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Methodenartikel

Errichtung eines klinischen Biorepositorys

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DOI:

10.3791/55583

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29. Mai 2017

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Kutane Tumoren werden oft nach Mohs mikrographischen Chirurgie verworfen. Hier wird ein Protokoll beschrieben, das es dem klinischen Hilfspersonal ermöglicht, kutane Tumor- ( zB Plattenepithelkarzinom-, Basalzellkarzinom- und Melanom-) Proben für nachgeschaltete Laboranwendungen effektiv zu verarbeiten und zu speichern, ohne die klinischen Operationen zu beeinträchtigen.

Zusammenfassung

Die Inzidenz von Hautkrebs ( z. B. Plattenepithelkarzinom, Basalzellkarzinom und Melanom) hat in den vergangenen Jahren zugenommen. Es wird erwartet, dass es eine parallele Nachfrage nach kutanen Tumorproben für biomedizinische Forschungsstudien gibt. Die Verfügbarkeit der Gewebe ist jedoch aufgrund der Kosten für die Etablierung eines Biorepositorys und des Mangels an Protokollen, die für die Erlangung von klinischen Proben zur Verfügung stehen, die die klinischen Operationen nicht beeinträchtigen, begrenzt. Es wurde ein Protokoll erstellt, um kutane Tumor und assoziierte Blut- und Speichelproben zu sammeln und zu verarbeiten, die minimale Auswirkungen auf routinemäßige klinische Verfahren am Tag einer Mohs-Chirurgie haben. Tumorproben werden gesammelt und verarbeitet von Patienten, die sich ihrer ersten Schicht der Mohs-Chirurgie für biopsie-bewährte Hautmalignitäten durch den Mohs-Histotechnologen unterziehen. Angrenzendes normales Gewebe wird zum Zeitpunkt des chirurgischen Verschlusses gesammelt. Zusätzliche Proben, die gesammelt werden können, sind Vollblut und bukkale Tupfer. Durch die Verwendung von Gewebeproben, die normalerweise verworfen werden, wurde ein Biorepository erzeugt, das mehrere wesentliche Vorteile bietet, indem es in der Klinik gegenüber der Laborumgebung basiert. Dazu gehören eine breite Palette von gesammelten Proben; Zugang zu erkannten Patientenakten, einschließlich Pathologieberichten; Und, für den typischen Spender, Zugang zu zusätzlichen Proben bei Folgebesuchen.

Einleitung

Krebs- und Biomarkerforschung beruht auf einer Versorgung mit hochwertigen menschlichen Gewebeproben, und begrenztes Angebot hat die Forschung behindert 1 , 2 . Viele dermatologische Studien sind durch die unzureichende Versorgung, die variable Qualität und die Kosten im Zusammenhang mit der Verwendung von menschlichem Gewebe begrenzt. Die Kosten für die Gründung einer großen, dedizierten Biobank wurde auf etwa zwei Millionen Dollar 3 geschätzt, und diese Kosten legen die Verwendung von menschlichem Gewebe aus der Reichweite vieler Forscher. Darüber hinaus stellt der Prozess der Erzeug....

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Protokoll

Alle Experimente an menschlichen Gewebeproben wurden von Western IRB (WIRB-Protokoll Nr. 20142461) genehmigt. Das einzige Kriterium für die Sammlung von Geweben für diese Verfahren ist eine Biopsie-bewährte Diagnose von SCC. Es wurden keine Ausschlusskriterien im ursprünglichen IRB-Protokoll skizziert, aber Proben von Patienten mit bekannter blutübertragbarer Krankheit wurden nicht verwendet. Informierte Zustimmung wurde vor der Sammlung von Hautgewebe, Blut und Speichel erhalten. Midwestern Institutional Review Board genehmigte die Validierungsarbeit mit klinikbasierten Biorepository-Proben an der Midwestern University (AZ # 807).

1. Kutan....

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Ergebnisse

Tumor und ANT wurden erfolgreich in der Proteinisolation eingesetzt und durch Western Blotting getestet. Wie in Abbildung 3 gezeigt , können kutane Plattenepithelkarzinommarker (Muc1 14 , FHL-1 15 und p40 16 , 17 ) bei Patientenproben nachgewiesen und in unserem klinikbasierten Biorepository gespeichert werden.

