Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Methodenartikel

Untersuchungen über die Ga (III) -Komplexes von EOB-DTPA and Its

9.6K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/54334

⸱

17. August 2016

 ,  ,  , 
1Clinic of Nuclear Medicine, University Hospital Jena, 2Friedrich Schiller University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ein Verfahren zur Isolierung von EOB-DTPA und anschließende Komplexierung mit natürlichen Ga (III) und 68 Ga hier präsentiert wird, sowie eine gründliche Analyse aller Verbindungen und Untersuchungen zur Kennzeichnung Effizienz, In - vitro - Stabilität und der n- Octanol / Wasser Verteilungskoeffizient des radiomarkierten Komplexes.

Zusammenfassung

Wir zeigen, ein Verfahren zur Isolierung von EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris (carboxymethyl) -4- (Ethoxybenzyl) -undecanedioic Säure) von seinem Gd (III) -Komplex und Protokolle für die Vorbereitung seiner neuartigen nicht-radioaktiv, dh natürliche Ga (III) sowie radioaktive 68 Ga - Komplex. Der Ligand als auch das Ga (III) -Komplexes wurde durch kernmagnetische Resonanz (NMR) Spektroskopie, Massenspektrometrie und Elementaranalyse charakterisiert. 68 Ga durch eine Standard - Elution aus einem 68 Ge / 68 Ga - Generator erhalten. Versuche , die 68 Ga-Markierungseffizienz von EOB-DTPA bei pH zu bewerten 3,8-4,0 durchgeführt wurden. Etablierten Analysetechniken Funk TLC (Dünnschichtchromatographie) und Radio-HPLC (Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie) wurden verwendet, um die radiochemische Reinheit des Tracers zu ermitteln. Als eine erste Untersuchung der Lipophilie '68 Ga Tracern der n- Octanol / Wasser distribution Koeffizienten von 68 Ga - Spezies in einem pH 7,4 - Lösung wurde durch ein Extraktionsverfahren bestimmt werden . In vitro - Stabilitätsmessungen des Tracers in verschiedenen Medien bei physiologischem pH durchgeführt wurden, offenbart unterschiedliche Zersetzungsraten.

Einleitung

Gadoxetsäure ein gemeinsamer Name für den Gd (III) -Komplex des Liganden EOB-DTPA 1, ist ein häufig verwendetes Kontrastmittel in hepatobiliären Magnetresonanztomographie (MRI). 2,3 Aufgrund der spezifischen Aufnahme durch Leber Hepatozyten und hoher Prozentsatz von hepatobiliären Exkretion es die Lokalisierung von fokalen Läsionen und Lebertumoren ermöglicht. 2-5 gewisse Einschränkungen der MRI - Technik (zB Toxizität der Kontrastmittel, begrenzte Anwendbarkeit bei Patienten mit Klaustrophobie oder Metallimplantaten) jedoch für eine alternative Diagnosewerkzeug nennen .

Positron - Emissions - Tomographie (PET) ist ein Molekularabbildungsverfahren, bei dem eine kleine Menge einer radioaktiven Substanz (Tracer) verwaltet wird, auf dem ihre Verteilung im Körper durch einen PET - Scanner aufgezeichnet. 6 PET ist ein dynamisches Verfahren , das für Hoch ermöglicht räumliche und zeitliche Auflösung der Bilder sowie die Quantifizierung der Ergebnisse, ohne mitbefassen sich mit den Nebenwirkungen von MRI-Kontrastmittel. Der Aussagewert der erhaltenen metabolischen Informationen kann durch Kombination von weiteren bildgebenden Verfahren, wie es am häufigsten erreicht durch Hybrid-Bildgebung mit Computertomographie (CT) in PET / CT-Scanner erhalten mit anatomischen Daten erhöht werden.

Die chemische Struktur der Tracer für PET müssen ein radioaktives Isotop, das als Positronenemitter umfassen. Positronen haben eine kurze Lebensdauer, da sie fast sofort mit Elektronen der Atomschalen umgebenden Gewebe zu vernichten. Durch Vernichtung zwei 511 keV Gammaphotonen mit entgegengesetzter Bewegungsrichtung emittiert werden , die von der PET - Scanner erfasst werden. 7,8 Um einen Tracer, PET Nuklide bilden können kovalent an ein Molekül gebunden sein, wie es der Fall in 2-Desoxy- 2- [18 F] fluoroglucose (FDG), das am häufigsten verwendete PET - Tracer. 7 kann jedoch ein Nuklid auch koordinative Bindungen an einen oder mehrere Liganden bilden (zB[68 Ga] -DOTATOC 9,10) oder als gelöste anorganische Salze eingesetzt werden (beispielsweise [18 F] Natriumfluorid 11). Insgesamt ist die Struktur des Tracers entscheidend, da es seine Bioverteilung bestimmt, Metabolismus und Ausscheidungsverhalten.

