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Methodenartikel

In - vivo - Untersuchung von Antimicrobial Blau Lichttherapie für Multiresistente Acinetobacter baumannii Brennen Infektionen Biolumineszenz - Bildgebung

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DOI:

10.3791/54997

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28. April 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Wellman Center for Photomedicine, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 2Department of Medical Oncology, Beijing Institute of Translational Medicine, Chinese Academy of Sciences, 3Cancer Center, Aviation General Hospital, Beijing, 4Infectious Disease Service, Brooke Army Medical Center

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Infektionen, die durch multiresistente (MDR) Bakterienstämme verursacht werden, haben sich zu einer ernsthaften Bedrohung für die öffentliche Gesundheit entwickelt, die die Entwicklung alternativer Therapeutika erforderlich macht. Wir stellen ein Protokoll vor, um die Wirksamkeit einer antimikrobiellen Blaulichttherapie (aBL) bei MDR-Acinetobacter baumannii-Infektionen bei Mausverbrennungen unter Verwendung von Biolumineszenz-Bildgebung zu bewerten.

Zusammenfassung

Brennen Infektionen weiterhin eine wichtige Ursache für Morbidität und Mortalität. Das zunehmende Auftreten von mehrfach arzneimittelresistenten (MDR) Bakterien ist das häufige Versagen der traditionellen Antibiotika-Behandlungen geführt. Alternative Therapien sind dringend zu bekämpfen MDR Bakterien benötigt.

Ein innovativer nicht-Antibiotikum Ansatz, antimikrobielle blaues Licht (abl) hat vielversprechende Wirksamkeit gegen MDR-Infektionen gezeigt. Der Wirkmechanismus von Abl ist noch nicht gut verstanden. Es wird allgemein angenommen , dass natürlich endogenes Photosensibilisator Chromophore in Bakterien (beispielsweise eisenfreien Porphyrinen, Flavine, etc.) auftritt durch Abl angeregt werden, die wiederum zytotoxische reaktive Sauerstoffspezies (ROS) durch einen photochemischen Prozeß erzeugt.

Im Gegensatz zu anderen lichtbasierten antimikrobiellen Ansatz, antimikrobiellen Photodynamischen Therapie (aPDT), Abl Therapie erfordert nicht die Beteiligung eines exogenen photosensitizer. Alles was es braucht zu übernehmen ist die Bestrahlung mit blauem Licht; daher ist es einfach und kostengünstig. Die abl-Rezeptoren sind die endogenen zellulären Photosensibilisatoren in Bakterien, anstatt die DNA. Somit wird angenommen, dass viel weniger abl genotoxisch sein, Zellen als ultraviolett-C (UVC) Bestrahlung Host, die DNA-Schäden direkt in Wirtszellen verursacht.

In diesem Beitrag stellen wir ein Protokoll , um die Wirksamkeit der abl - Therapie für MDR Acinetobacter baumannii Infektionen in einem Mausmodell der Brandverletzung zu bewerten. einen angelegten Biolumineszenz-Stammes Durch den Einsatz konnten wir das Ausmaß der Infektion in Echtzeit in lebenden Tieren nicht-invasiv überwachen. Diese Technik ist auch ein wirksames Instrument für die räumliche Verteilung von Infektionen bei Tieren zu überwachen.

Einleitung

Brennen Infektionen, die wegen der Haut thermischer Verletzungen häufig gemeldet werden, weiterhin 1 eine wichtige Ursache für Morbidität und Mortalität. Das Management von Burn - Infektionen wurde durch die zunehmende Auftreten von multiresistenten (MDR) Bakterienstämmen 2 aufgrund des massiven Einsatz von Antibiotika weiter beeinträchtigt. Ein wichtiger MDR Gram-negative Bakterien ist Acinetobacter baumannii, die bekanntlich mit den jüngsten Kampfwunden in Verbindung gebracht werden und ist beständig gegen fast alle verfügbaren Antibiotika 3. Die Anwesenheit von Biofilmen an dem verletzten Foci wird 4 berichtet, 5 und wird angenommen , dass die Toleranz gegenüber Antibiotika und Wirtsabwehr 6, 7, persistente Infektionen verursacht 8, 9 zu verstärken. Daher ist es eine pressing benötigt für die Entwicklung von alternativen Behandlungen. In der angekündigten Nationalen Strategie vor kurzem für die Bekämpfung von Antibiotika-resistenten Bakterien hat die Entwicklung alternativer Therapeutika gegen Antibiotika als eine Aktion von der Regierung der Vereinigten Staaten 10 zur Kenntnis genommen.

Licht basierende antimikrobielle Ansätze, wie der Name schon sagt, erfordern Lichtbestrahlung mit oder ohne andere Mittel. Diese Ansätze schließen antimikrobielle Photodynamischen Therapie (aPDT), UV-C (UVC) Bestrahlung und antimikrobielle blaues Licht (abl). In früheren Studien haben sie vielversprechende Wirksamkeit bei der Abtötung von MDR Bakterienstämmen 11, 12, 13 gezeigt. Unter den drei lichtbasierte Ansätze hat abl Aufmerksamkeit auf sich gezogen in den letzten Jahren zunehmend aufgrund ihrer intrinsischen antibakterielle Eigenschaften ohne die Verwendung von Photosensibilisatoren 14. in comparIson zu aPDT beinhaltet abl nur die Verwendung von Licht, während aPDT eine Kombination von Licht und Photosensibilisator erfordert. Daher ist abl einfach und kostengünstig 14. Im Vergleich zu UVC wird abl glaubt viel weniger zytotoxische und genotoxisch seine Wirtszellen 15.

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Wirksamkeit von Abl zur Behandlung von Verbrennungen Infektionen durch MDR A. baumannii in einem Mausmodell verursacht zu untersuchen. Wir verwenden Biolumineszenz-pathogene Bakterien neue Mausmodelle von Burn-Infektionen zu entwickeln, die der nicht-invasive Überwachung der bakteriellen Belastung in Echtzeit ermöglichen. Im Vergleich zu der traditionellen Methode der Körperflüssigkeit / Gewebe - Probennahme und anschließende Plattieren und Koloniezählung 16, liefert diese Technik eines genauen Ergebnisse. Der Prozess der Gewebeprobenentnahme kann eine andere Quelle von experimentellen Fehler einzuführen. Da die bakterielle ist Lumineszenzintensität zu dem entspre linear proportionalPonding 17 CFU Bakterien, können wir das Überleben der Bakterien nach einer bestimmten Dosis der Bestrahlung mit Licht direkt messen. Durch die Überwachung kann die bakterielle Belastung in lebenden Tieren, das Licht Behandlung in Echtzeit empfängt, die Kinetik der Bakterienabtötung charakterisiert wird eine deutlich reduzierte Anzahl von Mäusen.

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Protokoll

1. Herstellung von Bakterienkultur

  1. 7.5 ml Brain Heart Infusion (BHI) -Medium in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen. Seed A. baumannii Zellen in dem BHI - Medium und dann Inkubieren der Kultur A. baumannii in einem Orbital - Inkubator (37 ° C) für 18 h.
  2. Zentrifugieren der Kultur von Zellen bei 3.500 × g für 5 min, um den Überstand entfernen, und wasche die Pellets in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS).
  3. Re-suspend der Bakterienpellets in frischem PBS und gründlich die Suspension pipettieren.
  4. Sammeln Sie 100 ul der Bakteriensuspension und macht eine Verdünnung von 1:10 mit frischem PBS.
  5. Übertragen der Verdünnung in ein 1,5 ml halb Mikroküvette und Messen der optischen Dichte (OD) bei einer Wellenlänge von 600 nm (OD 600 nm).
  6. Berechnen Sie die OD 600 nm der ursprünglichen (unverdünnt) Suspension in PBS entsprechend den gemessenen OD600 nm Wert der Verdünnung und der Verdünnungsfaktor (10).
  7. Stellen Sie the ursprüngliche Suspension in PBS 600-nm bis OD = 0,6 (auf eine Zelldichte von 10 8 CFU / ml entspricht).

