Entwurf und Entwicklung von Aptamer-Gold-Nanopartikeln basierte kolorimetrische Assays für In-the-Feld-Anwendungen

Zusammenfassung

Der Entwurf und die Entwicklung eines Aptamers-Gold-Nanoteilchen kolorimetrischen Assay für den Nachweis kleiner Moleküle für in-the-Feldanwendungen untersucht. Zusätzlich wird ein Smart-Gerät farbmetrische Anwendung (App) wurde validiert und langfristige Lagerung des Tests wurde für den Einsatz auf dem Gebiet etabliert.

Zusammenfassung

Der Entwurf und die Entwicklung eines Aptamers-gold-Nanopartikel (AuNP) kolorimetrischer Assay zum Nachweis von kleinen Molekülen für Im-Feld-Anwendungen untersucht. Ziel selektive AuNP basierte Farb Assays wurden in kontrollierten Proof-of-Concept-Labor-Einstellungen entwickelt. Allerdings haben diese Systeme, die nicht auf einen Punkt des Scheiterns ausgeübt worden, um ihre praktische Anwendung über Labor-Einstellungen zu bestimmen. Diese Arbeit beschreibt einen generischen Ansatz zu entwerfen, zu entwickeln und zu beheben ein Aptamer-AuNP kolorimetrischen Test für kleine Molekül Analyten und mit dem Test für in-the-Feldeinstellungen. Der Test ist vorteilhaft, da adsorbiert Aptamere die Nanopartikeloberflächen zu passivieren und ein Mittel, zu reduzieren und falsch-positive Reaktionen auf Nicht-Ziel Analyten zu beseitigen. Transitioning dieses System praktische Anwendungen erforderlich definieren nicht nur die Haltbarkeit des Aptamers-AuNP Assay, aber Methoden und Verfahren zur Festlegung für die Langzeitlagerung capabil verlaufkeiten. Auch eine der anerkannten Bedenken kolorimetrische Anzeige ist die Belastung für Analysten platziert genau oft subtile Veränderungen in Farbe zu identifizieren. Zur Verringerung wurde die Verantwortung auf Analysten auf dem Feld, eine Farbanalyse-Protokoll entwickelt, um die Farbidentifikationsaufgaben, ohne die Notwendigkeit zur Durchführung dieser Aufgabe auf Laborqualität Ausrüstung durchzuführen. Das Verfahren zum Erzeugen und Testen der Datenanalyse-Protokoll beschrieben. Jedoch zu verstehen und das Design von adsorbiertem Aptamer-Assays beeinflussen, assoziiert die Interaktionen mit dem Aptamer, Ziel- und AuNPs bedürfen weiterer Untersuchungen. Die gewonnenen Erkenntnisse können dazu führen, Aptamere für eine verbesserte Funktionalität zu zuzuschneiden.

Einleitung

Kolorimetrie ist eines der ältesten in der analytischen Chemie verwendeten Techniken. Für diese Technik wird eine qualitative oder quantitative Bestimmung des Analyten auf der Herstellung einer farbigen Verbindung ¹ , hergestellt basiert. Typischerweise Farb Assays verwenden Reagentien, die eine Farbverschiebung in der Gegenwart der Analyt-Spezies auftreten, die im sichtbaren Lichtspektrum in einer beobachtbaren oder nachweisbare Farbänderung ergibt. Kolorimetrie wurde in der Detektion von Zielen von Atomen, Ionen und kleine Moleküle , um komplexe biologische Moleküle wie Desoxyribonukleinsäuren (DNA), Peptide und Proteine ​​im Bereich von ^2-4 verwendet. In den letzten zwei Jahrzehnten haben sich Nanomaterialien auf dem Gebiet der Nachweisassays revolutioniert, insbesondere mit Farbbasierten Assays ^5-6. Kombination hat zur Wiederaufleben führte die einzigartige chemische und physikalische Eigenschaften von Nanomaterialien mit einem Ziel-selektiven Erkennungselement, wie beispielsweise Antikörper, Aptamere Oligonukleotid oder Peptid Aptamere in das Design und die Entwicklung von kolorimetrischen Nachweisassays ^7.

