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DOI:

10.3791/55183

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9. Februar 2017

 ,  , 
1Biomedical Engineering, Tulane University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Angiogenese beinhaltet Interaktionen zwischen mehreren Zellen und mehreren Systemen, die in einer physiologisch relevanten Umgebung untersucht werden müssen. Das Ziel dieser Studie ist es, die Fähigkeit des Rattenmesenterienkulturmodells zu demonstrieren, Zeitraffervergleiche von intakten mikrovaskulären Netzwerken während der Angiogenese durchzuführen.

Zusammenfassung

Angiogenesis, definiert als das Wachstum neuer Blutgefäße aus bestehenden Gefäßen beinhaltet Endothelzellen, Perizyten, glatte Muskelzellen, Immunzellen und die Koordination mit der Lymphgefäße und Nerven. Die Multi-Zelle, erfordern Multi-System-Interaktionen, die Untersuchung der Angiogenese in einem physiologisch relevanten Umfeld. Während also die Verwendung von in vitro-Zellkulturmodelle mechanistische Erkenntnisse zur Verfügung gestellt haben, eine gemeinsame Kritik ist , dass sie rekapitulieren nicht die Komplexität , die mit einer mikrovaskulären Netzwerk verbunden. Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Fähigkeit zu demonstrieren, Zeitraffer-Vergleiche von intakten mikrovaskuläre Netzwerke vor und nach der Angiogenese Stimulation in kultivierten Ratte Gekröse Gewebe zu machen. Kultivierte Gewebe enthalten mikrovaskuläre Netzwerke, die ihre Hierarchie pflegen. Immunhistochemischen Markierung bestätigt das Vorhandensein von Endothelzellen, glatten Muskelzellen, Perizyten, Blutgefäße und Lymphgefäße. In einemddition, Etikettieren Gewebe mit BSI-Lektin ermöglicht Zeitraffer-Vergleich von lokalen Netzregionen vor und nach dem Serum oder Wachstumsfaktor-Stimulation durch erhöhte Kapillare sprießen und Gefäßdichte gekennzeichnet. Im Vergleich zu herkömmlichen Zellkulturmodelle, stellt dieses Verfahren ein Werkzeug für die Endothel-Zelllinie Studien und Gewebe-spezifische angiogene Arzneimittel Auswertung in physiologisch relevanten mikrovaskuläre Netzwerke.

Einleitung

Die mikrovaskuläre Netzwerk Wachstum und Umbau sind gemeinsame Nenner für die Gewebefunktion, Wundheilung, und mehrere Pathologien und ein Schlüsselprozess ist die Angiogenese, definiert als das Wachstum neuer Blutgefäße aus bestehenden 1, 2. Für das Tissue Engineering neue Schiffe oder angiogenen Therapien entwerfen, das Verständnis der Bedeutung der zellulären Dynamik an der Angiogenese beteiligt ist kritisch. Jedoch ist dieses Verfahren komplex. Es kann an spezifischen Stellen innerhalb einer mikrovaskulären Netzwerk variieren und mehrere Zelltypen (zB endothelialen Zellen, glatten Muskelzellen, Perizyten, Makrophagen, Stammzellen) beinhaltet und mehrere Systeme (lymphatischen Netze und neuronale Netze). Obwohl in vitro Modellen enorm , um die Beziehung zwischen verschiedenen Zellen beigetragen haben , bei der Angiogenese 3, deren physiologische Relevanz beteiligt Prüfung kann aufgrund thei untergraben begrenzter Komplexität r und die Tatsache , dass sie eine in vivo - Szenario nicht genau reflektieren. Um diese Einschränkungen zu überwinden, dreidimensionale Kultursysteme 3, ex vivo - Gewebemodelle 4, mikrofluidische Systeme 5, 6 und Rechenmodelle 7 wurden in den letzten Jahren entwickelt und eingeführt. Es besteht jedoch immer noch ein Bedarf für ein Modell mit Zeitraffer Fähigkeit zur Angiogenese in intakten mikrovaskulären Netzwerke ex vivo zu untersuchen. Der Aufbau neuer Zeitraffer-Modelle für die Angiogenese-Studien mit diesem Grad an Komplexität wird ein unschätzbares Werkzeug zur Verfügung stellen, die zugrunde liegenden Mechanismen regulieren die Angiogenese und zur Verbesserung der Therapien zu verstehen.