2. Maus - Modell der Burn - Infektion verursacht durch Biolumineszenz A. baumannii

  1. Verwenden erwachsene weibliche Balb / c-Mäuse im Alter von 7-8 Wochen und mit einem Gewicht von 17-19 g. Lassen Sie die Mäuse für mindestens 3 Tage vor Beginn des Experiments an die Laborbedingungen akklimatisiert. Pflegen Sie die Mäuse in einem 12 h Licht / Dunkel - Zyklus unter einer Raumtemperatur von 21 ℃ und gibt ihnen Nahrung und Wasser ad libitum.
  2. Anesthetize die Mäuse mit einer intraperitonealen Injektion von Ketamin-Xylazin eines Cocktail (100 mg / kg - 20 mg / kg). leicht berühren die Palpebra jeder Maus mit einem Wattestäbchen; ein Fehlen des palpebralen Reflexes schlägt eine geeignete Narkosetiefe. Deckt die Maus Augen mit VET Salbe auf die Augen vor dem Austrocknen während der Anästhesie zu verhindern.
  3. Shave die Mäuse auf der Rückseite so viel Haut wie möglich zu belichten durch Verwendung eines 50-Blatt Haarschneider.
  4. Setzen Sie den Deckel einer 35 mm-Petrischale unter den Bäuchen der Mäuse in einer relativ horizontalen Position mit dem Rücken zu halten.
  5. Boil Wasser in einem 250 ml Becherglas (80% gefüllt) unter Verwendung einer 10" x 10" , 220 VAC Heizplatte. Tauchen einen Messingblock (1 cm x 1 cm Querschnitt) in den Becher bis zum thermischen Gleichgewicht mit dem Wasser erreicht ist. Thermische Äquilibrierung dauert in der Regel <5 min und wird durch den erneuten Sieden des Wassers im Becherglas angegeben.
  6. Vor der Brandverletzung zu schaffen, verwalten präemptive Analgetika (eine subkutane Injektion von 0,1 mg / kg Buprenorphin) zur Schmerzlinderung.
  7. Zehn Minuten nach der präemptive Analgetika, drücken Sie vorsichtig den beheizten Messingblock auf die rasierte Fläche auf der Rückseite der Mäuse für 7 s Brandwunden zu induzieren.
    HINWEIS: Um die thermische Schädigung des Arbeitspersonal, trägt wärmebeständige Handschuhe, wenn die Durchführung den Brennvorganges zu vermeiden.
  8. Administrieren 0,5 ml steriler Kochsalzlösung durch subcutaneous Injektion zu verhindern Austrocknung.
  9. Fünf Minuten nach der Induktion der thermischen Verletzung, beimpfen 50 & mgr; l der Bakteriensuspension mit 5 x 10 6 CFU in PBS auf die Maus Verbrennungen mit einer Pipette. Durch Bewegen einen sterilen Baumwolltupfer in einer Zick-Zack-Bewegung auf der Haut, schmieren die Aliquote auf den Verbrennungen so gleichmäßig wie möglich um die Bakterienzellen in dem verbrannten Bereich zu verteilen.
  10. Unmittelbar nach dem bakteriellen Inokulation Biolumineszenz-Bildgebung für die infizierte Verbrennungen zuführen, wie in Abschnitt 4 beschrieben.
  11. Platzieren Sie die Mäuse auf einem wasserbeheizten chirurgisches Bett (37 ° C, Wiederherstellungsbereich), bis die Mäuse vollständig von der Anästhesie erholt haben. Haus der Mäuse mit einer maximalen Anzahl von 5 pro Käfig in einem Biosafety Level-2 Tierraum.
  12. Verabreichen Analgetika (subkutane Injektion von 0,1 mg / kg Buprenorphin) zweimal täglich für die ersten drei Tage nach der Brandverletzung.