Metall-Nanopartikel haben eine nachgewiesene größenabhängige Farbänderung Eigenschaft, die bei der Gestaltung von zahlreichen farbmetrischen Assays genutzt wurde. Gold - Nanopartikel (AuNPs) sind von besonderem Interesse aufgrund einer markanten roten zu blauen Farbverschiebung, wenn die verteilte Lösung von Partikeln induziert wird ⁸ zu aggregieren, in der Regel durch die genaue Zugabe von Salz. Die Fähigkeit , den Übergang von der dispergierten (rot) zu steuern , um die aggregierten (blau) Zustände hat ^2-4,9 für ionische, kleine molekulare, Peptid, Protein und zelluläre Ziele zur Schaffung von kolorimetrischen Sensoren geführt. Viele dieser Sensoren verwenden Aptamere als Zielerkennungsmotiv.

Aptamere sind DNA oder Ribonukleinsäure (RNA) Moleküle , die aus einem zufälligen Pool von 10 ausgewählten ¹² -10 ¹⁵ verschiedene Sequenzen ^10-11. Der Auswahlprozess identifiziert Ziel reKognition Elemente mit Bindungsaffinitäten im niedrigen nanomolaren Regime und die systematische Evolution von Liganden durch exponentielle Anreicherung (SELEX) ist die am häufigsten bekannte Verfahren ^12-13. Vorteile von Oligonukleotid basierend Aptamere für Sensoranwendungen schließen die Leichtigkeit der Synthese, steuerbare chemische Modifikation und chemischer Stabilität ^14-15.

Ein Ansatz, ein kolorimetrischer Test zur Schaffung kombiniert Nanomaterialien mit Erkennungselementen, besteht aus der Kombination dieser zwei Arten durch die physikalische Adsorption von DNA-Aptamer-Moleküle zu AuNP Oberflächen. Durch ziel Aptamerbindung erfährt das Aptamer eine strukturelle Veränderung ^16-18, die die Interaktion des Aptamer mit der AuNP Oberfläche verändert, was zu einem induzierbaren rot nach blau mit dem Zusatz von Salz ¹⁹ Farbwiedergabe führt. Diese erstaunliche Eigenschaft AuNPs stellt eine beobachtbare kolorimetrischen Antwortmechanismus für Aptamer-basierte Geräte, die verwendet werden können, um deunterzeichnen kolorimetrische Assays für verschiedene Analyten.