Ein mögliches Modell, das die Ex - vivo - Untersuchung der Angiogenese in einem intakten mikrovaskulären Netzwerk ermöglicht , ist die Kulturmodell Ratte Gekröse> 8. In einer neueren Arbeit haben wir gezeigt, dass Blut-und lymphatischen mikrovaskuläre Netzwerke nach Kultur lebensfähig bleiben. funktionellen pericyte-Endothel-Interaktionen zu untersuchen, Blut-und lymphatischen endothelialen Zellverbindungen und Zeitraffer-Bildgebung Noch wichtiger ist, kann die Ratte Gekröse Kulturmodell verwendet werden. Das Ziel dieser Arbeit ist unser Protokoll für den Zeitraffer-Bildgebungsverfahren bereitzustellen. Unsere repräsentative Ergebnisse dokumentieren die mehrere Zelltypen, die mit Serum nach der Stimulation der Angiogenese lebensfähig bleiben und bieten Beispiele für die Verwendung dieser Methode für gewebespezifische angiogene Antworten sowie Endothelzellen Tracking-Studien zu quantifizieren.

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Protokoll

Alle Tierversuche und Verfahren wurden von der Tulane University Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) zugelassen.

1. Chirurgisches Verfahren einrichten

  1. Autoklav Instrumente, chirurgische Versorgung und Kultur liefert vor der Operation. Chirurgische Versorgung für jede Ratte umfassen: 1 Tuch, 1 drapieren mit vorgeschnittenen Loch (0,5 Zoll x 1,5 Zoll) in der Mitte, Gazekompressen und 1 saugfähige Unterlage. Chirurgische Instrumente umfassen: 1 Skalpell mit einer Reihe 10 Klinge, 2 Paar Pinzette, und ein Paar von einer feinen Schere. Kultur Lieferungen umfassen: 1 Tuch, 1 Pinzette und vorbereitet 6-Well-Platte Einsätze mit Polycarbonat-Filtern.
  2. Sterilisieren eine Plexiglas-Plattform, eine chirurgische Bühne und eine chirurgische Benchtop Raum mit 70% Ethanol. Halten Sie die OP-Stufe in einer sterilen Schale bis zum Gebrauch.
    1. Erstellen Sie eine chirurgische Bühne durch einen etwa 2 in von 1 in Loch in der Mitte einer 100 mm Kulturschale zu bohren. Als nächstes verwenden Schmirgelpapier glättenScharfe Kanten und eine Schicht aus Silikonkleber auf die Kanten des Lochs fügen Sie eine erhabene Oberfläche für die Gewebe zu schaffen.
    2. Alternativ entwerfen die chirurgische Phase CAD - Software und von 3-D - Druck (Abbildung 1).
  3. Legen Sie eine sterile saugfähige Unterlage nach unten und legen ein Plexiglas-Plattform oben drauf. Legen Sie das Tuch, ohne ein vorgeschnittenes Loch, über eine beheizte Pad neben dem absorbierenden underpad.
  4. Pre-warmer steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS), Medien und Kochsalzlösung auf 37 ° C. Ort Medien und PBS in getrennten Kulturschalen oben auf dem Heizkissen und Stelle saline in einem 50 ml konischen Röhrchen neben der chirurgischen Einrichtung.
  5. Sicherstellen, dass alle Pakete vor dem Beginn der Operation geöffnet werden sterile Handhabung aller Materialien zu gewährleisten. Eine vollständige Liste der gemeinsamen Werkzeuge in diesem Verfahren verwendet werden, in der aufgelistet Tabelle der spezifischen chirurgischen Materialien und Werkzeuge.