Eine geeignete PET-Nuklid sollten günstige Eigenschaften wie bequeme Positron Energie und Verfügbarkeit sowie eine Halbwertszeit ausreichend für die geplante Untersuchung zu kombinieren. Die 68 Ga Nuklid ist in den letzten zwei Jahrzehnten eine wesentliche Kraft auf dem Gebiet der PET werden. 12,13 Dies ist vor allem vor Ort durch ein Generatorsystem, das unabhängig von der Nähe eines Zyklotrons Kennzeichnung ermöglicht aufgrund seiner Verfügbarkeit ist. In einem Generator Nuklid die Mutter 68 Ge auf einer Säule aus dem absorbiert wird die Tochter - Nuklid 68 Ga eluiert wird und anschließend in einem geeigneten Chelator gekennzeichnet. 6,14 Da das 68 Ga Nuklid als trival bestehtent - Kation wie Gd (III) 10,13, EOB-DTPA mit 68 Ga Chela statt einen Komplex mit dem gleichen Gesamt negative Ladung als Gadoxetsäure ergeben würde. Dementsprechend könnte , dass 68 Ga - Tracer eine ähnliche Charakteristik Leberspezifität mit der Eignung für die PET - Bildgebung zu kombinieren. Obwohl Gadoxetsäure als Dinatriumsalz gekauft und verwaltet werden , in folgendem Zusammenhang werden wir es als Gd [EOB-DTPA] beziehen und auf die nicht-radioaktiven Ga (III) -Komplex als Ga [EOB-DTPA] oder 68 Ga [ EOB-DTPA] im Falle der radiomarkierten Komponente aus Gründen der Bequemlichkeit.

Zur Beurteilung ihrer Eignung als Tracer für PET, radioaktiven Metallkomplexe müssen geprüft werden extensiv in in vitro, in vivo oder ex vivo Experimente zuerst. Zur Bestimmung der Eignung für ein entsprechendes medizinisches Problem, verschiedene Tracer Eigenschaften wie Bioverteilung Verhalten und Lichtraumprofil, Stabilität, Organspezifität und Zelle oder tissue Aufnahme müssen untersucht werden. Aufgrund ihrer nicht-invasiven Charakter, in vitro - Bestimmungen werden häufig vor der in vivo - Experimente durchgeführt. Es ist allgemein anerkannt , dass DTPA und seine Derivate sind von begrenzter Eignung als Chelatoren für 68 Ga aufgrund dieser Komplexe kinetische Inertheit fehlt, in vergleichsweise schnelle Zersetzung führt , wenn in vivo verabreicht. 14-20 Dies in erster Linie durch apo- Transferrin verursacht wird als wirkende Wettbewerber für 68 Ga im Plasma. Dennoch untersuchten wir diese neue Tracer über ihre mögliche Anwendung in Leber - Gallen - Bildgebung, bei Diagnoseinformationen können innerhalb von Minuten nach der Injektion 3,4,21-23, wodurch nicht unbedingt für die langfristige Stabilität Tracer zur Verfügung gestellt werden. Dazu isolierten wir EOB-DTPA aus Gadoxetsäure und ausgeführt zunächst die Komplexbildung mit natürlichen Ga (III), die als Mischung von zwei stabilen Isotopen besteht, 69 Ga und 71 Ga. Der Komplex somit als nicht-radioaktive Standard für die folgenden Chelat von 68 Ga erhalten serviert. Wir verwendeten Methoden ermittelt und bewertet gleichzeitig ihre Eignung für den 68 Galabeling Effizienz der EOB-DTPA für die Bestimmung und die Lipophilie des neuen 68 Ga - Tracer und seine Stabilität in verschiedenen Medien zu untersuchen.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

1. Herstellung von EOB-DTPA und Ga [EOB-DTPA]

Achtung: Bitte konsultieren Sie alle relevanten Sicherheitsdatenblätter (MSDS) der verwendeten organischen Lösungsmittel, Säuren und Laugen vor dem Gebrauch. Führen Sie alle Schritte in einem Abzug und persönliche Schutzausrüstung (Schutzbrille, Handschuhe, Kittel).