Farbtests unter Verwendung von nicht-kovalente entworfen, physikalisch adsorbiert DNA-Aptameren auf AuNP Oberflächen haben das Stigma einer schwachen Sensorplattform ist aufgrund von Problemen mit Robustheit, eine Neigung zum Versagen außerhalb von kontrollierten Laboreinstellungen und den Mangel an Informationen für den Einsatz in der Praxis Einstellungen. Jedoch war die Aptamer-AuNP basierten kolorimetrischen Assay von Interesse wegen der Einfachheit des Betriebs und der beobachtbaren Farbreaktion. Das Ziel dieser Arbeit ist es, ein Protokoll für den Entwurf, die Entwicklung, den Betrieb, Reduzierung der Oberflächen falsch positive Reaktion im Zusammenhang zu liefern, und die langfristige Speicherung von DNA-AuNP basierten farbmetrischen Assays Kokain als Vertreter Analyten verwendet wird. Darüber hinaus haben wir vorgeschlagen , diese adsorbiert Aptamer - Assay - Ansatz (Abbildung 1) als vorteilhaft ist aufgrund der Einfachheit und Benutzerfreundlichkeit , die in weniger Schritten als der herkömmliche Ansatz für diese Aptamer-AuNP ass geführtege. Für diesen Test wurde das Aptamer zuerst den AuNPs hinzugefügt, die für einen längeren Zeitraum an die Oberfläche adsorbieren gelassen wurden. Ein zusätzlicher Vorteil dieses Ansatzes war die Verringerung des Ansprechens auf die Nicht-Ziel Analytmoleküle bezogen auf AuNP Oberflächen-Wechselwirkungen. Jedoch war die Verringerung falsch positiver Reaktion auf Kosten der Empfindlichkeit des Assays. Daher ist eine Balance zwischen den Oberflächenschutz und Analyt Zugänglichkeit ist notwendig, geeignete Testfunktion aufrecht zu erhalten. Außerdem bedeutet ein großer Fehler zu analysieren Farbtests durch andere als mit Instrumentierung ist, dass die Ergebnisse sind oft subjektiv und auslegungs von Analyst-to-Analyst, vor allem wenn man versucht, feine Unterschiede in der Farbe zu unterscheiden. Umgekehrt gibt es eine Reihe von Problemen mit der Herstellung Labor basierte Instrumente verwendbar außerhalb des Labors, wie die Verfügbarkeit von Leistung, Funktionalität mit der Portabilität sind, usw. In dieser Arbeit wurde ein Farbanalyse - Protokoll wurde für mor entwickelte Portabilität und mit Farbe basierten Assay Interpretation ^20-21 verbunden sind einige der Vermutungen häufig zu beseitigen. Im Vergleich zu früheren Ansätzen, strebte diese Bemühung, diese Tests, um ihre Grenzen zu gehen für Anwendungen, die über Labor-Einstellungen.

Protokoll

1. Synthese über Citrate Reduktion von Goldnanopartikeln (AuNP) und Charakterisierung

1. Reinigen Sie einen Erlenmeyerkolben (500 ml) und großen Rührstab mit 5 ml konzentrierter Salpetersäure und 15 ml konzentrierter Salzsäure in der chemischen Schutzhaube.
   1. Befeuchten Sie die gesamte Oberfläche des Kolbens mit der Säure zu waschen, spülen Sie den Kolben mit Nuklease freiem Wasser und lassen Sie den Kolben zu trocknen.
2. 100 ml 1 mM Gold (III) chlorid; Verwenden Sie ein Blatt aus Aluminiumfolie die Oberseite der Säure gereinigt Erlenmeyerkolben und Hitze unter ständigem Rühren auf einer heißen Platte zu bedecken bis zum Sieden.
3. 10 ml 38,8 mM Natriumcitrat. Die Farbe wird von klar / grau zu ändern, zu dunkelblau / schwarz, und schließlich dunkelrot über mehrere Minuten. Fahren Sie mit der Hitze Rühren für 10 min ab.
4. Lassen Sie die AuNP Suspension auf Raumtemperatur abkühlen und füge 110 & mgr; l Diethylpyrocarbonat (DEPC) unter kontinuierlichem Rühren.
5. Decken Sie die ganze Flasche mitAluminiumfolie und lassen Sie die DEPC Behandlung über Nacht inkubiert. Speichern Sie alle AuNPs im Dunkeln, in Bernstein Lagerbehälter oder mit Aluminiumfolie abgedeckt.
6. Autoclave die AuNP Suspension, auf Raumtemperatur abkühlen und filtriert durch ein 0,22 um Poren Celluloseacetat-Membran. Bewahren Sie die gefilterten, autoklaviert AuNP Stammlösung im Dunkeln bei 4 ° C.
   HINWEIS: Die Behandlung mit DEPC, Sterilisation über Autoklaven und Lagerung bei 4 ° C wird die Haltbarkeit des Aptamer-AuNP Assays zu verbessern. Lagerung auf diese Weise wird für den Assay ermöglichen mehr als 2 Monate funktionsfähig zu bleiben.
7. Berechnen Sie die AuNP Konzentration von Ultra Violet-Vis - Absorption bei 520 nm zu erhalten, und verwenden Sie den Extinktionskoeffizienten (Ɛ) 2,4 x 10 ⁸ L mol ^-1 cm ^-1 mit Beerschen Gesetz durch Konzentrationsberechnungs (c). 10 nM zu sein mit einer Größe von 15 nm, bestimmt durch dynamische Lichtstreuung, die Konzentration wurde bestimmt.
   HINWEIS: Die Konzentrationen werden fr variierenom von Charge zu Charge. Verdünnen Sie die AuNP Aktien mit nukleasefreiem Wasser als notwendig, um die gewünschten 10 nM AuNP Suspension zu halten.

