (FLI) in der zentralen AMY Kern, der VTA sowie die Schale, aber nicht Kern, der NAC 55-57. Während Saccharose Aufnahme in der Sham-Fütterung Ratten signifikant erhöht FLI im AMY und der NAC, aber nicht die VTA 58, intragastric Saccharose oder Glukose - Infusionen FLI deutlich in der NAC erhöht und Mittel- und basolateralen Kernen des AMY 59,60. Wiederholte Zugabe von Saccharose zu geplanten Chow Zugang erhöht FLI im mPFC sowie der NAC Schale und Kern 61. Eine Saccharosekonzentration Herunterschalten Paradigma ergab , dass die größten FLI Erhöhungen der basolateralen AMY und NAC aufgetreten ist , aber nicht die VTA 62. Nach Anlage, Aussterben von zuckerbedingten Natur reward Verhalten erhöht FLI in der basolateralen AMY und der NAC 63. Darüber hinaus führte die Paarung Zucker Verfügbarkeit zu einem Ton in Ton anschließend 64 FLI Ebenen in der basolateralen AMY erhöht. Hochfettaufnahme erhöht auch FLI in NAC und mPFC Websites 65-67.

Die meisten der zuvor zitierten Studien untersuchten Zucker und Fett Auswirkungen auf c-fos - Aktivierung in einzelne Websites , die 24-27 Informationen über Identifikation von verteilten Gehirnnetzwerken Belohnungsbezogene nicht bieten. Des Weiteren auch viele der Studien beschreiben nicht die relativen Beiträge von Teilbereichen des NAC (Kern und Schale), AMY (basolateralen und Zentral-cortico-medial) und mPFC (prälimbischen und infralimbischen), die möglicherweise durch die geprüft werden könnten Vorteil der ausgezeichneten räumlichen, 68 Einzelzellen - Auflösung in c-Fos - Mapping. Unser Labor 69 kürzlich verwendete c-fos - Aktivierung und gleichzeitig gemessenen Veränderungen in der VTA DA - Weg und seine ProSpritz- Zonen (NAC, AMY und mPFC) nach neuen Einnahme von Fetten und Zucker in Ratten. Die vorliegende Studie, die Verfahrens und methodischen Schritte beschreibt, ob eine akute Exposition bei sechs verschiedenen Lösungen (Maisöl, Glucose, Fructose, Saccharin, Wasser und eine Fettemulsion Steuerung), differentiell FLI aktivieren in Teilbereichen des NAC, AMY würde gleichzeitig zu analysieren mPFC sowie die dorsale Striatum. Diese gleichzeitige Detektion von Unterschieden Bestätigung signifikante Auswirkungen auf FLI in jeder Site und Bestimmung, ob Änderungen in einem bestimmten Standort korrelierte mit Veränderungen in verwandten Seiten erlaubt, wodurch Unterstützung für ein verteiltes Netzwerk Gehirn 24-27. Diese geprüften Verfahren, ob der VTA, die prälimbischen und infralimbischen mPFC, Kern und Schale des NAC und der basolateralen und zentral-cortico-medialen AMY) sowie der dorsalen Striatum würde Display koordiniert und gleichzeitige FLI Aktivierung nach oraler, unbedingten Aufnahme von Glucose (8%), Fructose (8%), Maisöl (3,5%) und Saccharin (0,2%) Lösungen.

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Protokoll

Diese experimentellen Protokolle wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee Zertifizierung bestätigt, dass alle Themen und Verfahren sind in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health Guide für Pflege und Verwendung von Labortieren.

1. Themen

  1. Kauf und / oder Rasse männlichen Sprague-Dawley-Ratten (260-300 g).
  2. Haus Ratten einzeln in Drahtgitterkäfigen. Pflegen Sie sie auf einem 0.12 Stunden Licht / Dunkel - Zyklus mit Rattenfutter und Wasser ad libitum zur Verfügung.
  3. Weisen Sie geeignete Probengrößen (zB n ≈ 6 - 8) zufällig in Gruppen.

