Entwicklung von<em&gt; Metarhizium anisopliae</em&gt; Als Mycoinsektizid: Von der Isolation bis zur Field Performance

Zusammenfassung

Hier berichten wir über die verschiedenen Phasen der wissensbasierten Entwicklung eines wirksamen Mycoinsektizids, einschließlich der Isolierung, Identifizierung, Screening und Auswahl des "best-fit" entomopathogenen Pilzes, Metarhizium anisopliae , zur Bekämpfung von Insektenschädlingen in der Landwirtschaft .

Zusammenfassung

Ein wichtiges Anliegen bei der Entwicklung von kommerziellen Mycoinsektiziden ist die Abtötungsgeschwindigkeit im Vergleich zu der von chemischen Insektiziden. Daher sind Isolation und Screening für die Auswahl eines schnell wirkenden, hochgradig virulenten entomopathogenen Pilzes wichtige Schritte. Entomopathogene Pilze wie Metarhizium, Beauveria und Nomurea , die durch Kontakt wirken, eignen sich besser als Bacillus thuringiensis oder Nukleopolyhedrosis Virus (NPV), die von der Insektenschädlinge eingenommen werden müssen. In der vorliegenden Arbeit isolierten wir 68 Metarhiziumstämme von infizierten Insekten unter Verwendung einer Bodenverdünnung und Ködermethode. Die Isolate wurden durch die Amplifikation und Sequenzierung der ITS1-5.8S-ITS2- und 26S-rDNA-Region identifiziert. Der am meisten virulenten Stamm von Metarhizium anisopliae wurde basierend auf der medianen letalen Konzentration (LC ₅₀ ) und der Zeit (LT ₅₀ ), die in Insekten-Bioassays gegen III-Instar-Larven von Helicoverpa armigera erhalten wurde, ausgewählt.Die Massenproduktion von Sporen durch den ausgewählten Stamm wurde mit Festkörperfermentation (SSF) unter Verwendung von Reis als Substrat für 14 Tage durchgeführt. Sporen wurden aus der sporulierten Biomasse mit 0,1% Tween-80 extrahiert und verschiedene Formulierungen der Sporen wurden hergestellt. Feldversuche der Formulierungen zur Kontrolle eines H. armigera- Befalles in Taubenerbsen wurden durch randomisierte Blockgestaltung durchgeführt. Die mit Öl und wässrigen Formulierungen erhaltenen Befallkontrollniveaus (78,0% bzw. 70,9%) waren besser als die mit chemischen Pestiziden erhaltenen 63,4%

Einleitung

Von der Einführung von Organochlor-Pestiziden in den 1940er Jahren in Indien hat die Verwendung von Pestiziden viele Falten ¹ , mit Ernte-Schädlinge noch kostet Milliarden von Rupien ² jährlich in Bezug auf Ertragsverlust in der landwirtschaftlichen Produktion. Die weit verbreitete und nicht-vernünftige Verwendung von synthetischen Pestiziden ist eine kontinuierliche Bedrohung für die Umwelt und die menschliche Gesundheit ¹ . Die wahllose Verwendung von Pestiziden führt zu Rückständen im Boden und zur Erschöpfung von natürlichen Schädlingsbekämpfern. Es dient auch als ein mächtiger Selektio....

Protokoll

1. Isolierung von entomopathogenen Pilzen

1. Bodenverdünnungsmethode
   1. Sammeln Sie die Bodenproben und mycosed Insekten aus verschiedenen Erntefeldern ( Tabelle 1 ). Isolieren Sie die entomopathogenen Pilze aus Bodenproben mit dem Bodenverdünnungs-Plattierungsverfahren ⁸ .
      Anmerkung: In dieser Studie wurden Proben von der Pune (18 ° 31'13''N; 73 ° 51'24''E) und Buldhana (19 ° 58'36''N 76 ° 30'30''E gesammelt ) Bezirke, Maharashtra, Indien.
   2. 10 g jeder Bodenprobe wiegen und separat zu 90 ml sterilem 0,1% (w / v) Tween-80 zugeben.

Ergebnisse

Während der Untersuchungen wurden verschiedene Stämme von Metarhizium, Beauveria und Nomuraea durch verschiedene Isolationsmethoden isoliert (Daten nicht gezeigt) ^{6 , 14} Da Metarhizium- Stämme bei der Kontrolle von H. armigera , einem schrecklichen Schädling in den Hülsen ^{6 , 14,} wirksamer waren Wurden weitere Isolierungen zur Isolierung von Metarhiziumstä.......

Diskussion

Während der 1880er Jahre wurde der erste Versuch unternommen, Metarhizium zu benutzen, um den Skarabäuskäfer, Anisoplia austriaca und die Zuckerrüben curculio, Cleonis punctiventris ^{21 zu} kontrollieren . In diesem Protokoll war eine der Voraussetzungen, einen virulenten Stamm entweder vom Boden oder von infizierten Insekten zu isolieren. Tatsächlich haben andere Parameter wie LC ₅₀ , LT ₅₀ und ST ₅₀ wesentlich zur Kostenwi.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Agar	Hi-Media	RM666	Reagenz
Ammoniumsulfat	Thomas Baker	11645
	Angewandtes Biosystem	ABI-Prisma 3730	Instrument
DNA-Verordnungskit	Qiagen	69104	Reagenz
Dodine	Sigma	45466
	Qiagen	28604	Reagenz
Glukose	Hi-Media	GRM077	Reagenz
Knapsac Sparyer	Kaypee	HY-16L (1004)	Instrument
Pepton	Hi-Media	RM006-500G	Reagenz
Polypropylen-Fläschchen & nbsp;	Laxbro	SV-50
Kartoffel-Dextrose-Agar (PDA)	Hi-Media	M096-500G	Reagenz
Tween-80	SRL	28940	Reagenz
Ultra-Low-Volume-Sparyer	Matabi	INSECDISK	Instrument
Einhorn-Beutel	Unicorn	UP-140024-SMB	Autoklaviertasche für SSF
Hefeextrakt	Hi-Media	RM027-500G	Reagenz
Chromas 2.1			Software

Reagenz-DNA-Analysator Reagenz-Gel-Extraktionskit aus Kunststoff