  1. Isolierung von EOB-DTPA aus Gadoxetsäure
    1. Setzen Sie 3 ml 0,25 M Gadoxetsäure injizierbare Lösung in einen Kolben. Hinzufügen, 500 mg (5,6 mmol) Oxalsäure zu der gerührten Lösung.
    2. Nach dem Rühren für 1 Stunde, filtern die Suspension über eine Fritte reduziert Druck. Dann den Rückstand dreimal mit 3 ml Wasser auf.
    3. Kombinieren Sie die wässrigen Filtrate und statten die Lösung mit einem pH-Elektrode. Liste 12 M Chlorwasserstoffsäure zu dem Filtrat, bis der pH-Wert beträgt etwa -0,1.
    4. Entferne das Lösungsmittel in vacuo zu einem farblosen Rückstand zu ergeben. Unter Inertgas aufbewahren.
    5. Waschen Sie den Rückstand gut (mindestens dreimal) mit Ethylacetat das überschüssige Oxalsäure zu entfernen. Trocknet den Rückstand im Vakuum.
    6. Abgeblasen, und der Rückstand in 2 ml Wasser bei Raumtemperatur und dann die Lösung in einem Eisbad zu kühlen. Ohne Entfernen des Eisbad mit 0,5 M wässriger Natronlauge tropfenweise bis zur Bildung eines farblosen gluey Feststoff wird beobachtet.
    7. Entfernen Sie das Wasser durch Abgießen. Waschen Sie die solide zwei Mal mit 1 ml kaltem Wasser. Der Feststoff wird im Vakuum die erste Produktfraktion zu ergeben.
    8. Isolieren einer zweiten Produktfraktion aus den vereinigten Fraktionen von abdekantiert Wasser über Säulenchromatographie (Kieselgel, Methanol / Wasser 4/1). 24 das Lösungsmittel im Vakuum entfernen.
    9. Wenn das so erhaltene feste nicht rein weiß ist, wieder in Lösung in 1 ml Wasser, 10 ml Ethanol und anschließend 10 ml Diethylether das Produkt zu fällen. Filter durch eine Fritte mit vermindertem Druck und im Vakuum getrocknet.
    10. Kombinierensowohl feste Fraktionen von EOB-DTPA und NMR - Spektroskopie, 25 massenspektrometrischen 26 und Elementar 27 Analysen durchführen.
  2. Synthese von Ga [EOB-DTPA]
    VORSICHT: Shop feste Ga (III) -chlorid unter einer trockenen, inerten Atmosphäre, da bei Kontakt mit Luft, Feuchtigkeit oder Fett Zersetzung stattfindet, was zu ätzende Dämpfe und die Bildung von gelb, braun oder schwarz Verunreinigungen.
    1. Bereiten Sie eine 0,11 M Stammlösung durch Auflösen von 1,94 g (11,0 mmol) Ga (III) -chlorid in 100 ml Wasser. Verdünne 1 ml 25% iger wässriger Ammoniaklösung mit 4 ml Wasser.
    2. Man löst 80 mg (0,15 mmol) des EOB-DTPA in einen Kolben in 10 ml Wasser. Falls erforderlich, erwärmen das Lösungsmittel eine vollständige Auflösung zu erreichen.
    3. In 1,4 ml (0,15 mmol) des Ga (III) -chlorid-Stammlösung. Anlegen des Kolbens mit einem Rührer und pH-Elektrode. Hinzufügen verdünnte wässrige Ammoniaklösung zugetropft, bis der pH-Wert der Lösung ca. 4,1 beträgt. Rühre bei room Temperatur für 30 min.
    4. Entferne das Lösungsmittel in vacuo. Platzieren Sie den Rückstand in einem Kolben, ausgestattet mit einem Destillationsaufsatz mit einem zentralen und parallelen Seiten Hals. Rüsten Sie den zentralen Hals mit einem Kühlfinger und dem Seitenhals mit einer Vakuumpumpe Auslass
    5. Heizen Sie den Rückstand unter vermindertem Druck (125 ° C, 0,6 mbar). Entfernen Sie regelmäßig sublimierten Ammoniumchlorid (sichtbar als weiße Beschichtung der Glasoberfläche) aus dem Kühlfinger und immer noch den Kopf, als auch von den oberen Teilen des Kolbens mit einem leicht feuchten Tuch. Setzen Sie den Vorgang, bis es keine sichtbare Bildung neuer Sublimat ist.
    6. Zum Entfernen letzten Spuren von Ammoniumchlorid den Rückstand dreimal mit 0,5 ml heißem Methanol, respectively. Trocknen der farblose Rückstand in vacuo. Führen NMR - spektroskopische, 25 massenspektrometrischen 26 und Elementar 27 Analysen.

2. Allgemeine Markierungsverfahren

ACHTUNG: Alle exExperimente mit direkten oder indirekten Kontakt mit radioaktiven Stoffen dürfen nur von geschultem Personal durchgeführt werden. Bitte verwenden Sie geeignete Schutzausrüstung. Sammeln Sie alle radioaktiven Abfälle getrennt und zu speichern und in Übereinstimmung mit den gültigen Vorschriften zu entsorgen.