2. DNA-Aptamer, Puffer, Lösung, und Testvorbereitung

1. Kauf oder synthetisieren die folgende Kokain Bindung Aptamersequenzen unter Verwendung von Standard - Phosphoramidit - Chemie ^{22:
   19} MN4: 5'-GGC GAC AAG GAA AAT CCT TCA ACG AAG TGG GTC GCC-3 '
   ¹⁹ MN6: 5'-GAC AAG GAA AAT CCT TCA ATG AAG TGG GTC-3 '
2. Reinige die Aptamere mit Standard - Entsalzung ^23. Rekonstitution Oligonukleotide in Nuklease-freies Wasser bei entweder 100 & mgr; M oder 1 mM Stammlösungen. Aliquotieren und bei -20 ° C für mehrere Monate.
3. Kauf oder bereiten Bestände sterile 1 M 4- (2-Hydroxyethyl) -1-piperazinethansulfonsäure (HEPES) pH 7,4, 100 mM Magnesiumchlorid (MgCl _2), 1 M Natriumchlorid (NaCl).
4. Bereiten Sie 50 ml Puffer in nukleasefreiem Wasser witen Konzentrationen von 20 mM HEPES, 2 mM MgCl _2, pH 7,4 und bei Raumtemperatur lagern für Monate.
5. Inkubieren der DNA mit dem Lager AuNP-Lösung (10 nM) für 3-4 h bei Raumtemperatur und Schutz vor Licht. Variiert das Volumen der AuNPs als genug Probe bereitzustellen für die Tests gewünschten (2,5-7,5 ml) durchgeführt werden.
   1. Hier verwenden Ladedichten von 90, 120, 150 und 180 DNA-Moleküle / AuNP in dieser Arbeit. entsprechend variieren die Lautstärke und die Konzentrationen der DNA. Tune die DNA-Abdeckung unbeabsichtigte AuNP Oberfläche im Zusammenhang mit Farbantworten von Nicht-Ziel-Analyten zu reduzieren.
      HINWEIS: Um die DNA-Abdeckung erhöhen, wird die Empfindlichkeit des Assays zu reduzieren. Die Ladedichten sind aus dem Wissen um die Konzentration des AuNP Lager berechnet, und die Gesamtzahl der AuNPs in dem Volumen für die Verwendung in Experimenten gewünschte Berechnung. Wenn die tatsächlichen Belegungsdichten gewünscht sind, existieren Protokolle diese Werte ⁷ zu erhalten. Die DNA Abdeckung wurde unter Verwendung eines 50 kDa m bestimmtMOLEKULARE Gewichts-Cutoff-Spin-Säule zu trennen die AuNP gebundene DNA aus der freien DNA. Die AuNPs sind zu groß, um durch die Spin-Säule zu passieren, während die freie DNA leicht passieren wird. gesammelt unter Verwendung von Absorptionsmessungen oder eine einzelsträngige DNA-Fluoreszenzfarbstoff ist der nächste Schritt die freie DNA zu quantifizieren.
6. Fügen Sie ein gleiches Volumen von 20 mM HEPES, 2 mM MgCl _2, pH 7,4 Puffer und legen Sie die Probe bei 4 ° C über Nacht im Dunkeln. Das Aptamer-AuNP Assay wurde in einer 10 mM HEPES, 1 mM MgCl _2, pH 7,4 (Assaypuffer).

