Summary
Este trabalho apresenta um protocolo para a preparação de espécimes de hemi-laringe facilitando uma visão multidimensional da vibração da prega vocal, a fim de investigar vários aspectos biofísicos da produção de voz em seres humanos e mamíferos não-humanos.
Abstract
A voz dos seres humanos e maioria dos mamíferos não-humanos é gerada na laringe através da oscilação auto-sustentável das pregas vocais. Documentação visual direta da vibração da prega vocal é um desafio, especialmente em mamíferos não-humanos. Como alternativa, laringe extirpado experimentos fornecem a oportunidade de investigar a vibração da prega vocal em condições físicas e fisiológicas controladas. No entanto, o uso de uma laringe completa apenas fornece uma vista superior das pregas vocais, excluindo partes cruciais das estruturas oscilantes de observação durante sua interação com forças aerodinâmicas. Esta limitação pode ser superada através da utilização de uma instalação de hemi-laringe onde metade da laringe é meados-essas removido, fornecendo um superior e uma vista lateral da prega vocal restante durante oscilação auto-sustentado.
Aqui, um guia passo a passo para a preparação anatômica das estruturas do hemi-laríngeo e sua montagem na bancada do laboratório é dado. Fonação exemplar da preparação hemi-laringe é documentada com dados de vídeo de alta velocidade, capturados por duas câmeras sincronizadas (vistas superiores e laterais), apresentando movimento de prega vocal tridimensional e variáveis no tempo correspondente a área de contacto. A documentação da instalação do hemi-laringe nesta publicação irá facilitar a aplicação e repetibilidade confiável em pesquisa experimental, fornecendo os cientistas de voz com o potencial para entender melhor a biomecânica da produção da voz.
Introduction
Voz é geralmente criado por vibração tecido laríngeo (principalmente as pregas vocais), que converte um fluxo de ar constante, fornecido pelos pulmões, uma sequência de pulsos de fluxo de ar. A forma de onda de pressão acústica (ou seja, o som principal) emergindo esta sequência de pulsos de fluxo acusticamente excita o trato vocal que filtra-los, e o som resultante é radiado da boca e (até certo ponto) o nariz1 . A composição espectral do som gerado é em grande parte influenciada pela qualidade da vibração da prega vocal, regulada por interações com o fluxo de ar traqueal2e biomecânica da laringe. Tanto em uma clínica e um contexto de pesquisa, documentação e avaliação da vibração da prega vocal é assim de maior interesse ao estudar a produção da voz.
Em humanos, direta investigação endoscópica da laringe durante a produção do som na vivo é um desafio, e é praticamente impossível nos mamíferos não-humanos, tendo em conta os meios tecnológicos atuais. Portanto e em ordem de garantia cuidadosamente controlada física e/ou fisiológicas limite condições experimentais, a utilização de extirpado larynges3,4 é em muitos casos uma substituição adequada para a investigação de in vivo mecanismos de produção de voz.
Vibração da prega vocal é um fenómeno tridimensional complexo5. Enquanto métodos de investigação convencionais como endoscopia laríngea (na vivo) ou laringe extirpado preparações geralmente fornecem somente uma vista superior da vibração de pregas vocais6, eles não permitem a completa análise tridimensional de movimento da prega vocal. Em particular, na vista superior as margens inferiores (caudais) das pregas vocais são invisíveis durante uma parte importante do ciclo vibratório. Isto é devido ao atraso de fase entre a inferior (caudal) e a borda superior (cranial) das pregas vocais, um fenômeno que é normalmente visto durante a oscilação de prega vocal5. Como evidência empírica direta para fazer backup de resultados de modelos matemáticos e físicos é escassa, conhecimento da geometria e do movimento o vocal inferior dobre borda7e, portanto, a geometria do canal subglottal8,9 , 10 é crucial para a melhor compreensão da interação entre o fluxo de ar na laringe, tecido de prega vocal e a resultante das forças e pressões11,12. Outro aspecto da vibração da prega vocal que é escondido do habitual vista superior é a profundidade vertical (anteriores-craniana) do contato entre as duas pregas vocais. A profundidade vertical de contato está relacionada com a espessura vertical das pregas vocais, que é um potencial indicador de registo vocal usado em canto ("peito" vs "falsetto" registo)13,14.