2. Testvorrichtung und Intake Procedures

  1. Verwenden kalibrierten Zentrifugenröhrchen mit Gummistopfen und einem 45 ° -Winkel Metallzuführungsschlauch genaue Messung zu liefern (± 0,1 ml) der vorgestellten Lösungen. Sichern Sie sie in die Käfige durch eine gespannte Metallfeder Sichtbarkeit der Kalibrierungen zu ermöglichen.
  2. Beschränken Lebensmittelrationen (~15 / g / Tag) der Ratten, Gewicht zu 85% ihres ursprünglichen Körpergewichts zu reduzieren Motivation zu erhöhen, die Lösungen zu verbrauchen. Hinweis: Die Gewichtsreduktion sollte zwischen 3 nehmen - 5 Tage.
  3. Geben Sie Pre-Training-Lösungen (10 ml) von 0,2% Saccharin vier Tage lang über eine 1 Stunde Sitzung, um die Wahrscheinlichkeit zu maximieren, die Ratten die nachfolgenden Testlösungen mit kurzen (weniger als 1 min) Latenz Probe.
  4. Bestätigen Fluss durch die Zentrifugenröhre durch ein paar Tropfen zu verschütten.
  5. Wiegen Rohre vor und nach jeder Sitzung Aufnahme Messung zu erhalten.
  6. Führen eines Einlass Test am fünften Tag auf Untergruppen eine von sechs Lösungen Empfangen (10 ml, 1 h): a) Wasser, b) neuartige Geschmack (0,05% Kirscharoma) 0,2% Saccharin, c) 8% Fructose, d) 8 % Glucose, e) 3,5% Maisöl 0,3% Xanthangummi suspendiert und f) 0,3% Xanthangummi.
  7. Stellen Sie sicher, dass die Nährlösungen sind isokalorische; Somit ist die 3,5% Maisölkonzentration isokalorische auf die 8% Zuckerlösungen.
  8. Stellen Sie sicher, thbei Ratten Probenlösungen mit kurzen Latenzzeit (weniger als 1 min). Wenn diese Bedingung nicht erfüllt wird, muss das dann das Thema aus der Studie.

3. Gewebepräparation

  1. Anästhesieren jedes Tier durch eine intraperitoneale Injektion von Pentobarbital 90 min nach der ersten Exposition zu jeder Testlösung. Bestätigen Sie, dass die Tiere ordnungsgemäß durch den Nachweis narkotisiert werden, dass das Tier nicht mehr auf solche Reflexe als Rückzug zu Fuß Prise reagiert, blinkt folgende direkte Hornhaut- Druck oder den Kopf zu tief Ohrmuschel Stimulation schütteln.
  2. Perfuse jedes Tier transcardial wie zuvor 69 beschrieben.
    1. Anesthetize Ratten mit einer Überdosis von Natriumpentobarbital (65 mg / kg), entfernen Sie den Brustkorb und setzen die Brust für den freien Zugang zum Herzen 69.
    2. Legen Sie die Nadel in der Spitze des linken Herzklappe, und schneiden Sie die Hohlvene. Administrieren Phosphatpufferlösung (PBS, ~ 180 ml), gefolgt von einer phosphatgepufferten Fixiermittel containing 4% Paraformaldehyd (~ 180 ml).
    3. Stellen Sie sicher, dass das Tier richtig tatsächlich durchblutet wird durch die Prüfung, ob Flüssigkeit andere Hohlräume hinterlässt, wie die Nase, Mund und Genitalbereich. Hinweis: Die richtige Fixierung mit Paraformaldehyd wird durch große Muskelbewegungen begleitet werden. Wenn dies nicht erfolgt, neu zu justieren, die Nadel, bis diese Reaktion auftritt.
  3. Entfernen Sie das Gehirn aus dem Schädel schnell durch Fell schneiden und die Haut vom Schädel. Verwenden Sie rongeurs zu knacken und die Knochen aus dem Gehirn zu entfernen von hinten nach vorne zu bewegen. Arbeiten zunächst in den Bereich unterhalb und hinter dem Cerebellum, sicherzustellen, dass die chirurgische Zange zwischen dem Knochen und meningealen Pia mater ist. Sobald die Oberseite und die Seiten des Schädels entfernt, mit einem kleinen Spatel das Gehirn von der Basis zu heben, und schnippeln Hirnnerven mit einer kleinen Schere. Achten Sie darauf, nicht das Gehirn zu beschädigen beim Versuch, den Knochen zu entfernen.
  4. Befestigen Sie die Gehirne in einer 4% igen Paraformaldehydlösung über Nacht bei 4 ° C.Legen Sie die Gehirne in einer 30% Saccharose / 70% PBS-Lösung bei Raumtemperatur, bis sie am Boden des Behälters absetzen.
  5. Blockieren Sie das Gehirn
    1. Entfernen Sie den rostralen Teil des Gehirns, Querschneiden kaudal der Riechkolben.
    2. Entfernen Sie den Schwanz Teil des Gehirns, die quer auf der Ebene des Kleinhirns und Schneiden der Brücke.
  6. Montieren Sie das Gehirn koronalen mit dem Schwanzteil auf die Bühne eines Schlittenmikrotom fixiert und geschnitten Koronalschnitte (40 & mgr; m) durch die mPFC (2,86-2,20 mm rostral Bregma), NAC Kern und Schale und dorsalen Striatum (+ 1,76 bis 1,60 mm rostral zu Bregma), der AMY (-2,12 - -2,92 mm caudal bis bregma) und der VTA (-5,20 - -5,60 mm kaudal Bregma). Verwenden Sie ein Rattengehirn Atlas 70 zur Führung.
  7. Sammeln frei schwebenden Abschnitte in einzelne Vertiefungen einer Platte mit 24 Vertiefungen mit PBS für eventuelle immunhistochemische Analyse gefüllt 71. Verwenden Sie die Parafilm 24 wir zu versiegelnll Platte, um sicherzustellen, das PBS nicht verdampft in dem Behälter und trocknen Sie das Gehirn auf. Lagern Sie das Hirngewebe in 4 ° C.