3. Salz Titration und Assay-Setup

1. Bestimmen Sie die anfängliche Salzkonzentration benötigt, um die Assay-Farbreaktion durch Salz Titration mit dem Assay-Rohling zu induzieren. In 20 ul Methanol (leer) bis 180 & mgr; l-Aliquots von Aptamer-AuNP Assay in einer 96-Well-Platte. Daraufhin wird die Proben mit einem Volumen von Lager NaCl - Lösung zu erhöhen (1 M oder 2 M) und bestimmen den Äquivalenzpunkt (Abbildung 2 HINWEIS: Der Test kann, indem das Verhältnis von Methanol leer (oder gelöste Analyt) zu kleineren Volumina skaliert werden, um Aptamer-AuNP Test gleich.
   1. Hier bestimmen die NaCl Volumen benötigt die geringste Farbänderung durch visuelle Beobachtung zu verursachen. Die Ausgangskonzentration für den Assay betrug 75 mM und 130 mM für MN4 und MN6, die jeweils an einem 60-DNA-Molekül / AuNP Belegungsdichte.
      HINWEIS: Für eine quantitative Bestimmung für die anfängliche Salzkonzentration, der Mittelpunkt der Titrationskurve dient als guter Ausgangspunkt. Auch verwendeten Konzentrationen wird auf dem Aptamer variieren, DNA Belegungsdichten, von Tag zu Tag Leistung und von Charge zu Charge.
2. Die Optimierung der Assay-Response, fügen Sie 20 ul von Analytmolekülen in Methanol zu 180 & mgr; l-Aliquots von Aptamer-AuNP Assay in einem gut 96 Platte bei Raumtemperatur verdünnt. Sofort im der NaCl-Konzentration im vorherigen Schritt bestimmt der Testfarbreaktion zu initiieren.
   NEINTE: Nutzen Sie eine Mehrkanalpipette gleichzeitig mehrere Experimente durchzuführen.
3. Besorgen Sie sich die größten Farbwechsel möglich durch eine Erhöhung oder der NaCl-Konzentration abnimmt, und Vergleichen der Zielantwort auf die leere Antwort. Verwenden Sie die NaCl-Konzentration, die die größte Ansprechdifferenz zur Verfügung stellt.
4. Beobachten oder die Assay-Response 150 sec folgende NaCl Zugabe zu messen. Analysieren Sie die Absorption bei 650 nm und 530 nm unter Verwendung eines Spektrometers oder einer Digitalkamera Foto des Assays Antwort erhalten (Abschnitt 4 für die Fotoanalyseprotokoll sehen).
   HINWEIS: Ein Mikrotiterplatten-Lesegerät wurde bei der Beschaffung der Messungen für diese Arbeit eingesetzt.
5. Plotten die Ergebnisse als Verhältnis von Absorption bei 650 nm und 530 nm (E ₆₅₀ / E ₅₃₀₎ als Funktion der Analytkonzentration erhalten. Normalisieren der Assay Reaktion auf das Austastsignal wie wurde in dieser Arbeit geleistet.