A fim de superar as deficiências das preparações convencionais laringe extirpado (completo), pode ser utilizada uma configuração chamada hemi-laringe, onde metade da laringe é removido, facilitando assim a avaliação das características vibratórias dos restantes prega vocal em três dimensões. Surpreendentemente, desde a introdução desta configuração na década de 1960 a15 e uma validação inicial do conceito em 199316, não há muitos laboratórios realizaram experimentos com esta promissora abordagem experimental17,18 ,19,20,21,22,23. Uma explicação para isso pode ser encontrada nas dificuldades da criação de uma preparação de hemi-laringe viável. Enquanto a preparação convencional extirpado (completo) laringe é bem documentada4, sem tais instruções detalhadas ainda estão disponíveis para a criação de uma configuração de hemi-laringe. É, portanto, o objetivo deste trabalho para fornecer um tutorial para estabelecer uma configuração confiável reprodutíveis hemi-laringe, complementada por resultados experimentais de espécimes de veado-vermelho.
Uma configuração de hemi-laringe compartilha muitas características com uma configuração de laringe extirpado "convencional", tais como equipamentos de medição, de alta velocidade ou outra tecnologia de imagem para documentar adequadamente as vibrações das estruturas da laringe durante a geração de som, ou adequada fornecimento de ar aquecido e umidificado. Estas considerações de configuração geral são descritas em detalhe em um capítulo do livro4 e um relatório técnico do centro nacional de voz e fala24. Reiteração destas instruções estaria além do escopo deste manuscrito. Aqui, apenas as directivas especializadas para gerar uma configuração de hemi-laringe são apresentadas.
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Protocol
Os espécimes animais analisados neste trabalho foram tratados em conformidade com as exigências do padrão éticas da Universidade Palacky em Olomouc, República Checa. Eles derivam de red deer descontroladamente vivendo em florestas, que foram caçadas pelo exército checo floresta serviço durante uma temporada de caça regular.
1. preparação da amostra Hemi-laringe
Nota: Só os espécimens correctamente preparados devem ser usados, como indicado na4 . Rápido congelamento da laringe25 imediatamente após a excisão e armazenamento a-80 ° C minimiza o potencial de degradação do tecido e alteração das propriedades biomecânicas e permite a realização dos experimentos em qualquer momento conveniente.
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Descongelação a laringe
- Inserir a laringe congelada em dois sacos de autoclave ou qualquer outros sacos de plástico com vedação impermeável. Selar os sacos e colocá-los em um banho de água aquecido a 30 ° C até a laringe é completamente descongelada. A duração necessária varia de algumas horas a mais do que um dia, dependendo do tamanho da laringe e da temperatura de congelamento.
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Limpeza da laringe
- Depois que a laringe é descongelada, removê-lo do saco e limpe-a completamente com solução salina (0,9% NaCl).
- Remova cuidadosamente o tecido supérfluo como aplicável (músculos do pescoço ou seja, externo, osso hioide, etc.) sem danificar as principais estruturas da laringe e encurtar a traqueia de um comprimento adequado para a montagem da laringe, um tubo de alimentação de ar (geralmente ca. 4-5 cm).
- Verifique se o tecido laríngeo para potenciais anomalias de tecido, tais como feridas, deformações orgânicas ou rachaduras potencialmente ocorrendo desde o processo de congelamento, o que poderia fazer com que a laringe inadequado para o experimento.
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Exposição de cartilagens tireoide e cricoide
- Remova partes do tecido do músculo laríngeo externo ao redor da cartilagem tireoide e cricoide, usando um bisturi, expondo assim as cartilagens em preparação para o corte médio sagital, criando a hemi-laringe. Nesta fase de preparação é retratada na figura 1A e 1B.