  1. Elution des Generators
    Hinweis: Ein 40 mCi 68 Ge / 68 Ga - Generator mit der Mutter - Nuklid als Oxid auf Dodecyl-3,4,5-trihydroxybenzoat Kieselsäure gebunden wurde verwendet. Elution und Reinigung kann manuell oder durchgeführt werden, wie es der Fall in diesem Verfahren war, als kombinierte automatisierten Prozess eine peristaltische Pumpe und Spendereinheit.
    1. Bereiten Sie Lösungen von 5,5 M, 1,0 M und 0,05 M Salzsäure. Eine Lösung aus 5,0 M Natriumchlorid, 25 & mgr; l von 5,5 M Chlorwasserstoffsäure pro ml enthält. Bereiten einer Pufferlösung von pH 4,6 durch die Kombination von 4,1 g Natriumacetat, 1 ml HCl (30%) und 2,5 ml Eisessig und verdünnt das Gemisch mit Wasser auf 50 ml.
    2. Precondition der PS-H + Kartusche durch sie langsam mit 1 ml 1,0 M Salzsäure und anschließend mit 5 ml Wasser gespült.
    3. Eluieren der Silica - Säule des Generators mit 4 ml 0,05 M HCl. 12 Legen Sie das 68 Ga - Eluat auf die PS-H + Patrone.
    4. Spülen Sie die Kartusche mit 5 ml Wasser und anschließend mit 5 ml Luft trocknen. Eluieren der 68 Ga aus der Kartusche mit 1 ml 5,0 M angesäuerten Natriumchloridlösung. 28
  2. Die Markierung von EOB-DTPA mit 68 Ga
    1. Man löst 1 mg (1,9 umol) EOB-DTPA in 1 ml Wasser. Aus dieser Lösung nehmen 100 ul (0,19 umol) und verdünnen sie mit 9,9 ml Wasser ein 19 & mgr; M herzustellen (10 ug / ml) Stammlösung von EOB-DTPA.
    2. Entfernen Sie 50 ul (entspricht 22-29 MBq) der Lösung 68 Ga enthält und in ein Fläschchen. In 50 ul (0,5 ug) einer 19 mM Stammlösung von EOB-DTPA und 300 & mgr; l of Puffer den pH-Wert auf 4,0 zu erhöhen. Schütteln Sie kurz und Inkubation der Lösung bei Raumtemperatur für 5 min. Entfernen eines aliquoten von 1-5 & mgr; l und setzen HPLC oder TLC-Analyse.
    3. Führen Sie Radio - HPLC - Analyse an einer Reversed - Phase (RP) C18 - Säule 29 Verwenden Sie die folgende mobile Phase: a . - Wasser / Trifluoressigsäure (99,9% / 0,1%), B - Acetonitril / Trifluoressigsäure (99,9% / 0,1%), Gradient : 06 min 80% A → 0% A (0,5 ml / min), 610 min 0% A (0,5 ml / min).
    4. Bestimmen Sie die Peak-Intensitäten der Funk HPLC-Signale als Fläche unter der Kurve. Berechnen Sie die Markierungsausbeute als radiochemische Reinheit (RCP) des Tracers wie folgt:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A Ga + A Ga-EOB-DTPA) ∙ 100%
      Ein Ga-EOB-DTPA: Fläche unter der Kurve von 68 Ga [EOB-DTPA]
      A Ga: Fläche unter der Kurve der freien 68 Ga

3. Labelingeffizienz

  1. Führen Sie Markierungsverfahren wie beschreibend in Abschnitt 2. Verwenden Sie ein durchgängiges Programm an Aktivität von 68 Ga - Eluat starten, zB 22-29 MBq (40-140 & mgr; l, abhängig von der Frische des Eluats).
  2. Die erforderliche Menge an Pufferlösung , um den pH auf 3,8-4,0 einzustellen (40-190 & mgr; l, abhängig von dem Volumen von 68 Ga - Eluat). Fügen Sie die erforderliche Menge an Ligand-Stammlösung (10-70 ul einer 19 mM Lösung).
  3. Fügen Sie die erforderlichen Mengen an Wasser, um das Gesamtvolumen jeder Markierungssonde auf 1,75 ml einzustellen. Gut mischen und lassen Sie die Probe stehen für 5 Minuten bei Raumtemperatur. Eine HPLC-Analyse wie in Abschnitt 2 beschrieben, um die Markierungsausbeute zu bestimmen.
  4. Führen Markierungsverfahren mit Mengen an Liganden zwischen 0,1 & mgr; g und 0,7 & mgr; g in Schritten von 0,1 & mgr; g. Führen Sie Experimente in dreifacher Ausführung für jede Ligandenkonzentration. Berechnen Sie die mittlere Ausbeute und Standardabweichung.