4. Foto- und Digitalbild Farbanalyse Protokollanalyse

1. preparE der Testproben, wie beschrieben (Abschnitte 3.2-3.3). Legen Sie die 96-Well-Platte auf einem Durchleuchtungs.
   ANMERKUNG: Eine Standard-Labordurchleuchtungs typischerweise zu hell ist verwendbar digitale Bilder für diese Analyse zu erhalten. Diese Trans verursachen regelmäßig "dunkle Linien" Abstand in dem digitalen Bild zu erscheinen aufgrund der Intensität der Lichtquelle. Einen Durchleuchtungs aus einer Leuchtdiode (LED) basierte Lichtkasten und ein Stück aus opakem Kunststoff funktioniert gut.
2. Erhalten Sie Fotos von der 96-Well - Platte bei 150 sec nach NaCl hinaus importieren Sie die Bilder in der Bildanalyse - Software, und berechnen die durchschnittliche Rot, Grün und Blau (RGB) Werte, eine inkrementelle Lungstechnik verwendet, wie in Gleichung 1 ^24:
   (1)
3. Konvertieren Sie die RGB - Werte von Standard - RGB (sRGB) Farbraum in den Farbtafel (CIExyY) Farbraum unter Verwendung der folgenden Gleichungen ^24:
   (2)
   (3)
   (4)
4. Wandeln die exponentielle RGB - Werte in lineare RGB - Werte unter Verwendung von Gleichung 2. Die Matrix in Gleichung 3 angegeben ist , verwendet , um die X, Y und Z - Werte des CIE - Farbraum ²⁴ zu berechnen.
5. Berechnen der x- und y - Farbwerte unter Verwendung der Gleichung 4 , die die Durchschnittsfarbe der Pixel in dem Bereich für die Analyse ausgewählt ^24.
6. Führen Sie die Analyse in jeder gut und zeichnen Sie die Farbwerte einer Eichkurve (Abbildung 4) zu erzeugen. Beziehen Sie die Standardfehler durch die Farbe der verschiedenen Bereiche der gleichen gut analysieren.

5. Einfrieren Aptamer-AuNP Assay für die Langzeitlagerung

1. Bereiten Sie die Aptamer-AuNP Testkomponenten wie in den Abschnitten 2.4 und 2.5. Machen separate Lösungen, die 1 g / ml Trehalose und 1 g / ml Saccharose in Nuklease-freies Wasser, um die Cryogen-Lösung zu machen.
   HINWEIS: Hohe Konzentrationen von Trehalose und Saccharose wurden verwendet, um den Verdünnungsfaktor zu reduzieren, wenn der Test zum Einfrieren vorbereiten. Erhitzen Sie die Zuckerlösungen auf einer heißen Platte in einen Becher mit Wasser gründlich zu den Zucker vor Gebrauch auflösen.
2. Bilden eine Lösung, die in einem Endvolumen von 200 & mgr; l in 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen 19,2 mg / ml Trehalose und 4,8 mg / ml Saccharose mit 60 MN4-DNA / AuNP Assay enthält. Endgültige Kryogen Lösungskonzentrationen werden mit DNA-Abdeckung variieren.
   HINWEIS: Die Proben werden eingefroren nicht mehr als 300 & mgr; l nicht überschreiten sollte. Größere Volumina können nicht richtig einfrieren.
3. Flash die Proben einfrieren einen -146 ° C Gefrierschrank oder in flüssigem Stickstoff. Lagern Sie die Proben bis zur Verwendung eingefroren. Lagerung in einem -80 ° C oder -20 ° C einmal blinken Einfrieren abgeschlossen ist.
4. Für diese Arbeit, lassen Sie die Proben in der -146 ° C Gefrierschrank überNacht und übertragen dann zu einem -20 ° C Gefrierschrank für die Langzeitlagerung.
   HINWEIS: Flash Einfrieren kann bewirken, dass das Aptamer-AuNPs zu aggregieren. Testen der Integrität des Gefrierprozesses durch das Absorptionsprofil überwachen und an einen nicht gefrorenen Probe vergleicht. Wenn Aggregation beobachtet wird, erhöhen die Menge der kryogenen Lösung für dieses Problem zu kompensieren.
5. Auftauen der Proben bei Raumtemperatur und verwenden nur genügend Proben für Experimente notwendig. Erhalten Absorptionsspektren von aufgetauten Proben und zu vergleichen, um die Basislinie Spektren einer nicht gefrorenen Kryogen Lösung behandelten Probe. Messen der Extinktion von 400 nm bis 700 nm.
6. Führen Sie die Salz-Titration (Abschnitt 3.1), testen Sie den Test (Abschnitt 3.2), und zeichnen die Ergebnisse (Abschnitte 3.3 und 3.4), wie zuvor beschrieben.

