Fluoreszierende orthotopen Mausmodell des Bauchspeicheldrüsenkrebs

Zusammenfassung

Ein Verfahren zur orthotopischen Implantation von grün fluoreszierenden Protein-exprimierenden Bauchspeicheldrüsenkrebszellen (PANC-1 GFP) in die Bauchspeicheldrüse von Balb-c Ola Hsd-Fox1nu Mäusen zur Beurteilung der Tumorprogression und Metastasierung wird hier vorgestellt.

Zusammenfassung

Bauchspeicheldrüsenkrebs bleibt eine der Krebsarten, für die das Überleben verbessert hat sich nicht wesentlich in den letzten Jahrzehnten. Nur 7% der diagnostizierten Patienten werden länger als fünf Jahre überleben. Um die Mikroumgebung von Tumoren der Bauchspeicheldrüse zu verstehen und nachzuahmen, verwendeten wir einen murinen orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs, die in Echtzeit nicht-invasive Bildgebung von Tumorprogression ermöglicht. Bauchspeicheldrüsenkrebszellen exprimieren , grün fluoreszierendes Protein (GFP PANC-1) wurden in Basalmembran - Matrix, hoher Konzentration, ausgesetzt (zB Matrigel HC) mit serumfreiem Medium und dann in den Schwanz der Bauchspeicheldrüse durch Laparotomie injiziert. Die Zellsuspension in der hohen Konzentration Basalmembran-Matrix wird zu einer gelartigen Substanz, sobald es Raumtemperatur erreicht; daher geliert es, wenn es in Kontakt mit der Bauchspeicheldrüse kommt, um eine Dichtung an der Injektionsstelle zu schaffen und eine beliebige Zelle Auslaufen zu verhindern. Tumorwachstum und Metastasierung in andere Organe werden in lebenden wachtenTiere durch Fluoreszenz unter Verwendung. Es ist wichtig, die geeigneten Filter für die Anregung und Emission von GFP zu verwenden. Die Schritte für die orthotope Implantation sind in diesem Artikel beschrieben so Forscher leicht, das Verfahren in nackten Mäusen replizieren können. Die wesentlichen Schritte dieses Protokolls sind Herstellung der Zellsuspension, chirurgische Implantation, und der ganze Körper fluoreszierendes in vivo Bildgebung. Dieses orthotoper Modell ist entwickelt, um die Wirksamkeit neuer Therapeutika auf primären und metastatischen Tumoren zu untersuchen.

Einleitung

Bauchspeicheldrüsenkrebs ist mit einer erhöhten Frequenz im Vergleich zu anderen Krebsarten diagnostiziert und ist das ^4. häufigste Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle in den Vereinigten Staaten. Ab dem Zeitpunkt der Diagnose, über 90% der Patienten sterben innerhalb von fünf Jahren ^1,2. Derzeit ist die chirurgische Tumorentfernung die einzige Heilung für Bauchspeicheldrüsenkrebs, aber weniger als 20% der Patienten sind berechtigt , Chirurgie vor allem , weil zum Zeitpunkt der Diagnose zu unterziehen , die Krankheit in einem fortgeschrittenen Stadium und hat ^3,4 metastasiert. Der Mangel an spezifischen Symptome macht Bauch....

Protokoll

Das Protokoll weiter unten beschrieben wird, unter Anleitung und Genehmigung der Western University Animal Care und Verwenden Ausschuss ausgeführt. Alle Versuche werden unter Einhaltung aller einschlägigen Richtlinien, Vorschriften und Aufsichtsbehörden durchgeführt.

1. Zellkultur

1. Herstellung von Komplettmedium
   1. Mit einer Klasse-II-biologischen Sicherheitsschrank, bereiten komplettes Medium durch aseptisches Zugabe von fötalem Rinderserum (FBS) und Penicillin-Streptomycin (P / S) in einen 500-ml-Flasche RPMI-Medium. Vorsichtig mischen durch Schwenken. Die Endkonzentration jedes Ergänzungsmittel ist 10% ....

Ergebnisse

Dieses Verfahren beschreibt eine chirurgische orthotope Implantation von fluoreszierenden menschlichen Zellen Bauchspeicheldrüsenkrebs, bei der Herstellung der Zellsuspension zur Injektion, richtige Anästhesie für Nagetiere, Lieferung der Zellsuspension durch Laparotomie Fokussierung und die Verwendung von Fluoreszenz - in - vivo Kleintierbildgebung. Die Detektion eines grünen Fluoreszenzsignal (GFP - Signal) zwischen zwei und drei Wochen nach der Implantation, bietet F.......

Diskussion

Wir beschreiben ein orthotoper murinen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs , die GFP zum Ausdruck bringt, so dass nicht-invasive Überwachung des Tumorwachstums unter Verwendung von ganzen Körper in vivo Fluoreszenz - Bildgebung (Abbildung 1). Diese Technik ermöglicht es, die Tumor - Entwicklung in Echtzeit (Abbildung 3) zu überwachen; es kann ein wichtiges Instrument für die Forscher, die therapeutische Wirksamkeit von neuen Wirkstoffen gegen Bauchspeicheldrüsenkrebs zu untersu.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
RPMI media 1640	Caisson Labs	RPL03-500ML
Fötales Rinderserum	Gibco	10437-077
Penicillin Streptomycin	Thermo Ficher Sci	15140-122
Matrigel HC Basalmembran, hochkonzentriertes	Corning	354248
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	39010
Alcare oder geschäumtes Antiseptikum	Handdesinfektion Steris	639680
DPBS (Dubelcco's Phosphat-Buffered Kochsalzlösung)	Thermo Ficher Sci	21300025
TB Spritze 27 g 1/2	Becton Dickinson	305620
Isofluran	Blutler Schein	50562
Ketoprofen	Fort Dodge Animal Health
Chirurgische Schere, 5,5" gerade Mayo	Henry Schein	22-1600
PANC-1 GFP-Zelllinie	Anticancer, Inc
Bildgebungssystem für Kleintiere: iBox Scientia	UVP, LLC. Upland, Kalifornien.		Kleintier-Bildgebungssystem zur Beobachtung des fluoreszierenden Tumors bei lebenden Tieren