Beobachtung und Quantifizierung der Paarungsverhalten in der Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

Najie Zhu; Liqun Bai; Stefan Schütz; Baojun Liu; Zhenyu Liu; Xingyao Zhang; Hongshi Yu; Jiafu Hu

doi:10.3791/54842

Methodenartikel

Beobachtung und Quantifizierung der Paarungsverhalten in der Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

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DOI:

10.3791/54842

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25. Dezember 2016

Najie Zhu^*¹ , Liqun Bai^*¹ , Stefan Schütz² , Baojun Liu³ , Zhenyu Liu³ , Xingyao Zhang⁴ , Hongshi Yu¹ , Jiafu Hu¹^,⁵

¹Department of Forest Protection, Zhejiang Agricultural & Forestry University, ²Institute of Forest Zoology and Forest Conservation, Georg-August University Göttingen, ³College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, ⁴Institute of Forest Protection, Chinese Academy of Forestry, ⁵Collaborative Innovation Center of Sustainable Forestry in Southern China, Nanjing Forestry University

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ein Protokoll zur Untersuchung des Paarungsverhaltens des Kiefernfadenwurms, Bursaphelenchus xylophilus, wird vorgestellt. Verhaltensmerkmale von B. xylophilus werden im Paarungsprozess beschrieben.

Zusammenfassung

Ein Verfahren zur Beobachtung und das Paarungsverhalten des Kiefernfadenwurm, Bursaphelenchus xylophilus Quantifizierung wurde unter einem Stereomikroskop etabliert. Um die Paarungseffizienz von B. Xylophilus verbessern und die Chancen der Paarung Beobachtung zu erhöhen, waren virgin Erwachsene kultiviert und verwendet für die Untersuchung. Die Eier wurden, indem sie die Nematoden in Wasser erhalten und damit die Weibchen für 10 min Eier zu legen. Die zweite Stufe Jugendliche (J2) wurden im Dunkeln, und die frühe J4 erhalten wurden bei 25 ° C für 24 h durch Inkubation der Eier synchronisiert durch die J2 Kultivierung mit Grauschimmel Botrytis cinerea, für eine weitere 52 h. Zu diesem Zeitpunkt konnten die meisten J4 Nematoden klar unterschieden werden als männlich oder weiblich ist, ihre Genital Morphologie verwendet wird. Die männlichen und weiblichen J4 wurden gesammelt und kultiviert getrennt in zwei verschiedenen Petrischalen für 24 h virgin erwachsenen Nematoden zu bekommen. Eine Jungfrau männliche und eine jungfräuliche Weibchen wurden in einem Tropfen wat gepaarter in die Vertiefung einer konkaven Folie. Das Paarungsverhalten wurde mit einem Videorecorder unter einem Stereomikroskop gefilmt. Die ganze Periode des Paarungsprozesses war 82,8 ± 3,91 min (Mittelwert ± SE) und konnte in 4 verschiedene Phasen unterteilt werden: die Suche, Kontaktaufnahme, Kopulation und lang anhaltend. Die mittleren Minuten Dauer waren 21,8 ± 2,0, 28,0 ± 1,9, 25,8 ± 0,7 und 7,2 ± 0,5. Elf Unter Verhaltensweisen wurden beschrieben: kreuzen, nähern, begegnen, berühren, hooping, Ortung, Befestigung, ejakulieren, trennen, quiescence und Roaming. Interessanterweise offensichtlich intra sexuellen Wettbewerb wurde beobachtet, wenn ein Weibchen mit 3 Männchen oder ein Männchen mit drei Frauen gruppiert wurde. Dieses Protokoll ist nützlich und wertvoll, nicht nur das Paarungsverhalten von B. xylophilus bei der Untersuchung, sondern auch als Referenz für ethologischer Studien anderer Nematoden in wirken.

Einleitung

Der Kiefernfadenwurm, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner und Bührer) Nickelle, ist eine der zerstörerischsten invasiven Arten, die das Welken und schließlich den Tod von Kiefern verursacht. Es wird angenommen, dass dieser pathogene Nematode in den USA beheimatet ist, aber er wurde in mehrere Länder transportiert, darunter China, Japan, Südkorea und Portugal. Kürzlich wurde es auch in Spanien gemeldet, das Millionen von Kiefern mit enormen wirtschaftlichen Verlusten tötete und die Waldproduktion und die ökologische Stabilität bedrohte^1-5.

Sobald eine Wirtskiefer von Kiefernfadenwürmern befallen ist, vermehren sich Tausen....