4. In - vitro - Stabilität

  1. Allgemein pERFAHREN und Zubereitungen
    1. Auflösen einer Tablette von Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) in 200 ml deionisiertem Wasser mit einer PBS-Stammlösung mit einer Phosphatkonzentration von 10 mM herzustellen.
    2. Führen Sie die Kennzeichnung von 22-29 MBq 68 Ga mit 0,5 ul EOB-DTPA - Stammlösung, wie in Kapitel 2. Je nach Volumen des 68 Ga - Eluats, stellen Sie die Menge des Puffers, wie in Kapitel 3. Ziehen Proben Markierungslösung 6-12 MBq Tracer enthält Stabilitätsmessungen durchzuführen.
    3. Führen Radio DC - Analyse auf 80 mm Silicagel-beschichteten Aluminium - Platten unter Verwendung von 0,1 M wässrigem Natriumcitrat als Eluent und zu analysieren , die Platten mit einem Radioaktivität TLC - Scanner. 30 die Intensitäten der TLC - Signale als Fläche unter der Kurve zu bestimmen. Berechnen Sie die RCP des Tracers wie folgt:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A Ga-free + A Ga-EOB-DTPA + A Ga-kolloidalen) ∙ 100%
      Eine Ga-EOB-DTPA: Fläche unter der Kurve von 68 Ga [EOB-DTPA]
      Ein Ga-frei: Fläche unter der Kurve der freien 68 Ga
      Ein Ga-kolloidale: Fläche unter der Kurve von kolloidalem 68 Ga
    4. Berechnen RCP t / RCP 0 für jeden Zeitpunkt. Zeichnen Sie die so standardisiert RCP vs. Zeitdifferenz seit dem Startpunkt t = 0 min.
      RCP t = RCP von 68 Ga [EOB-DTPA] zum Zeitpunkt t.
      0 RCP = RCP von 68 Ga [EOB-DTPA] bei t = 0 min.
  2. Stabilität in phosphatgepufferter Salzlösung (A)
    1. Zu 65 & mgr; l Markierungslösung mit 150 ul PBS-Stammlösung und 60 & mgr; l Natriumhydroxid-Lösung (0,1 M), um den pH-Wert auf 7,4 zu erhöhen. Gründlich durchmischen.
    2. Entfernen eines aliquoten von 1-5 ul TLC-Analyse durchzuführen ( "Ausgangspunkt"). Sofort speichern, die Lösung in einem Inkubator bei 37 ° C und Aliquots entfernen, um die DC-Analyse an repräsentieren zuführenAtive Zeitpunkten über 3 Stunden.
  3. Stabilität gegenüber mehr als apo -Transferrin in PBS (B)
    1. Zu 120 & mgr; l Markierungslösung 50 ul-Lösung und 430 PBS-Stamm ul Natronlauge hinzu (0,1 M), um den pH-Wert auf 7,4 zu erhöhen. Werden 40 ul einer Lösung von apo -Transferrin (25 mg / ml). Gründlich durchmischen.
    2. Entfernen eines aliquoten von 1-5 ul TLC-Analyse durchzuführen ( "Ausgangspunkt"). Sofort speichern, die Lösung in einem Inkubator bei 37 ° C und Entfernen Aliquots TLC-Analyse bei repräsentativen Zeitpunkten über 3 h durchzuführen.
  4. Stabilität in humanem Serum (C)
    1. Bis 500 & mgr; l humanem Serum 25 ul Markierungslösung hinzufügen und 45 & mgr; l Natriumhydroxid-Lösung (0,1 M), um den pH auf 7,4 zu erhöhen. Gründlich durchmischen.
    2. Entfernen eines aliquoten von 1-5 ul TLC-Analyse durchzuführen ( "Ausgangspunkt"). Unmittelbar speichern Sie die Lösung in einem incubator bei 37 ° C und Entfernen Aliquots TLC-Analyse bei repräsentativen Zeitpunkten über 3 h durchzuführen.