2. Mesentery Tissue Ernte

  1. Verwenden erwachsenen männlichen Wistar-Ratten (350 ± 25 g; 6 - 8 Wochen alt). Andere Stämme und Alter der Ratten kann ersetzt werden.
  2. Anästhesieren die Ratte über eine intramuskuläre Injektion von Ketamin (80 mg / kg Körpergewicht) und Xylazin (8 mg / kg Körpergewicht). Bestätigen Sie die Ratte unter Narkose ist zwischen den Zehen durch Kneifen für eine Reflexantwort zu überprüfen; sollte es keine geben. Präemptive Analgesie für dieses Terminal Verfahren ist nicht erforderlich.
  3. Rasieren Sie den Bauchbereich und entfernen Sie restlichen Haare mit Haarentfernungs-Creme. Wischbauchhaut zweimal mit 70% igem Isopropylalkohol gefolgt von Povidon-Iod. Für die Wischtücher in der Mitte der Operationsstelle beginnen und so überlappen, um keine Bereiche in einer kreisförmigen Weise nach außen des vorbereiteten Bereichs bewegen, die zuvor mit dem gleichen Stück steriler Gaze oder steriles Wattestäbchen geschrubbt der Chirurg sollte. Dann übertragen Tier zum sterilen OP-Setup und legen oben auf dem Plexiglas platbilden.
  4. Mit einem Skalpell, machen Sie eine 0,75 in - 1,25 in Einschnitt im Darm ab dem 1. in unterhalb des Brustbeins. Achten Sie darauf, nicht den Darm oder Gekröse (1 Schicht der Haut, 1 Schicht von Bindegewebe und 1 Muskelschicht) zu durchstechen.
  5. Legen Sie ein Tuch mit einem vorgeschnittenen Loch über den Einschnitt und legen Sie eine sterile OP-Bühne oben auf dem Tuch. Sicherstellen, dass die Öffnung steht im Einklang mit dem Einschnitt. Verwenden Sie sterile Wattestäbchen zu lokalisieren und das Ileum durch die chirurgische Bühnenöffnung herausziehen.
  6. Ziehen Sie 6 - 8 mesenterialen Fenster , durch die Bühne mit Wattestäbchen, und darauf achten , nicht die Fenster zu berühren (Abbildung 1). Gewebe werden typischerweise aus dem Ileum Bereich des Dünndarms ausgehend in der Nähe des Blinddarms geerntet. Halten Sie ausgesetzt Gewebe feucht mit erwärmter steriler Kochsalzlösung als eine sterile Spritze erforderlich unter Verwendung der Lösung tropft.
  7. Euthanize die Ratte über Intrakardial von Pentobarbital - Natrium (0,2 ml pro Ratte). Vor mir Entfernensenteric Fenster, sicherstellen, dass die Ratte durch Palpation des Herzens eingeschläfert wird; es sollte kein Impuls sein.
  8. Entfernen gewünschte Gekröse Gewebe durch Pinzette mit dem Fettpolster und einer feinen Schere zu greifen, das Fenster zu schneiden. Lassen Sie eine Grenze von Fett (2 mm) rund um das Fenster. Waschen Sie Gewebe einmal in erwärmte sterile PBS und einmal in den Medien.
  9. Zurück exteriorisierten Ileum in die Bauchhöhle und entsorgen Tier gemäß gültiger Richtlinien.

3. Mesentery Gewebekultur für Zeitrafferstudien

  1. Transfer autoklaviert Kultur liefert und Gewebe zu einer sterilen Laminar-Flow-Haube (siehe Abschnitt 1.1).
  2. Verwenden einer Pinzette jedes Gewebe auf einem Polycarbonat-Filtermembran zu übertragen. Schnappen Gewebe durch das Fettpolster zu vermeiden, dass die Gefäße schädigen.
  3. Schnell verbreitete das Gewebe, das die Fettpolster verwenden, wobei darauf geachtet, das Fenster nicht zu berühren. Kehren Sie die Einlage mit dem Gewebe in den Boden einer 6-Well - Platte geben und mit 3 ml Medium (Abbildung 1 ). Typische Medien für dieses Verfahren verwendet wird, umfasst Minimum Essential Medium (MEM) mit 1% Penicillin Streptomycin (PenStrep) und 10% fötalem Rinderserum (FBS). Medien können mit anderen Seren und / oder Wachstumsfaktoren, die Angiogenese zu stimulieren, ergänzt werden.
  4. Wiederholen Sie die Schritte 3,2-3,3 für jedes Gewebe und Kultur in Standard - Inkubator Bedingungen (5% CO 2, 37 ° C) für bis zu 5 Tage.

4. Time-Lapse-Imaging von Mesentery Tissue

  1. Am Tag der Bildgebung, ergänzen die Medien in jeder Vertiefung mit konjugierten BSI-Lektin und unter Standardkulturbedingungen für 30 min inkubiert. Waschen Sie Gewebe zweimal mit Lektin-freien Medien. BSI-Lektin Fleck auf dem Gekröse Gewebe für bis zu 3 Tage in der Kultur sichtbar bleiben.
  2. Übertragen Sie die Platte zu einem Mikroskoptisch. Identifizieren Sie Blut- und Lymphgefäße auf der Grundlage ihrer Morphologie und Netzstruktur.
  3. Suchen Sie eine gewünschte Netzbereich auf jedem Gewebe und nehmen Bilder. Beachten Sie die BildgebungLage die gleiche Region zu gewährleisten wird für nachfolgende Bilder aufgenommen werden. Wenn eine motorisierte Bühne verwenden, dokumentieren die Koordinaten.
  4. Zurück Gewebe in den Inkubator und weiter zu Kultur, bis der gewünschte Endpunkt. Wiederholen Sie die Schritte 4,1-4,3 je nach Bedarf, je nach gewünschten experimentellen Zeitpunkten.

5. Gewebeimmunmarkierung

  1. BSI-Lektin Labeling
    1. Inkubieren Gewebe für 30 min bei 37 ° C mit 1.40 FITC-konjugiertem Lektin in Medien (2,5 ml Antikörperlösung pro Well in 6-Well-Platte) durch zwei Spülungen mit Medien folgt. Für Spülungen, fügen Sie Medien und dann sofort zu ersetzen.
  2. Live / Dead Labeling
    1. Inkubieren Gewebe für 10 min bei 37 ° C mit 1: 500 2 mM Ethidium Homodimer-1 und 1: 500 1 mM Calcein AM in Medium (2,5 ml Antikörperlösung pro Well in 6-Well-Platte) durch zwei Spülungen mit Medien folgt.
  3. BSI-Lektin / NG2 Labeling
    1. Spread Gewebe auf einem Mikroskop geschobene (1 - 2 Gewebe / Folie) und trocknen lassen. Entfernen Sie überschüssiges Fett mit einem Skalpell durch Drücken Sie fest nach unten um das Fett zu auszuschneiden.
    2. Fix Gewebe in kaltem Methanol 30 Minuten bei -20 ° C. Waschen Gewebe mit PBS (3 x 10 min).
    3. Für die primäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 100 Kaninchen-polyklonalen Antikörper NG2 und 5% normalem Ziegenserum (NGS). Waschen Gewebe mit PBS (3 x 10 min).
    4. Für sekundäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 100 goat anti-rabbit CY2-konjugiertem Antikörper (GAR-CY2) und 5% NGS. Waschen Gewebe mit PBS (3 x 10 min).
    5. Inkubieren Gewebe für 30 min bei Raumtemperatur mit 01.40 FITC-konjugiertem Lektin in PBS, gefolgt von zwei Spülungen mit PBS. Für Spülungen, fügen PBS und dann sofort zu ersetzen.
    6. Um die Folien montieren, decken Gewebe mit 50:50 PBS und Glycerin-Lösung und Eindecken an der Spitze. Verschließen Sie die Dia Kanten mit Nagellack.
  4. LYVE-1 / PECAM Labeling
    1. Verbreiten Sie Gewebe auf einem Objektträger (1 - 2 Gewebe / Folie) und trocknen lassen. Entfernen Sie überschüssiges Fett mit einem Skalpell durch Drücken Sie fest nach unten um das Fett zu auszuschneiden.
    2. Fix Gewebe in kaltem Methanol 30 Minuten bei -20 ° C. Waschen Gewebe mit PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    3. Für die primäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 200 monoclonalen Maus-biotinyliertem CD31-Antikörper und 1: 100 Kaninchen polyklonalen LYVE-1-Antikörper in PBS + 0,1% Saponin + 2% Rinderserumalbumin (BSA) + 5% NGS . Waschen Gewebe mit PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    4. Für sekundäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 500 CY3-konjugiertem Streptavidin-Antikörper und 1: 100 GAR-CY2 in PBS + 0,1% Saponin + 2% BSA + 5% NGS. Waschen Gewebe mit PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    5. Zur Montage Träger, Deckgewebe mit 50:50 PBS und Glycerin-Lösung und setzen Sie ein Deckglas an der Spitze. Verschließen Sie die Dia Kanten mit Nagellack.
  5. BrdU / BSI-Lektin Labeling
    1. 1 mg / ml BrdU auf Medien und Gewebemedien mit BrdU-Lösung zu ersetzen. bei 37 ° C für 2 h inkubiert.
    2. Verbreiten Sie Gewebe auf einem Objektträger (1 - 2 Gewebe / Folie) und trocknen lassen. Entfernen Sie überschüssiges Fett mit einem Skalpell durch Drücken Sie fest nach unten um das Fett zu auszuschneiden.
    3. Fix Gewebe in kaltem Methanol 30 Minuten bei -20 ° C. Waschen Gewebe mit PBS (3 x 10 min).
    4. Gewebe DNA in 2 M HCl für 1 h bei 37 ° C denaturieren. Waschen Gewebe in PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    5. Für die primäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 100 monoklonaler Maus-anti-BrdU in PBS + 0,1% Saponin + 2% BSA + 5% NGS. Waschen Gewebe mit PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    6. Für sekundäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 100 Ziegen- anti-Maus-Cy3-konjugiertem Antikörper (GAM-Cy3) in PBS + 0,1% Saponin + 2% BSA + 5% NGS. Waschen Gewebe mit PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    7. Inkubieren Gewebe für 30 min bei Raumtemperatur mit 01.40 FITC-konjugiertem Lektin in PBS, gefolgt von zwei Spülungen mit PBS.
    8. Zur Montage Träger, Deckgewebe mit 50:50 PBS und Glycerin-Lösung und Eindecken an der Spitze. Verschließen Sie die Dia Kanten mit Nagellack.
  6. BSI-Lektin / CD11b Kennzeichnung
    1. Verbreiten Sie Gewebe auf einem Objektträger (1 - 2 Gewebe / Folie) und trocknen lassen. Entfernen Sie überschüssiges Fett mit einem Skalpell durch Drücken Sie fest nach unten um das Fett zu auszuschneiden.
    2. Fix Gewebe in kaltem Methanol 30 Minuten bei -20 ° C. Waschen Gewebe mit PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    3. Für die primäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 100-Maus-anti-Ratten-CD11b in PBS + 0,1% Saponin + 2% BSA + 5% NGS. Waschen Gewebe mit PBS + 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    4. Für sekundäre Antikörpermarkierung inkubieren Gewebe für 1 h bei Raumtemperatur mit 1: 100 GAM-Cy3 in PBS + 0,1% Saponin + 2% BSA + 5% NGS. Waschen Sie Gewebe mit PBS+ 0,1% Saponin (3 x 10 min).
    5. Inkubieren Gewebe für 30 min bei Raumtemperatur mit 01.40 FITC-konjugiertem Lektin in PBS, gefolgt von zwei Spülungen mit PBS.
    6. Zur Montage Träger, Deckgewebe mit 50:50 PBS und Glycerin-Lösung und Eindecken an der Spitze. Verschließen Sie die Dia Kanten mit Nagellack.

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Ergebnisse

Nach 3 Tagen in Kultur Gewebe wurden mit einer Live / Dead Lebensfähigkeit / Zytotoxizität Kit markiert , um die Lebensfähigkeit des microvasculature bei der Ratte Gekröse Kulturmodell (Abbildung 2A) zu demonstrieren. Die Mehrzahl der Zellen, die in der Gekröse lebensfähig blieben in der Kultur, in der Endothel-Zellen identifiziert wurden in mikrovaskulären Segmente auf ihren Standort. Endothelzellproliferation wurde auch von Lektin / BrdU - Markierung (2D)

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Diskussion

Dieses Protokoll dokumentiert ein Verfahren zur Verwendung der Ratte Gekröse Kulturmodell als Ex - vivo - Werkzeug für Zeitraffer-Bildgebung von mikrovaskulären Netzwerk Wachstum. Frühere Arbeiten in unserem Labor wurde für 1) Angiogenese 8, 2) Lymphangiogenese 8, 3) pericyte-Endothel-Interaktionen 8, die Verwendung unseres Modells etabliert und 4) anti-angiogenen Drogen - Test - 9. Die Fähigkeit zum Abbilde...

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Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde unterstützt durch den National Institutes of Health Grant 5-P20GM103629 an WLM und das Tulane Center for Aging. Wir danken Matthew Nice für seine Hilfe bei der Bearbeitung des Protokolltextes.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
AbdecktuchCardinal Health401212" x 12" Bio-Shield Regular Sterilization Wraps
SkalpellgriffRoboz Chirurgisches InstrumentRS-9843Skalpellgriff, #3; Fest; 4" Länge
sterile chirurgische KlingeCincinnati Surgical0110Edelstahl; Größe 10
Kulturschale (60 mm)Thermo Scientific13018110/Sleeve
Graefe Pinzette (gebogene Pinzette)Roboz Chirurgisches InstrumentRS-5135Mikro-Präparierzange; Gezahnt; Leichte Kurve; 0,8 mm Spitzenbreite; 4" Länge
Graefe Pinzette (gerade Pinzette)Roboz Chirurgisches InstrumentRS-5130Mikro-Präparierzange; gezackt, gerade; 0,8 mm Spitzenbreite; 4" Länge
Noyes MikroschereRoboz Chirurgisches InstrumentRS-5677Noyes Mikro-Präparierfederschere;
gerade, scharf-stumpfe Spitzen; 13 mm Schneide; 0,25 mm Spitzenbreite, 4 1/2" Gesamtlänge
MullpadsFisherBrand13-761-52Unsterile Baumwoll-Mullschwämme; 4" x 4" 12-lagige
Applikatoren mit BaumwolltippFisherBrand23-400-1246" Länge; Holzschaft; Nur zum Einmalgebrauch
6-Well-PlatteFisher Scientific08-772-49mit flachem Boden und Deckel mit geringer Verdunstung; Styropor; Pyrogenfreie
Spritze 5 mLFisher Scientific14-829-45Luer-Lok Spitze
Sterile SchüsselMedical Action Industries Inc.0123232 oz. Peel-Beutel; Blau; Sterile
Einweg-6-Well-Platteneinsätze (CellCrown-Einsätze)SIGMAZ681792-3EA6-Well-Platteneinsätze; Unsterile
Polycarbonat-FiltermembranSIGMATMTP04700Isoporen-Membranfilter; Polykarbonat; Hydrophil; 5.0  &Mikro; m, 47  mm, White Plain
Name<>CompanyKatalognummer<strong>Kommentare/Beschreibung
BeuthanasiaSchering-Plough Animal Health Corp. Union (Bestellt bei MWI Veterinary Supply)MWI #: 011168Wirkstoff: Pro 100 ml 390 mg Pentobarbital-Natrium, 50 mg Phenytoin-Natrium
KetaminFort Dodge Animal Health (Bestellt bei MWI Veterinary Supply)MWI #: 000680Kateset 100 mg/ml
XylazinLLOYD. Inc. (Bestellt bei MWI Veterinary Supply)MWI #: 000680Anased 100 mg/ml
KochsalzlösungBaxter2F7122
PBSInvitrogen14040-133
MEMInvitrogen11095080
PenStrepInvitrogen15140-122
FBSInvitrogen16000-044
BSAJackson ImmunoResearch001-000-162
Saponin SIGMAS7900-100G
IsopropylalkoholFisher ScientificS25372
Povidon-JodOperand82-226
SalzsäureSIGMA320331
MethanolFisher Scientific67-56-1
GlycerinFisher Scientific56-81-5
FITC-konjugiert LectinSIGMAL9381-2MG
Anti-NG2 Chondroitinsulfat Proteoglykan AntikörperSIGMAAB5320
PECAM (CD31) AntikörperBD Biosciences555026
LYVE-1 AntikörperAngioBio Co.11-034
Ziegen-Anti-Kaninchen-Cy2-konjugierter AntikörperJackson ImmunoResearch111-585-144
Ziegen-Anti-Maus-Cy3-konjugierter AntikörperJackson ImmunoResearch115-227-003
Streptavidin-Cy3-konjugierter AntikörperJackson ImmunoResearch016-160-084
Lebend-/Tot-Lebensfähigkeits-/ZytotoxizitätskitInvitrogenL3224
Normales Ziegenserum Jackson ImmunoResearch005-000-121
5-Brom-2'-DesoxyuridinSIGMAB5002
Monoklonales Maus-Anti-Bromodeoxyuridin                                              Klon Bu20aDakoM074401-8
Maus Anti-Ratte CD11b AbD SerotecMCA275R
sterile

Referenzen

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Schlagwörter

Ex vivo KulturRattenmesenterium GewebeKapillarsprossungEndothelzellproliferationBSI Lektin MarkierungBildgebung von Lymphgef enangiogene ReaktionFluoreszenzmikroskopie
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