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Corte médio-sagital através da cartilagem tireoide
- Faça um corte vertical inicial através da parte anterior da cartilagem tireoide.
- Coloque cuidadosamente o corte um pouco mais para o lado que está prestes a ser removido, para não danificar a prega vocal que precisa permanecer preservada. Se possível, use um bisturi para cortar. Se a cartilagem é ossificada, use uma pequena serra.
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Corte a cartilagem cricoide
- Levar o corte verticalmente (inferiormente) de entre as cartilagens aritenoide e, em seguida, através da cartilagem cricoide para um nível de aproximadamente horizontal do entalhe da tireoide inferior.
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Remoção de uma prega vocal, criando uma incisão em forma de L na laringe
- Faça uma horizontal corte começando da extremidade inferior do corte vertical feito anteriormente na cartilagem cricoide e levar o novo corte para a ranhura inferior da tireoide. Anteriormente, dobre o lado da laringe que vai ser removido.
- Fazer um vertical cortar o tecido mole no lado interno da cartilagem tireoide - cuidado quando liderava o corte entre o anexo anterior das pregas vocais para a cartilagem tireoide, evitando assim danos a prega vocal.
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Refinamento do corte através da cartilagem tireoide
- Uso um bisturi, uma serra ou um arquivo, a fim de aplicar um corte reto precisamente na cartilagem tireoide e obter como perto possível para a parte anterior da prega vocal previamente inspecionada.
- Remover também uma pequena parte da cartilagem tireoide posterior, a fim de criar espaço para inserir o pino para adducting a aritenoide a cartilagem e, assim, o vocal dobram (veja abaixo). Nesta fase de preparação é retratada na Figura 1 e 1 D.
Nota: Dependendo da questão de investigação, exposição completa da prega vocal toda pode ser necessária para permitir sua visibilidade de cima. Nesse caso, devem ser removidas as estruturas acima da prega vocal (verdadeira) (ou seja, a ventricular ou vestibular dobra, conforme aplicável, tendo em conta a anatomia da amostra). Em algumas amostras de tecido mole interno da laringe acima das pregas vocais pode perder sua conexão com a cartilagem tireoide e interfere com a prega vocal durante a vibração, potencialmente causando espúrios padrões oscilatórios (principalmente irregular). Nesse caso a remoção cuidadosa de que o tecido é inevitável.
Figura 1 : Montagem e preparação de Hemi-laringe. (A) e (B) limpo espécime de laringe, vista medial e posterior, antes da remoção da prega vocal esquerda; (C) e (D) preparado hemi-laringe com incisão em forma de L (esquerda prega vocal removida), medial e posterior exibição. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
2. experiência Hemi-laringe
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Instalação de Hemi-laríngeo
- Use um tubo de alimentação de ar que fornece ar aquecido e umidificado para a laringe.
- Construção de dois dispostas perpendicularmente placas transparentes como uma substituição para partes da laringe removidas.
- Uso de pinos 4 para aumentar a estabilidade da laringe e criando uma configuração adequada de laringe pre-phonatory por adducting a prega vocal restante para a placa de vidro vertical (ver Fig. 2A).
Nota: Teoricamente, as pregas vocais podem também ser aduzidas por suturas e pesos em um sistema de polia-alavanca 26 . No entanto, essa abordagem, para melhor conhecimento desses autores, ainda não foi tentada por uma preparação de hemilarynx.
Figura 2 : Instalação de Hemi-laringe. (A) estruturas de apoio: tubo de alimentação, arranjo de placa de vidro em forma de L, pontas de adução de ar. (B) montado preparação hemi-laringe com pinos de adução. (C) e (D) close-ups de hemi-laringe-preparação, visto do lado e da parte superior, respectivamente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Montagem a hemi-laringe
- Cobrir o tubo de alimentação de ar com fixador de dentadura creme e montar a laringe usando a parte restante de sua traqueia. O creme fixador funciona como um adesivo e fecha potenciais lacunas, criando assim um selo hermético.