5. Bestimmung des Verteilungskoeffizienten LogD

  1. Führen Sie Markierungsverfahren, wie in Abschnitt 2. 50 ul Markierungslösung werden 20 ul PBS-Stammlösung und 170 & mgr; l Natriumhydroxid-Lösung (0,1 M) beschrieben, um den pH-Wert auf 7,4 zu erhöhen.
  2. Ziehen Sie 200 ul von dieser Lösung und steckte es in eine Plastik V-Fläschchen. In 200 ul n- Octanol. Schließen Sie das Fläschchen und Vortex für 2 min. Zentrifuge Dann die Probe bei 1600 × g für 5 min.
  3. Entfernen Triplikaten von 40 & mgr; l aus der n Octanol - Phase und der wässrigen Phase jeder und sie in separaten V-Fläschchen. Achten Sie darauf, um die Schichten zu vermischen.
  4. Messen Sie die Aktivität jeder Probe in einem Gamma-Zähler gut für 30 Sekunden. Für jede Probe sofort die Messung zweimal wiederholen und davon die mittlere Aktivität Ᾱ t berechnen in Zählungen pro Minute (cpm). Liste der auf diese Weise gewonnenen Ᾱ t, W1, Ᾱ t, W2 und Ᾱ t, W3 (Aktivitäten in wässrigen Proben) und Ᾱ t, O1, Ᾱ t, O2, Ᾱ t, O3 (Aktivitäten in n- Octanol) zusammen mit dem jeweiligen Zeitpunkt t ihrer Bestimmung.
  5. Legen Sie den Zeitpunkt der Messung der letzten Probe als t 0. Bestimmen und in der Liste At in min durch die Berechnung At = tt 0. Führen Sie Zerfallskorrektur von Ᾱ t, mit der folgenden Formel:
    Ᾱ 0 = Ᾱ t · 2 (& Dgr; t / 68 min).
  6. Berechnen Ᾱ 0, W als Mittelwert von Ᾱ 0, W1, Ᾱ 0, W2 und Ᾱ 0, W3 sowie Ᾱ 0, O als Mittelwert Ᾱ 0, O1, Ᾱ 0, O2 und Ᾱ 0, O3. Berechnen logD mit folgender Formel:
    logD = log [(Ᾱ 0, O · 40 ug) / (Ᾱ 0, W · 33 ug)].
  7. Führen Sie das gesamte Experiment in dreifacher Ausfertigung und den Mittelwert logD zusammen mit seiner Standardabweichung.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Der Ligand EOB-DTPA und der nicht-radioaktiven Ga (III) -Komplex wurden mittels 1 H analysiert und 13 C {1 H} -NMR - Spektroskopie, Massenspektrometrie und Elementaranalyse. Die Ergebnisse in Tabelle 1 aufgelistet und dargestellt in Figuren 1-6 , die Reinheit der Substanzen verifizieren.

Die Elution der 68 Ge / 68 Ga - Generator l...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

EOB-DTPA ist über eine mehrstufige Synthese 33 kann aber auch nur aus den verfügbaren Kontrastmittel Gadoxetsäure enthält , isoliert werden. Zu diesem Zweck kann die Zentral Gd (III) -Ion mit einem Überschuß von Oxalsäure ausgefällt werden. Gd (III) Oxalat und Oxalsäure Nach dem Entfernen der Ligand kann durch Ausfällen in kaltem Wasser bei pH 1,5 isoliert werden. Um jedoch die Ausbeuten Säulenchromatographie des Filtrats zu verbessern kann durchgeführt anstelle oder als Follow-up-Verfahren. Jedes Verfahren e...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Die Autoren haben keine Danksagungen.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
PrimovistM
Gallium(III)-chloridSigma-Aldrich Co.
Wasser (deionisiert)-Leitungswasser Deionisierungsanlage von Auma-Tec GmbH
Salzsäure 12 MVWR20252.29
NatriumhydroxidPolskie Odczynniki Chemiczne S.A.
OxalsäureSigma-Aldrich Co.75688
ethylacetatBrenntag GmbH10010447
KieselgelMerck KGaA1.10832.9025Geduran Si 60 0.063-0.2  mm
DC-Kieselgel 60 F254Merck KGaA1.16834.0001
MethanolVWR20903.55
EthanolBrenntag GmbH10018366
EiethyletherVWR23807.468über KOH-Platten gelagert
Ammoniaklösung (25%)VWR1133.1
pH-ElektrodeVWR662-1657
Rühr- und HeizeinheitHeidolph505-20000-00
PumpeIlmvac GmbH322002
NMR-SpektrometerBruker Coorporation-UltraShield 400
MassenspektrometerThermo Fisher Scientific Inc.-
ElementaranalysatorHekatech GmbH Analysentechnik-EuroVectorEA 3000 CHNS
deuteriertes Wasser D2Oeuriso-topD21499,90% D
Material/Ausrüstung für Markierungsverfahren erforderlich
68Ge/68Ga GeneratorITG Isotope Technologies Garching GmbHA150
Pump- und DosiersystemScintomicsGmbH-Variosystem
Salzsäure 30% (suprapur)Merck KGaA1.00318.1000
Wasser (ultrapur)Merck KGaA1.01262.1000
Natriumchlorid (suprapur)Merck KGaA1.06406.0500
Natriumacetat (suprapur)Merck KGaA1.06264.0050
Eisessig (suprapur)Merck KGaA1.00066.0250
Natriumcitrat-DihydratVEB Laborchemie Apolda10782>98,5%
PS-H+ Kartusche (S)Macherey-Nagel731867Chromafix
apo-TransferrinSigma-Aldrich Co.T2036
PBS-Puffer (Tabletten)Sigma-Aldrich Co.79382
HumanserumSigma-Aldrich Co.H4522aus humanen männlichen AB-Plasmakolben
, Säulen etc.kundenspezifische
Knick Elektronische Messgerä te GmbH & Co. KG765-Set
binäre Pumpe (HPLC)Hewlett-PackardG1312A (HP 1100)
UV Vis Detektor (HPLC)Hewlett-PackardG1315A (HP 1100)
radioaktiver Detektor (HPLC)EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP SäuleAdvanced Chromatography Technologies Ltd.ACE-1110-1503/A100528
HPLC-GlasfläschchenGTG Glastechnik Graefenroda GmbH8004-HP-H/i3µ
PipetteEppendorf-Kunststofffläschchen
Sarstedt AG & Co. KG6542.007
KunststofffläschchenGreiner Bio-One International GmbH717201
activimeterMED Nuklear-Medizintechnik DresdenGmbH-Isomed2010
PinzetteCustom Design
InkubatorHeraeus Instruments GmbH51008815
WirbelmischerFisons-Whirlimixer
ZentrifugeHeraeus Instruments GmbH75003360
Gamma-BrunnenzählerMED Nuklear-Medizintechnik DresdenGmbH-Isomed2100
Wasser für die ChromatographieMerck KGaA1.15333.2500
Acetonitril für die ChromatographieMerck KGaA1.00030.2500
TrifluoressigsäureSigma-Aldrich91707
DC-Radioaktivitätsscannerraytest Isotopenmessgerä Die te GmbHB00003875mit Beta-Kunststoff-Detektor ausgestattet
Bayer-0,25 450898810925429 Fritten-Sonderanfertigung pH-Elektrode