4. c-fos Procedures (Angepasst von 71)

  1. Behandeln jeden Abschnitt mit 5 ml von 5% normalem Ziegenserum und 0,2% Triton X-100 in PBS für 1 Stunde.
  2. Inkubieren der behandelten Abschnitte mit primärem Antikörper (Kaninchen-Anti-c-fos, 1: 5000) bei 4 ° C für 36 h in Vertiefungen, die 1 ml PBS.
  3. Rinse Abschnitte 3x mit PBS (5 ml) für 10 min jeweils.
  4. Inkubieren mit sekundärem Antikörper (biotinyliertes Ziegen-anti-Kaninchen, 1: 200) bei RT für 2 h in Vertiefungen, die 1 ml PBS.
  5. Spülen jeden Abschnitt 3x in PBS (5 ml) für 10 min jeweils.
  6. Inkubieren der gespülten Abschnitte für 2 h in einem handelsüblichen Avidin-Meerrettich-Peroxidase-Mischung, die in einem Kit von Avadin DH (100 ul) und biotinylierter Meerrettichperoxidase H (100 ul) in 5 ml PBS zusammengesetzt kommt.
  7. Re-rinse die Abschnitte 3x in PBS (5 ml) für 10 min jeweils.
  8. Reagieren , um die Abschnitte mit 0,05% Diaminobenzidin (DAB) in Gegenwart von 0,0015% H 2 O 2 für 5 - 10 min, je nach der Reaktionsfähigkeit des Gewebes in Vertiefungen , die 5 ml der DAB - Lösung.
  9. Doppel-label die VTA Abschnitte. Inkubieren sie mit einem Tyrosin-Hydroxylase (TH) Antikörper (Kaninchen-anti-Ratten-TH, 1: 2000) in PBS (5 ml) über Nacht bei 4 ° C.
  10. Spülen Abschnitte 3x in PBS (5 ml) für 10 min jeweils.
  11. Inkubieren mit sekundärem Antikörper (biotinyliertes Ziegen-anti-Kaninchen, 1: 200) in PBS (5 ml) bei Raumtemperatur für 2 Std.
  12. Spülen Abschnitte 3x in PBS (5 ml) für 10 min jeweils.
  13. Visualisieren der Antikörper durch einen sekundären Antikörper-Peroxidase-Komplex verwendet wird. Reagieren mit einer Kombination von 0,05% DAB und einer 0,3% igen Nickelsulfatlösung, für 5 - 10 min, abhängig von der Reaktion des Gewebes in Vertiefungen, die 5 ml des DAB / NiCl Lösung.
  14. Stellen Sie sicher, dass die DAB-Lösung in Farbe milchig hellgrün aus ists Reaktion mit dem 0,3% Nickelsulfat. Wenn die Lösung zu grün ist, dann wird die Reaktion zu dunkel sein.
  15. Montieren Sie alle Teile auf mit Gelatine beschichteten Folien. Lassen Sie sie über Nacht trocknen und dann die Abdeckung feste mit einigen Tropfen einer Toluol-basierte Lösung (TBS).
  16. Code gleitet, so daß die experimentellen Bedingungen für die Beobachter unbekannt ist.