3. Antimikrobielle Blau - Licht - Therapie für A. & #160; baumannii Infektion bei Mäusen

  1. Starten Sie abl Therapie bei 24 h nach Bakterieninokulation.
  2. Verwenden, um eine Leuchtdiode (LED) mit einer Spitzenemission bei 415 nm für die abl-Bestrahlung. Die LED auf einem Kühlkörper Mount in Mäusen 18 thermische Effekte auf dem bestrahlten Bereich zu verhindern. Fix die LED auf eine optische Haltestange mit Clip-Anschlüssen der LED zu ermöglichen, nach oben und unten.
  3. Schalten Sie die Energie / Energiezähler und drücken Sie die Taste Wellenlänge 415 nm zu wählen. Setzen Sie den Strom- / Energiezähler den Hintergrund (Umgebungslicht) zu subtrahieren.
  4. Setzen Sie die Strom- / Energiezähler direkt unter der LED. Tragen Sie blaues Licht Schutzbrille. Schalten Sie das LED-Licht und stellen den Abstand zwischen der LED-Öffnung (eine Linse, die das Licht von der LED konvergiert) und dem Lichtsensor (2 cm Durchmesser) der Strom- / Energiezähler, so dass der Lichtfleck bedeckt den gesamten Bereich der der Lichtsensor.
  5. Sorgfältig Melodie der LED-Treiber und das Lesen des powe aufzeichnenr / Energiezähler. Berechnen der Bestrahlungsstärke nach dem Lesen: Bestrahlungsstärke = Lese (W) / Fläche (cm 2) ist . Stellen Sie die Bestrahlungsstärke der LED bis 100 mW / cm2 durch die LED-Treiber-Tuning.
  6. Schalten Sie die LED. Den Abstand zwischen der LED-Apertur und dem Lichtsensor der Leistung / Energiezähler.
  7. Anesthetize die Mäuse mit einer intraperitonealen Injektion von Ketamin-Xylazin eines Cocktail (100 mg / kg - 20 mg / kg). Ein Fehlen des palpebralen Reflexes schlägt eine geeignete Narkosetiefe.
  8. Dividieren zufall die Mäuse in eine abl-behandelten Gruppe (n = 10) und eine unbehandelte Kontrollgruppe (n = 10).
  9. Für die abl-behandelten Gruppe, decken die Augen von Mäusen mit einer Aluminiumfolie übermäßiges Licht zu vermeiden. Platzieren Sie die Maus Verbrennungen direkt unter der LED, mit dem Deckel einer 35-mm-Petrischale unter dem Maus Abdomens ihren Rücken in einer horizontalen Position zu halten.
  10. Ersetzen die Leistungs- / Energiezähler in Schritt 3.5 erwähnt mit einer Maus auf einem quadratischen di PetriSch. Stellen Sie die Höhe der Maus wieder in eine Position, wo der Abstand zwischen der LED-Öffnung und der Oberfläche der Maus burn ist gleich die zwischen der LED-Öffnung und dem Pegel des Lichtsensors der Strom- / Energiezähler (wie in Schritt diskutiert 3.5).
  11. Bestrahlen der infizierten Verbrennungen bei einer Strahlungsintensität von 100 mW / cm 2. Liefern abl in Dosen von 72 J / cm 2 bis zu einer Gesamtdosis von 360 J / cm 2 erreicht ist (beispielsweise 0, 72, 144, 216, 288 und 360 J / cm 2). Nach jeder Lichtdosis, führen Biolumineszenz-Bildgebung für die Mäuse, wie in Abschnitt 4 besprochen.
  12. Für die unbehandelte Kontrollgruppe, Biolumineszenz-Bildgebung der Maus Verbrennungen zuführen, wie in Abschnitt 4 beschrieben, wobei die gleichen Zeitintervalle, wie für die abl-behandelten Gruppe verwendet.
  13. Vor der Wiederherstellung der Mäuse, legen Sie die Mäuse auf dem Wasser heizt chirurgische Bett Wärmeverlust und Unterkühlung zu verhindern. Beachten Sie die Aktivität und die Augenlidreflexe der Mäuse bis zur Genesung. Nach The Erholung der Mäuse, beherbergen sie 2-3 pro Käfig.
  14. Nach Abl-Therapie, Biolumineszenz-Bildgebung durchführt, wie in Abschnitt 4, täglich für die ersten 3 Tage und dann an wechselnden Tagen diskutierten die zeitliche bio-Belastung von Infektionen in Mäusen zu überwachen.