Referenzen

  1. Weinmann, H. J., et al. A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI. Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).
  2. Stroszczynski, C., et al. Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln. Radiologe. 44, 1185(2004).
  3. Van Beers, B. E., Pastor, C. M., Hussain, H. K. Primovist, Eovist - what to expect. J. Hepatol. 57, 421-429 (2012).
  4. Zech, C. J., Herrmann, K. A., Reiser, M. F., Schoenberg, S. O. MR Imaging in Patients with Suspected Liver Metastases: Value of Liver-specific Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Magn. Reson. Med. Sci. 6, 43-52 (2007).
  5. Leonhardt, M., et al. Hepatic Uptake of the Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA: Role of Human Organic Anion Transporters. Drug Metab. Dispos. 38, 1024-1028 (2010).
  6. Wadas, T. J., Wong, E. H., Weisman, G. R., Anderson, C. Coordinating Radiometals of Copper, Gallium, Indium, Yttrium, and Zirconium for PET and SPECT Imaging of Disease. J. Chem. Rev. 110, 2858-2902 (2010).
  7. Ametamey, S. M., Honer, M., Schubiger, P. A. Molecular Imaging with PET. Chem. Rev. 108, 1501-1516 (2008).
  8. Cutler, C. S., Hennkens, H. M., Sisay, N., Huclier-Markai, S., Jurisson, S. S. Radiometals for Combined Imaging and Therapy. Chem. Rev. 113, 858-883 (2013).
  9. Henze, M., et al. PET Imaging of Somatostatin Receptors Using [68GA]DOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide: First Results in Patients with Meningiomas. J. Nucl. Med. 42, 1053-1056 (2001).
  10. Hofmann, M., et al. Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand 68Ga-DOTATOC: preliminary data. Eur. J. Nucl. Med. 28, 1751-1757 (2001).
  11. Blau, M., Nagler, W., Bender, M. A. Fluorine-18: a new isotope for bone scanning. J. Nucl. Med. 3, 332-334 (1962).
  12. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium Radiopharmaceutical Chemistry. Int. J. Radiat. Appl. Instrum. B. 16, 435-448 (1989).
  13. Rösch, F. Past, present and future of 68Ge/68Ga generators. Appl. Radiat. Isot. 76, 24-30 (2013).
  14. Liu, S. The role of coordination chemistry in the development of target-specific radiopharmaceuticals. Chem. Soc. Rev. 33, 445-461 (2004).
  15. Haubner, R., et al. Development of (68)Ga-labelled DTPA galactosyl human serum albumin for liver function imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 40 (68), 1245-1255 (2013).
  16. Yang, W., Zhang, X., Liu, Y. Asialoglycoprotein Receptor-Targeted Radiopharmaceuticals for Measurement of Liver Function. Curr. Med. Chem. 21, 4-23 (2014).
  17. Chauhan, K., et al. 68Ga based probe for Alzheimer's disease: synthesis and preclinical evaluation of homodimeric chalcone in β-amyloid imaging. Org. Biomol. Chem. 12, 7328-7337 (2014).
  18. Chakravarty, R., Chakraborty, S., Dash, A., Pillai, M. R. A. Detailed evaluation on the effect of metal ion impurities on complexation of generator eluted 68Ga with different bifunctional chelators. Nucl. Med. Biol. 40, 197-205 (2013).
  19. Clevette, D. J., Orvig, C. Comparison of ligands of differing denticity and basicity for the in vivo chelation of aluminum and gallium. Polyhedron. 9, 151-161 (1990).
  20. Prinsen, K., et al. Development and evaluation of a 68Ga labeled pamoic acid derivative for in vivo visualization of necrosis using positron emission tomography. Bioorg. Med. Chem. 18, 5274-5281 (2010).
  21. Vogl, T. J., et al. Liver tumors: comparison of MR imaging with Gd-EOB-DTPA and Gd-DTPA. Radiology. 200, 59-67 (1996).
  22. Reimer, P., et al. Phase II clinical evaluation of Gd-EOB-DTPA: dose, safety aspects, and pulse sequence. Radiology. , 177-183 (1996).
  23. Ba-Ssalamah, A., et al. MRT der Leber. Radiologe. 44, 1170-1184 (2004).