5. Bestimmung von c-fos Immunreaktive Counts

  1. Vergeben Paare unparteiische Beobachter Fos-positiven Neuronen in diesen Regionen von Interesse (ROI) zu zählen: prälimbischen mPFC, infralimbischen mPFC, NAC Kern, NAC Schale, basolateralen AMY Kerne, Zentral-cortico-medial AMY, dorsalen Striatum und VTA. Delineate ob c-Fos - Immunreaktivität in TH + vorlag und TH- Zellen in der VTA. 1 , die eine Bildschirm-Capture bietet Bild des NAC vom Mikroskop.

figure-protocol-1
Abbildung 1. Repräsentative Abschnitt des Nucleus accumbens (NAC) durch das Gitter Beschriebenen Regions of Interest angezeigt , mit dem c-fos Counts werden. Die NAC - Shell ist medial und ventral an den NAC Kern gefunden. Der NAC Kern umgibt den vorderen Kommissur (Anterior Comm.). Die ventrale Ausmaß des lateralen Ventrikel (Lateral Vent.) Sichtbar. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

  1. Analysieren mindestens drei repräsentativen Scheiben pro Seite, die für alle Tiere in allen von den Testbedingungen.
  2. Verwenden Sie Software und ein optisches Mikroskop , um die gesamte Region für jeden ROI zu analysieren , indem eine Gliederung (Abbildung 1) zu verfolgen.
    1. Für einen bestimmten Standort, öffnen Sie die Anwendung und klicken Sie auf den Erwerb im Dropdown-Menü und klicken Sie auf "Live-Bild". Bringen Sie den ROI in den Fokus und klicken Sie auf den Bildschirm, um einen Bezugspunkt zu schaffen. Dann trace die gewählte Hirnregion das Raster als Leitfaden. Sobald die Spur abgeschlossen ist, zählen Zellen (Schritte 5.3.1.1 - 5.3.1.3).
      1. Doppelklicken Sie auf das Software-Symbol. Gehen Sie auf die Menüleiste klicken Sie auf "Erwerb" und dann "Live-Bild". Bringen Sie den ROI in den Fokus und klicken Sie auf den Bildschirm, um einen Bezugspunkt zu schaffen.
      2. Gehen Sie auf die Raster-Symbolleiste und klicken Sie auf "Display Grid" und "Use Raster-Etiketten". Skizzieren Sie die ROI mit einer vorgegebenen Spur.
      3. Zählen Sie alle Zellen in jedem ROI-Bereich, wählen Sie ein "+" in der linken Seitenleiste Zahl von c-fos-Zellen zu halten. Klicken Sie auf jede Zelle einzeln zählt zu registrieren. Betrachten wir eine Zelle positiv für c-fos , wenn eine definierte dunkelroten Kreis beobachtet wird (Abbildung 1).
    2. Wiederholen Sie diesen Vorgang für jeden Standort.
    3. Nehmen Sie zählt in einem Labor-Notebook und auf dem Computer für eine spätere Analyse. Gehen Sie auf die Menüleiste klicken Sie auf "Datei", "Save Data File" die Verfolgung und zählt zu speichern.
  3. Stellen Sie sicher, dass Interraterreliabilität (unter Verwendung von Korrelation von Zählungen) der beiden uninformiert Rater für jeden Abschnitt in jedem ROI ist immer größer als 0,8 ist.

6. Statistik

  1. Bewerten Basis Saccharin Einlässe in den ersten vier Tagen mit einem wiederholten Maßnahmen 1-Wege - Varianzanalyse (ANOVA) Vergleich der Saccharin Aufnahme von den Tagen 1, 2, 3 und 4 69.
  2. Vergleichen Saccharin Aufnahme (Tag 4) mit Testaufnahmen (Tag 5) der sechs Gruppen mit einem randomisierten Block 2-Wege - ANOVA 69.
  3. Verwenden Sie Tukey Vergleiche (p <0,05) 69 einzelne signifikante Effekte zu bestimmen.
  4. Bestimmen Sie Interraterreliabilität, und dann mit einem gemeinsamen Zählungen des Betrachters.
  5. Durchschnittliche c-fos Zählungen für die drei repräsentativen Scheiben für jeden Standort 69.
    1. Durchführen einer 1-Weg-ANOVA von c-fos-Aktivierung durch Aufnahme der sechs Lösungen induziert (3,5% Maisöl, 8% Glucose, 8% Fructose, 0,2% aromatisierte Saccharin, xaNthan Gummi - Steuerung und Wasser) für die perilimbische mPFC 69.
    2. Wiederholen Sie parallel Analysen der sechs Gruppen für infralimbischen mPFC, NAC Kern, NAC-Shell, basolateralen AMY, Zentral-cortico-medial AMY, VTA und dorsalen Striatum. Verwenden Sie Tukey Vergleiche (p <0,05) 69 einzelne signifikante Effekte zu offenbaren.
  6. Vergleichen Maisöl Aufnahme mit den beiden Wasseraufnahme und Aufnahme seines Suspensionsmittel, Xanthan. Vergleichen Fructose und Glucose Einlässe mit sowohl Wasseraufnahme und Aufnahme des nicht-nutritive Süßungsmittel, Saccharin, enthalten.
  7. Festzustellen, ob signifikante Zusammenhänge zwischen Lösung Einlässe und c-fos-Aktivierung in jeder der Seiten wurden mit Bonferroni r Korrelationen beobachtet (p <0,05).
    1. Systematisch vergleichen c-fos zählt in der perilimbische und infralimbischen präfrontalen Kortex für jedes Tier in der 3,5% Maisöl-Gruppe.
    2. Wiederholen Sie systematisch parallel Analysen von jedem Paar der sechs Standorten (VTA, dorsalen Striatum, infralimbic mPFC, perilimbische mPFC, NAC Kern, NAC-Shell, basolateralen AMY, Zentral-cortico-medialen AMY) für die 3,5% Maisöl.
    3. Wiederholen systematisch parallel Analysen dieser sechs Stellen für die anderen fünf experimentellen Aufnahmebedingungen (8% Glucose, 8% Fructose, 0,2% aromatisierte Saccharin, Xanthangummi Kontrolle und Wasser).
  8. Nutzen der Tatsache, dass die gleichen Tiere innerhalb einer Lösungsbedingung über alle Standorte durch Bestimmung signifikante Zusammenhänge zwischen den c-fos-Aktivierung in Lösungen und in jeder Lösung wurden bewertet unter Verwendung von Bonferroni r Korrelationen (p <0,05).

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Ergebnisse

Alle Vertreter im Folgenden beschriebenen Ergebnisse wurden bisher 69 veröffentlicht worden sind , und werden hier wieder präsentiert "proof of concept" zu unterstützen , die Wirksamkeit der Technik in angibt.

Lösung Intake
Signifikante Unterschiede in Basis Saccharin Einlässe wurden für alle Tiere (F (3,108) = 57,27, p <0.001) in den ersten vier Tagen beobachtet mit Zufuhr (Tag ...

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Diskussion

Das Ziel der Studie war es zu bestimmen, ob die Quelle (VTA) und Vorderhirns Projektionsziele (NAC, AMY, mPFC) von DA Belohnungsbezogenen Neuronen gleichzeitig nach neuen Einnahme von Fett und Zucker in Ratten aktiviert wurden, die zelluläre c-fos-Technik . Die vorliegende Studie ist eine detaillierte Beschreibung der Protokolle einer Studie bisher 69 veröffentlicht. Es wurde vermutet , dass die VTA, seine großen Projektionszonen zum prälimbischen und infralimbischen mPFC, Kern und Schale des NAC und der baso...