- Aperte a traqueia com uma cinta ou um grampo de aperto de plástico.
- Também cobrir as bordas do corte através da cartilagem tireoide com o fixador creme, evitando espalhar creme fixador sobre a prega vocal ou tecidos moles internos da laringe.
- Anexe as placas transparentes.
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Estabilização da cartilagem tireoide, adução da prega vocal usando pinos
- Use os pinos para aduto a prega vocal à placa e estabilizar a cartilagem tireoide.
- Depois fixou-se o creme fixador, aplica o fluxo de ar a fim de estabelecer a oscilação da prega vocal e verificar possíveis vazamentos entre a hemi-laringe e as placas de vidro.
- Sele as lacunas eventualmente ocorrendo, adicionando mais creme fixador.
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Representative Results
Ilustrações da preparação hemi-laringe e sua montagem do tubo de fornecimento de ar, como referenciado na seção anterior, são apresentadas na Figura 1 e Figura 2, respectivamente.
Documentação da vibração da prega vocal de dois ângulos de câmera
Induzida pelo fluxo de ar auto-sustentável oscilação da prega vocal hemi-laringe foi documentada de cima e do lado com dois sincronizados, câmeras de vídeo de alta velocidade (HSV) operadas a 6.000 quadros/s, complementado por tempo-síncrono gravações do acústico e electroglottographic (veja abaixo) dados de amostragem de 44,1 kHz. Mais informações sobre a configuração de aquisição de dados incluindo uma lista dos equipamentos utilizados podem ser encontradas em publicações anteriores por este grupo de autores 27,28. Imagens destas gravações de HSV é mostrada no que o acompanha vídeo. Ainda imagens, extraídas em momentos representativos dentro do ciclo vibratório, são mostradas na Figura 3. A vista superior (metade superior de cada painel) mostra movimento prega vocal medio-lateral, indicando uma glote aberta na Figura 3A, permitindo o fluxo de ar glotal, enquanto na Figura 3B-D a glote está fechada (a prega vocal é em contato completo com a placa de vidro vertical), assim, prender o ar glotal fluir. A vista lateral (metade inferior de cada painel) na Figura 3B-D sugere um grau variável de contato da prega vocal contra a placa de vidro, bem como uma geometria variável e localização vertical de que o contato.
Figura 3 : Vibração de prega vocal Hemi-laringe. (A-D) Imagens de imagens de vídeo de alta velocidade do topo (metade superior de cada painel) e as câmeras de visão lateral (metade de cada painel inferior), extraído em representante pontos dentro do ciclo vibratório. Observe a ausência da prega vocal contato no (A), e o (ambos na área, forma e posição) variando vocal fold contato (B-D). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Análise de movimento glotal kymographic
Análise quantitativa de movimento glotal é ilustrado na Figura 4. A glote é a variável de abertura entre a (vibração) pregas vocais29, criado por seus desvios durante a oscilação auto-sustentado. Análise do estado da arte da vista superior filmagens HSV permite rastrear os desvios laterais de pregas vocais30,31. A preparação de hemi-laringe descrita aqui adiciona a possibilidade de também avaliar os aspectos (anteriores craniana) verticais da vibração da prega vocal.
Figura 4 : Análise de movimento glotal kymographic.
(A) e (B) vídeo stills mostrando vistas superiores e laterais da laringe-hemi, tirado de gravações de vídeo de alta velocidade do (HSV) em 6.000 quadros/s. As linhas verticais amarelas indicam a posição da linha de varredura de kymographic para os kymograms mostrado em painéis C e E para a vista superior e painéis D e F para a vista lateral. (C) e kymograms (D) Digital extraídos as filmagens HSV de topo e a vista lateral, respectivamente. (E) o deslocamento lateral da prega vocal, variáveis no tempo extraído do kymogram e rastreados com uma linha (traços curtos). (F) os desvios de variáveis no tempo das bordas inferiores e superiores da prega vocal, avaliados a partir do kymogram e rastreados com um tracejado e uma linha pontilhada, respectivamente. (G) Descrição sinóptica das estruturas glotais variáveis no tempo: deflexão de prega vocal Lateral (violet "top", pálido) e deflexão vertical do superior ("sup. de lado", vermelho escuro) e inferior ("lado inf", verde-escuro) vocal dobre bordas extraídas os kymograms mostrados nos painéis E e F. velocidades de movimento (H) derivadas dos dados de deslocamento glotal estrutura mostrados no painel G. (eu) e (J) reconstrução de movimento glotal derivado a partir dos dados de deslocamento do superior e margens inferior prega vocal mostradas no painel G. As setas indicam a direcção do movimento rotacional. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Dois kymograms Digitas foram gerados do superior ou lateral Vista dados HSV (figuras 4 e 4 D). Em um kymogram digital (DKG)32,33,34,35, os dados de pixel de uma única linha (normalmente no ponto de prega vocal máxima amplitude vibratória), tirado de um número de consecutivos de alta velocidade quadros de vídeo, são concatenados para formar um eixo temporal na abcissa. O deslocamento variáveis no tempo das estruturas cobertas pela linha de varredura DKG é visível na ordenada. No exemplo mostrado na Figura 4-F, o DKG digitalizar posições de topo de linha e vista lateral foram selecionados pela metade ao longo da dimensão (ventro-dorsal) antero-posterior da prega vocal, utilizando a abordagem descrita por Hampala et al., EQ. 127.
Os desvios laterais e anteriores-craniana da glote, delineado pelas bordas inferiores e superiores de prega vocal, foram rastreadas dentro dos dados DKG (figuras 4E e 4F) e expressos em unidades métricas, baseadas na informação de calibração e taxa do frame de vídeo incorporada em os vídeos (Figura 4 e H). Uma reconstrução do bidimensional movimento glotal (lateral e vertical) no meio da prega vocal (ou seja, o lugar da máxima amplitude vibratória) ao longo de três ciclos completos de glotais é mostrado na Figura 4E e F. Durante a maioria do ciclo glotal, a prega vocal estava em contacto com a placa de vidro (representando o fechamento glotal), mas com profundidade variando de contato. Durante a fase aberta (i. e., quando a prega vocal não está em contacto com a placa de vidro), os traços do vocal superior e o inferior dobram fusível de borda e eles exibem um padrão complexo movimento cíclico, em parcial acordo com resultados de outros estudos 5 , 20 , 36 , 37 (o padrão de movimento encontrado nos seres humanos tende a ser mais elíptica do que o espécime de red deer investigado aqui). Curiosamente, o deslocamento vertical atingiu uma amplitude vibratória de aproximadamente 10 mm, ou seja, quase uma ordem de magnitude maior do que o que foi encontrado em seres humanos.
Área de contato de avaliação da prega vocal
Electroglottography (ovo)38 é um método não invasivo utilizado para medir as mudanças na área de contato de prega vocal relativo (VFCA) durante a fonação. De fraca intensidade, corrente de alta frequência é passada entre dois eletrodos colocados ao nível da prega vocal em cada lado da laringe. As variações de admissão resultante da prega vocal (de) contactar durante a produção de som da laringe são em grande parte proporcionais a prega vocal relativa tempo-variando entre em contato com a área39. O sinal do ovo é considerado um correlato fisiológico confiável da vibração da prega vocal, refletindo a frequência fundamental e o regime oscilatório (irregular ou periódico, incluindo bifurcações). Apesar de sua ampla aplicação, a possível relação direta entre o VFCA e a forma de onda do ovo, até recentemente, só foi testada em um único estudo17, sugerindo uma relação aproximadamente linear entre VFCA e a magnitude do sinal de ovo. No entanto, a vibração da prega vocal induzida pelo fluxo não foi investigada nesse estudo. Portanto, uma rigorosa avaliação empírica de ovo como uma medida de VFCA relativo sob condições fisiológicas, portanto, ainda era necessário.
Abordando esse assunto, este grupo de autores investigou recentemente três larynges de veado vermelho em uma preparação de hemi-laringe extirpado utilizando uma condução de placa de vidro27. O tempo de contato variando entre a prega vocal e a placa de vidro foi monitorado por gravações de vídeo de alta velocidade, feitas no plano sagital em 6000 fps, sincronizados com o sinal de ovo com uma precisão de ± 0.167 MS. representante resulta de que estudo são mostrados na Figura 5, indicando uma média de boa concordância entre o sinal de ovo e VFCA – ver referência27 para detalhes).
Figura 5 : Comparação da área de contato de prega vocal (VFCA) e electroglottographic (ovo) forma de onda. (A-D) Vídeo fotos do dados de vídeo de alta velocidade, mostrando a visão lateral de uma veado vermelho hemi-laringe em quatro instantes dentro de um ciclo glotal. A área de contato manualmente avaliados prega vocal (ou seja, a área onde a prega vocal estava em contacto com a placa de vidro vertical na configuração da hemi-laringe) é sobreposta em ciano. (E) a comparação de dados normalizados de ovo e VFCA para a fase de contato de prega vocal de um ciclo glotal. Os dados VFCA que resultou da avaliação vocal dobram a área de contato (contada em pixels) ao longo do ciclo glotal. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
A preparação de hemi-laringe compartilha as vantagens da instalação do "convencional" laringe extirpado (completo): em tal abordagem experimental, físicas e fisiológicas condições de contorno e parâmetros (como pressão subglottal ou alongamento de prega vocal) podem ser controlado razoavelmente bem. O comportamento do hemilarynx é homólogo para que de uma laringe completa com um perfeito lateral simetria, com a exceção que magnitudes de alguns parâmetros (ex., taxa de fluxo de ar, pressão sonora) são reduzidos em cerca de 50%, no entanto, sendo ainda dentro intervalos realista16. A principal desvantagem da abordagem completa laringe extirpado, i. e., a falta de visibilidade da superfície da prega vocal ao longo da dimensão (anteriores-craniana) superior-inferior, é superar na configuração da hemi-laringe, fornecendo uma vista lateral da vibração vocal Dobre. A configuração de hemi-laringe assim permite avaliação do movimento de prega vocal em várias dimensões, que é crucial ao tentar compreender os detalhes mais finos do mecanismo de geração de som biofísicos em seres humanos e mamíferos não-humanos.
Aqui, vários aplicativos exemplares da instalação do hemi-laringe foram demonstrados. A documentação da vibração da prega vocal de dois ângulos de câmera permite a análise de dados mais qualitativos e quantitativos. A análise de kymographic glotal movimento na direção vertical, recém introduzida neste trabalho, permite a reconstrução das variações geométricas temporais da glote ao longo de uma posição selecionada no eixo antero-posterior (dorso-ventral) glotal. Quando repetir esta análise para vários pontos equidistantes espaçados ao longo do eixo glotal, o movimento glotal inteiro poderia ser reconstruído. Observe que essa abordagem fornece comparável mas não idênticos resultados, em comparação com avaliação da prega vocal movimento pela marcação e acompanhamento individual "fleshpoints" no tecido da prega vocal (também em pontos não formando a glote), por exemplo, com microsuturas20 ou carboneto de silício partículas5,40. Um conhecimento preciso sobre a geometria glotal em três dimensões, variáveis no tempo é crucial para investigar mais detalhes sobre o fluxo de ar glotal e sua interação com o tecido vibração laríngea. Por exemplo, modelos computacionais do vocal auto-sustentável dobram a vibração pode ser melhorada como dados mais empíricos sobre o ponto de separação do jato do fluxo de ar médio 41,42,43,44, 45,46,,47,48 se tornam disponíveis.
Conforme ilustrado na Figura 5, a preparação de hemi-laringe permite a avaliação da área de contato de prega vocal (VFCA) durante a vibração da prega vocal auto-sustentado. Por um, conhecimento da magnitude variáveis no tempo relativo de VFCA é útil para validar os resultados de medições electroglottographic27, como o ovo é um método amplamente utilizado para avaliação não invasiva do vocal fold vibração em vivo. Além disso, a medição da sua variação ao longo do tempo e a geometria exata do VFCA pode vir a ser crucial para compreender melhor a noção de prega vocal contato profundidade 49 e sua potencial relação com a velocidade da onda da mucosa chamada50 , 51 , 52 , 53. lá, uma onda viajante orientado a fluxo de ar ocorre dentro da camada de cobertura de superfície do tecido a prega vocal. Esta onda move inicialmente junto com o fluxo de ar glotal trans do inferior para o superior vocal dobre a borda, e então ele propaga lateralmente através da superfície superior prega vocal uma vez cada ciclo oscilatório54.
Apesar de tudo, a abordagem de hemi-laringe é constituinte, potente e não muito usado atualmente disponível arsenal de métodos empíricos para a ciência básica de voz. Aqui, um tutorial para a criação de uma preparação de hemi-laringe é apresentado, e algumas potenciais aplicações futuras são discutidas. As dada instruções podem ajudar a melhorar a repetibilidade de experimentos em laboratórios diferentes, fornecendo, assim, os cientistas de voz com potencial para entender melhor a biomecânica da produção da voz.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado por uma concessão de APART da Academia Austríaca de Ciências (CTH), a agência de tecnologia da República Checa projeto n. TA04010877 (CTH, VH e JGS), e a Fundação de ciência Checa (GACR) projeto não GA16-01246S (para JGS). Agradecemos a W. Tecumseh Fitch para sua sugestão de usar creme fixador de dentadura e Ing. P. Liska do serviço de floresta de exército Checa por sua ajuda na aquisição de larynges o veado extirpado.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical blades | Surgeon | Jai Surgical Ltd., New Delhi, India | |
| Saw | Hand saw (Lux, 150 mm length) | Lux, Wermelskirchen, Germany | |
| Thermometer | Testo 922 | Testo Ltd., Hampshire, UK | K-type Probe, Operating temperature -20 to +50 °C |
| Autoclave bags | Autoclave bags | vwr.com, VWR International s.r.o., Stribrna Skalice, Czech republic | |
| Conductive glass plates | Custom made | UPOL - Joint laboratory of Optics Trida 17. listopadu 50A, 772 07 Olomouc, the Czech Rep. |
|
| Fixative cream | Denture fixative cream | Blend-a-dent Natural | |
| Prongs and fastening system | Customized Kanya Al eloxed profiles | Distributor: VISIMPEX a.s.. Seifertova 33, 750 02 Prerov, the Czech Rep.; | Combination of Kanya RVS and PVS fastening systems (http://www.kanya.cz/) + custom made prongs |
| Mounting tube | Custom made | UPOL - Joint laboratory of Optics, Trida 17. listopadu 50A, 772 07 Olomouc, the Czech Rep. |
|
| LED Light | Verbatim 52204 LED Lamp | Mitsubishi Chemical Holdings Corporation, Tokyo, Japan | |
| Camera | Canon EOS1100D | Canon Inc. | 18-55 mm lens |
| Airpump | Resun LP100 | Resun | |
| Strobe light | ELMED Helio-Strob micro2 | ELMED Dr. Ing. Mense GmbH, Heiligenhaus, Germany | |
| Humidifier | Custom made | Voice Research Lab, Dept. Biophysics, Faculty of Sciences, Palacky University Olomouc, Czech republic | |
| Subglottic tract | Custom made adjustable subglottic tract | Voice Research Lab, Dept. Biophysics, Faculty of Sciences, Palacky University Olomouc, Czech republic | Hampala, V., Svec, Jan, Schovanek, P., and Mandat, D. Uzitny vzor c. 25585: Model subglotickeho traktu. [Utility model no. 25585: Model of subglottal tract] (In Czech) Soukup, P. 2013-27834(CZ 25505 U1), 1-7. 24-6-2013. Praha, Urad prumysloveho vlastnictvi |
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