  24. Scott, R. P. W. Journal of Chromatography Library. 22A, Elsevier Scientific Publishing Co. A137-A160 (1983).
  25. Reichenbaecher, M., Popp, J. Strukturanalytik organischer und anorganischer Verbindungen. , 1st, B. G. Teubner Verlag. Wiesbaden. (2007).
  26. Gross, J. H. Mass Spectrometry: A Textbook. , Springer. (2004).
  27. Ma, T. S., Rittner, R. C. Modern Organic Elemental Analysis. , Marcel Dekker, Inc. (1979).
  28. Mueller, D., et al. Simplified NaCl Based 68Ga Concentration and Labeling Procedure for Rapid Synthesis of 68Ga Radiopharmaceuticals in High Radiochemical Purity. Bioconjugate Chem. 23, 1712-1717 (2012).
  29. Roberts, T. R. Radio-column chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 103-132 (1978).
  30. Roberts, T. R. Radio-thin-layer chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 45-83 (1978).
  31. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium radiopharmaceutical chemistry. Nucl. Med. Biol. 16, 435-448 (1989).
  32. Notni, J., Plutnar, J., Wester, H. J. Bone-seeking TRAP conjugates: surprising observations and their implications on the development of gallium-68-labeled bisphosphonates. EJNMMI Res. 2, 13(2012).
  33. Schmitt-Willich, H., et al. Synthesis and Physicochemical Characterization of a New Gadolinium Chelate: The Liver-Specific Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Inorg. Chem. 38, 1134-1144 (1999).
  34. 68Ga generator for positron emission tomography. , DE102010037964B3 (2012).
  35. Simecek, J., Hermann, P., Wester, H. J., Notni, J. How is 68Ga Labeling of Macrocyclic Chelators Influenced by Metal Ion Contaminants in 68Ge/68Ga Generator Eluates? ChemMedChem. 8, 95-103 (2013).
  36. Baur, B., et al. Synthesis, Radiolabelling and In Vitro Characterization of the Gallium-68-, Yttrium-90- and Lutetium-177-Labelled PSMA Ligand, CHX-A''-DTPA-DUPA-Pep. Pharmaceuticals (Basel). 7, 517-529 (2014).
  37. Boros, E., et al. RGD conjugates of the H2dedpa scaffold: synthesis, labeling and imaging with 68Ga. Nucl. Med. Biol. 39, 785-794 (2012).
  38. Beck, W. S. Hematology. , 5th, MIT press. Cambridge, Massachusetts. (1998).
  39. Patel, V., Morrissey, J. Practical and Professional Clinical Skills. , 1, Oxford University Press Inc. New York. (2001).
  40. Bartke, A., Constanti, A. Basic Endocrinology. , 1, CRC Press. (1998).
  41. Bernstein, L. R. Mechanisms of Therapeutic Activity for Gallium. Pharmacol. Rev. 50, 665-682 (1998).
  42. Clausen, J., Edeling, C. J., Fogh, J. 67Ga Binding to Human Serum Proteins and Tumor Components. Cancer Res. 34, 1931-1937 (1974).
  43. Dumont, R. A., et al. Novel 64Cu- and 68Ga-Labeled RGD conjugates show improved PET imaging of αvβ3 integrin expression and facile radiosynthesis [Erratum to document cited in CA156:116856. J. Nucl. Med. 52, 1498(2011).
  44. Pohle, K., et al. 68Ga-NODAGA-RGD is a suitable substitute for 18F-Galacto-RGD and can be produced with high specific activity in a cGMP/GRP compliant automated process. Nucl. Med. Biol. 39, 777-784 (2012).
  45. Notni, J., Pohle, K., Wester, H. J. Be spoilt for choice with radiolabelled RGD peptides: Preclinical evaluation of 68 Ga-TRAP(RGD)3. Nucl. Med. Biol. 40, 33-41 (2013).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Gallium-68-TracerEOB-DTPA-Komplexradioaktive MarkierungRadio-HPLC-AnalyseRadio-TLC-AnalyseVerteilungskoeffizientIn-vitro-StabilitätLigandenisolierungradiochemische Reinheit
Untersuchungen über die Ga (III) -Komplexes von EOB-DTPA and Its
Kontaktieren Sie uns
Der Bibliothek empfehlen

Datenschutz

Nutzungsbedingungen

Richtlinien

Urheberrecht © 2026 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten.