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Wir demonstrieren eine nützliche Methode zur Quantifizierung der Autophosphorylierung von gereinigten bakteriellen Histidinkinasen. Histidinkinasen sind bekannt für ihre Beteiligung an der Zweikomponenten-Signaltransduktion, einem allgegenwärtigen System, durch das Bakterien Umweltreize wahrnehmen und darauf reagieren. Die Zweikomponenten-Signalübertragung zeichnet sich durch die Autophosphorylierung einer Histidinkinase aus, gefolgt von einem Phosphotransfer zur Empfängerdomäne eines Antwortregulatorproteins, der schließlich zu einer Ausgangsantwort führt. Die Autophosphorylierung der Histidinkinase reagiert auf das Vorhandensein eines verwandten Umweltreizes, wodurch Bakterien ein Mittel erhalten, Veränderungen in der Umgebung zu erkennen und darauf zu reagieren. Trotz ihrer Bedeutung für die bakterielle Biologie sind Histidinkinasen aufgrund der inhärenten Labilität von Phosphohistidin nach wie vor wenig verstanden. Herkömmliche Methoden zur Untersuchung dieser Proteine, wie z. B. die SDS-PAGE-Autoradiographie, weisen erhebliche Mängel auf. Wir haben einen Nitrocellulose-Bindungsassay entwickelt, der zur Charakterisierung von Histidinkinasen verwendet werden kann. Das Protokoll für diesen Assay ist einfach und leicht durchzuführen. Unsere Methode hat einen höheren Durchsatz, ist weniger zeitaufwändig und bietet einen größeren Dynamikbereich als die SDS-PAGE-Autoradiographie.