4. Biolumineszenz-Bildgebung von Infektionen bei Mäusen

  1. Bild der Mäuse ein Schwachlichtabbildungssystem , das eine verstärkte ladungsgekoppeltes Bauelement - Kamera 19, eine Kamerasteuereinrichtung, eine Probenkammer, und einen Bildprozessor umfasst.
  2. Anesthetize die Mäuse mit einer intraperitonealen Injektion von Ketamin-Xylazin eines Cocktail (100 mg / kg - 20 mg / kg). leicht berühren die Augenlid der Mäuse mit einem Wattestäbchen; ein Fehlen des palpebralen Reflexes schlägt eine geeignete Narkosetiefe.
  3. Starten Sie die Live-Imaging-Software. In der Systemsteuerung, das angezeigt wird, klicken Sie auf Initialisieren. Warten, bis sich die Farbe des Temperatur-Box grün wird, das anzeigt, dass die Temperatur der Stufein der Probenkammer hat 37 ° C erreicht.
  4. Platzieren Sie die Mäuse auf der Bühne (37 ° C) in der Probenkammer des Bildgebungssystems, mit den infizierten Verbrennungen direkt unter der Kamera.
    HINWEIS: Die Biolumineszenz der Bakterien könnte verringern, wenn die Verbrennungen trocken werden. Daher ist es empfehlenswert, bevor die Abbildung der Maus brennt mit PBS zu befeuchten.
  5. In der Systemsteuerung, setzen Sie ein Häkchen neben „Lumineszenz“. Wählen Sie „Automatische Belichtung“, so dass die Belichtungszeit für die Bildgebung wird durch die Live-Imaging-Software auf der Biolumineszenz Intensität optimal angepasst werden.
  6. Wählen Sie "C" aus der "Field of View" Drop-Down-Liste. Wählen Sie die „Scan im mittleren Bereich“ Option die Software bestimmt die Brennweite zu lassen. Setzen Sie ein Häkchen neben Overlay.
  7. Klicken Sie auf „Erfassen“, um das Bild zu erfassen. In der „Bild bearbeiten Etikett“ -Box, klicken Sie auf „OK“; ein „Bildfenster“ und „Toll Palette“ erscheinen.
  8. Set Auto ROI Parameter für die automatische Auswahl.
  9. Quantifizierung der Biolumineszenz - Intensität als relative Lumineszenz - Einheiten (RLU) und zeigt die Biolumineszenz in einer Falschfarbenskala von rosa Bereich (intensivsten) bis blau ( am wenigsten intensiv) 19, 20.
  10. Berechnen der Überlebensfraktion der Bakterien in Maus Verbrennungen an Stellen unterschiedlicher Zeit basierend auf Biolumineszenz Intensitätsanalyse. Der Überlebensanteil von Bakterien zu einem gegebenen Zeitpunkt der Biolumineszenz = Intensität zu diesem Zeitpunkt / die Biolumineszenz gemessene Intensität gemessen unmittelbar vor abl Belichtungs 17.

5. Euthanasie der Mäuse

  1. Die Endpunkte des Experiments sind wie folgt: (a) Auflösung der Infektion, wie durch den Verlust der Biolumineszenz nachgewiesen, wie durch Bildgebung bestimmt; (B) Auftreten von systematische Infektionen, wie durch die Verbreitung von Biolumineszenz außerhalb des verbrannten angegeben sindein; (C) Verlust von ≥15% des Körpergewicht im Vergleich zu normalen altersangepassten Mäusen oder das Leid von Schmerzen und Leiden, wie durch das Fehlen einer Reaktion auf manuelle Stimulation angegeben, Immobilität, die Unfähigkeit, zu essen oder zu trinken. Während der Studie, wenn wir in eine Situation kommen, wo wir nicht sicher sind, ob eine Maus vollständig den Status der moribund erreicht hat, wie nach unserer Definition umrissen, und / oder sind wir nicht sicher, ob wir es einschläfern müssen, werden wir einen CCM Veterinärpersonal kontaktieren für einen Aktionsplan; (D) sonst die Mäuse werden 30 Tage nach dem Beginn der Studie eingeschläfert.
  2. Verlagern die Mäuse in geschlossenen Käfigen speziell für Euthanasie und die Mäuse euthanize von Kohlendioxid (CO 2) komprimiertes Gas in den Käfigen zu liefern.
    1. Öffnen des CO 2 -Tank oder Ventilregler den Gasstrom einzuleiten. Stellen Sie sicher, dass der Regler den richtigen psi liest (Pfund pro Quadratzoll), basierend auf Anweisungen von der Einheit geschrieben, und stellen Sie die Wiedergulator auf den richtigen psi je nach Bedarf, in der Regel nicht höher als 5 psi.
    2. Füllen Sie langsam. Die Strömungsgeschwindigkeit sollte nicht mehr als 30% der Kammer / Käfig Volumen pro min (, für eine Rattenkäfig, ~ 7,5 L / min für eine typische Maus Käfig, ~ 2 L / min) verdrängen.
    3. Wartezeit von ca. 3-5 min für das Tier zu stoppen, zu bewegen oder zu atmen; Die Augen sollten festgelegt und erweitert werden. Ausschalten CO 2 -Tank oder Regulierventil die Strömung von CO 2 zu stoppen.
    4. Stellen Sie sicher, dass das Herz durch das Gefühl der Brust zwischen Daumen und Zeigefinger nicht zu schlagen ist. Stellen Sie sicher, dass es keine Blinkreflex ist der Augapfel durch Berühren.
      1. Wenn es ein Herzschlag oder Lidschlussreflexes ist, wiederholen Sie die Euthanasie Prozess oder eine Schere verwenden, um die Brusthöhle zu öffnen, einen Pneumothorax zu schaffen (das Tier muss vor der Durchführung dieses Verfahrens zu einem toe pinch nicht reagieren).