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine konkurrierenden finanziellen Interessen.

Danksagungen

Dank Diana Icaza-Culaki, Cristal Sampson und Theologia Karagiorgis für ihre harte Arbeit an diesem Projekt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Equipment
Sprague-Dawley RattenCharles River LaboratoriesCD-1
DrahtgeflechtkäfigeLaborprodukte, Seaford, DE30-Käfiggestell
Rat ChowPMI Nutrition International5001
Taut Metal SpringLab Products, Seaford, DEn/a
RattenwaageFisher Scientific Companyn/a
Nalgene ZentrifugenröhrchenLaborprodukte, Seaford, DE10-0501
GummistopfenLaborprodukte, Seaford, DEn/a
MetallsippersLaborprodukte, Seaford, DEn/a
SaccharinSigma Chemical Co82385-42-0
Kool-Aid, KirscheKool-AidKommerzielles
Kool-Aid, TraubeKool-AidKommerzielles
FruktoseSigma Chemical CoF0127
GlukoseSigma Chemical CoG8270
MaisölMazzolaKommerzielles
XanthangummiSigma Chemical Co11138-66-2
GleitmikrotomMicrom Internationaln/a
Neurolucida CameraMBF BioscienceSoftwareanwendung
Gelatinebeschichtete ObjektträgerFisher Scientific Company12-550-343
DeckglasFisher Scientific Company12-545-M
Goldene NylonbürstenLoew-Cornell2037
Naturhaar Zobel Loew-Cornell 2022
24-Well-PlattenFisher Scientific3527
6-Well-PlattenFisher Scientific3506
1 L Pyrex-FlaschenFisher Scientific1395-1L
Gewebeeinsatz (Gewebesieb)Fisher Scientific7200214
Eagle Pipetten World Precision InstrumentsE10 für 1-10μ l
Eagle Pipetten World Precision InstrumentsE100 für 20-100μ l
Eagle Pipetten World Precision InstrumentsE200 für 50-200μ l
Eagle Pipetten World Precision InstrumentsE1000 für 100-1000μ l
Eagle Pipetten World Precision InstrumentsE5000 für 1000-5000μ l 
Universal-Spitzen .1-10 μ lWorld Precision Instruments500192
Universalspitzen 5-200 μ lWorld Precision Instruments500194
Universalspitzen 500-5.000 μ lWorld Precision Instruments500198
Blade Vibroslice 100World Precision InstrumentsBLADE
DPX EindeckmediumElektronenmikroskopie 13510
15 ml ZentrifugenröhrchenBiologix Research Co.10-0501
Objektträger-BoxenBiologix Research Co.41-6100
Orbitalschüttler Madell Corporation   ZD-9556
Wiegeboote Fisher Scientific02-202-100
5 ml EinwegpipettenFisher Scientific13-711-5AM
Stereo Investigator Software MicroBright FieldSoftware application
Name<>CompanyKatalognummer<strong>Kommentare
Reagenzien
Paraformaldehyd GranulatFisher Scientific19210
NaClFisherScientific S271-1
Natriumphophat monobasischFisherScientific S468-500
Natriumphosphat DiphasicFisher ScientificBP332-500
Wasserstoff Peroxid Fisher ScientificH324-500
SafeClear II Fisher Scientific23-044-192
Methanol Fisher ScientificA412-1
Normales ZiegenserumVektor S-1000
Biotinyliertes Anti-Kaninchen-IgG (H+L)VektorBA-1000
ABC Kit PeroxidaseStandard VektorPK-4000
Anti-cFos (Ab-5) KaninchenEMD chem/Cal BiochemPC38
Triton X 100SigmaAldrichX-100
3,3' Diaminobenzidintetrahydrochlorid SigmaAldrichD5905
NatriumhydroxidSigmaAldrich5881
Primärer TH-AntikörperEMD MilliporeAB152
EuthosolVirbac AH
KG

Referenzen

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