Ergebnisse

Das primäre Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung und die Stabilität und Robustheit von Aptamer für den Einsatz auf dem Gebiet anhand AuNP kolorimetrische Assays untersuchen. Wie in einer früheren Veröffentlichung markiert ist , zwei verschiedene Strategien für die Schaffung des Assays wurden ⁷ untersucht. Die Assays wurden die Free Aptamer-Assay und die adsorbierte Aptamer-Assay bezeichnet. Die adsorbierte Aptamer Assay wurde attraktiver für die Zwecke eines fieldable Detekt...

Diskussion

Im Laufe der letzten zehn Jahre Nanopartikel basierend kolorimetrischen Assays ^2-4 zum Nachweis von Targets umfassen kleine Moleküle, DNA, Proteine ​​und Zellen entwickelt worden. Die Tests, die DNA-Aptamere mit Nanopartikeln verwenden wurden gewinnen Interesse. Typischerweise werden diese kolorimetrische Assays durch Mischen der DNA-Aptamer mit Analytmoleküle durch Zugabe zu AuNPs ^9-10 gefolgt durchgeführt. Allerdings haben diese Tests wurden in Proof-of-Concept-Demonstrationen mit kontrollierten ...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Gold(III)-Chloridhydrat	Sigma	254169	99,999 % Reinheit ist wichtig und die Lösungen wurden jedes Mal frisch hergestellt
Natriumcitrat-Dihydrat	Sigma	W302600-1KG-K	Wir haben festgestellt, dass der Hersteller AuNP-Assays stark beeinflusst, und die Lösungen wurden jedes Mal frisch hergestellt
Synergie	Bio-TEK	HT	Jedes Absorptionsspektrometer funktioniert, aber ein Plattenleser liefert eine Analyse mehrerer Proben
4-(2-Hydroxyethyl)piperazin-1-Ethansulfonsäure (HEPES) Puffer, 1  M sterilisiert	Amresco	J848	Jede sterilisierte Marke funktioniert
Corning, 250 ml Filtersystem, 0,22 nbsp; &Mikro; M-Celluloseacetat	Fischer	430767	Andere Membranen wurden gefunden, die die AuNPs entfernen
UV-Spectrophophotometer	Varian	Cary 300	Jedes Absorptionsspektrometer funktioniert
Magnesiumchloridhexahydrat	Fluka	63068	≥ 98 % funktionieren jede Marke
DNS	IDT	Gewohnheit	DNA wurde mit einer Entsalzsäule gereinigt, höhere Reinigungstechniken können verwendet werden
Prokainhydrochlorid	ACROS	AC20731-1000	99 % der Bestände von 1 mg/ml in Methanol wurden hergestellt
Salzsäure	Fischer	A144S-500	36,5–38,0 % mit anderen Marken funktionieren
Kokain-Hydrochlorid	Lipomed	COC-156-HC-1LM	Wir haben festgestellt, dass der Hersteller AuNP-Assays stark beeinflusst
Salpetersäure	Fischer	A509-SK212	65 % mit anderen Marken funktionieren
Natriumchloridlösung, 5 M Bioreagenz-Qualität	Sigma	S5150-1L	Sterile Lösungen aus festem Material wirken
Diethylpyrocarbonat	Sigma	D5758-25 mL	≥ 97 % jeder Brand funktioniert
Ecgoninmethylester-Hydrochlorid	Lipomed	COC-205-HC-1LM	Wir erhielten die EME-Kontrolle vom selben Hersteller wie das Kokain-Ziel
Mikrozentrifugenröhren, Axygen Scientific, nichtsteril, 1.7  Ml	VWR	10011-722	Wir haben festgestellt, dass der Hersteller AuNP-Assays stark beeinflusst, und die Röhren wurden intern autoklaviert
Nukleasefreies Wasser
Methanol