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Ergebnisse

Die A. baumannii Belastung , die wir verwenden , ist ein klinisches Isolat MDR, wie zuvor berichtete , 12, 17. Der Bakterienstamm wurde Biolumineszenz durch die Transfektion von luxCDABE Opera 11 hergestellt. 1A zeigt die aufeinanderfolgenden Bilder bakterielle Lumineszenz aus einer repräsentativen Maus infizierten brennen mit 5 x 10 6 A. baumannii und...

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Diskussion

Abl ist ein neues Verfahren zur Behandlung von Infektionen. Seit seinem Wirkungsmechanismus von der Chemotherapie völlig anders ist, ist es eher eine Physiotherapie. Das Mittel, das die antimikrobielle Wirkung vermittelt ist blaue Licht-Bestrahlung (400-470 nm). Mit der Entwicklung von blauen LEDs, gewannen wir den Zugang zu einem effektiven und einfachen lichtbasierten antimikrobiellen Ansatz für MDR-Infektionen.

In diesem Protokoll haben wir die Entwicklung eines Mausmodell von burn - Infe...

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde teilweise vom Center for Integration of Medicine and Innovative Technology (CIMIT) im Rahmen des U.S. Army Medical Research Acquisition Activity Cooperative Agreement (CIMIT Nr. 14-1894 bis TD) und den National Institutes of Health (1R21AI109172 bis TD) unterstützt. YW wurde durch ein ASLMS Student Research Grant (BS. S02.15). Wir danken Tayyaba Hasan, PhD am Wellman Center, für ihre Co-Mentorenschaft für YW.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
IVIS PerkinElmer Inc, Waltham, MAIVIS Lumina Series IIIPräklinische in vivo Bildgebung
Leuchtdiode LEDVieLight Inc, Toronto, Kanada 415 nmLichtquelle für Beleuchtung
Leistungs-/EnergiemessgerätThorlabs, Inc., Newton, NJPM100DLichtbestrahlungsstärkedetektor
Maus Charles River Laboratories, Wilmington, MABALB/cAlter 7-8 Wochen, 17-19 g Gewicht
Acinetobacter baumannii  Brooke Army Medical Center, Fort Sam Houston, TXKlinisches IsolatEngineered Luminesscent
Stamm InsulinspritzenFisher Scientific14-826-79BD Lo-Dose U-100 Insulinspritzen zur
Injektion NatriumchloridFisher Scientific7210160,9% Natriumchloridphosphat
gepufferte Kochsalzlösung, 1x LösungFisher ScientificBP24384 Ein Standard-Phosphatpuffer, der in vielen biomolekularen Verfahren verwendet wird
Gehirn Herz InfusionFisher ScientificB11059Bakterienkulturmedium
Falcon 15 mL Konische ZentrifugenröhrchenFisher Scientific14-959-70CFür Bakteriensuspensionszentrifuge
Benchtop Inkubierte Orbital ShakersLaboratory Supply Network, Inc, Atkinson, NH Incu-Shaker MiniFür die Kultivierung von
Fisher Scientific22-363-605   Zum Verschmieren von bakteriellem Inoclum auf der Brandoberfläche von Mäusen
Fisher Scientific Redi-Tip Pipettenspitzen, 1-200 & Mikro; LFisher Scientific02-707-502Pipettenspitzen
Thermo Scientific Sorvall Legend X1 ZentrifugeFisher Scientific75-004-220Für die Trennung von Bakteriensuspensionen
MessingblockKleinteile, Inc., Miami, FL10 mm x 10 mm Zur Entstehung von Verbrennungen bei Mäusen
Extreme Dragon PBI/Kevlar High-Heat HandschuheSuperior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NYPBI83514 Hitzebeständige Handschuhe
Greiner SchalenSigma-Aldrich Co. LLCP5112-740EA35 mm &mal; 10 mm
Corning Digital HeizplatteCole-Parmer Instrument Company, LLCUX-84301-6510" x 10", 220 VAC, zum Kochen von Wasser 
Maus/Ratte Thin Line Wasserbeheiztes OperationsbettE-Z SystemsEZ-211Verhindert Wärmeverlust und Unterkühlung während der
Operation TierarztsalbeS& K Pharma, GmbHKerato Biciron 5%, Augensalbe Augensalbezur Vorbeugung von Augentrockenheit
Bakterien-Impfschleifen

Referenzen

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