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Diskussion

Nach dem Wissen des Autors ist dieses Protokoll das erste seiner Art, das sich auf die klinische Beschaffung von Hautgewebeproben sowohl in einem kostengünstigen als auch in einem schnellen Ansatz konzentriert. Patienten, die sich einer Mohs-Mikrochirurgie unterziehen, sind typischerweise während bestimmter Zeitblöcke geplant, und die Sammlung ist auf diese Zeiträume beschränkt. Die Probenahme beinhaltet die Anstrengung des medizinischen Assistenten, der an der Patientenversorgung beteiligt ist, der Mohs-Histotechnologe.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch Mittel von der Midwestern University College of Health Sciences Research Facilitation Grant, verliehen an EEH und Midwestern University Office of Research und Sponsored Programme Intramural Grant, an KJL vergeben unterstützt. Zusätzliche Unterstützung wurde von angeschlossenen Laboratorien und angeschlossenen Dermatologie zur Verfügung gestellt. Wir danken Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel und Ali Zaidi für ihre technische Unterstützung.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
BD Vacutainer Kunststoff-Blutentnahmeröhrchen mit K3EDTAThermoFisher Scientific02-685-2B
Elektronenmikroskopie Wissenschaft DoppelschneidklingenThermoFisher Scientific50-949-411
Gebogene Allzweckzange mit mittlerem PunktThermoFisher Scientific16-100-110
Premium MikrozentrifugenröhrchenThermoFisher Scientific05-408-138
Lonza Walkersville KGM Keratinozyten-MediumThermoFisher ScientificNC9791321
Elektronenmikroskopie Wissenschaften Gewebe TEK OCT CompoundThermoFisher Scientific50-363-579
Leica CM1950 KryostatLeica Biosystems14047743909
Frosted Mikroskop ObjektträgerThermoFisher Scientific12-550-343
Shandon Rapid-Chrom H& E Färbekit für den SchnellschliffThermoFisher Scientific99-900-01
Nalgene Kryoröhrchen für die LangzeitlagerungThermoFisher Scientific03-337-7X
Falcon 15 mL Konische ZentrifugenröhrchenThermoFisher Scientific14-959-53A
Boca Scientific BuccalT-Swab ThermoFisher ScientificNC9679349
Cell Signaling Technology 10x RIPA PufferThermoFisher Scientific50-195-822
Halt Protease und Phosphatase Inhibitor CocktailThermoFisher ScientificPI78443
Eppendorf 5424R MikrozentrifugeThermoFisher Scientific05-401-203
Pellet Morter Akku-HomogenisatorThermoFisher Scientific12-141-3
RNAse Free Pellet StößelThermoFisher Scientific121-141-364
Forma SteriCycle CO2 InkubatorThermoFisher Scientific13-998-089
HyClone Fötales RinderserumThermoFisher ScientificSH30071.02
Gibco Advanced DMEM/F-12ThermoFisher Scientific12-634-028
Gibco Penicillin-StreptomycinThermoFisher Scientific15140148
Gibco 1 M HepesThermoFisher Scientific15-630-130
Nunc Zellkultur 35 mm mit VentThermoFisher Scientific1256591
monoklonaler Anti-CFH-Antikörperklon OX-24AbnovaMAB12583
Anti-p40 (p63 delta) AntikörperAbnovaABX-144A
Anti MUC-1 AntikörperSanta Cruz Biotechsc-7313
Anti-Schnecke + Schnecke (phospho S246)Abcam AbcamAb63568
Ziege Anti-Kaninchen IgG, Alexa Fluor 488InvitrogenA-11034
Alexa Fluor 568 PhallodinMolekulare SondenA12380
ProLong Gold Eindeckmittel mit DAPIMolekularsonden P36941
Zeiss Axio Imager Z1 Mikroskop mit Axiocam KameraZeiss4300009901
Olympus IX51 Phasenkontrast mit DP72 KameraOlympusIX511F3

Referenzen

  1. Baker, M. Biorepositories: Building better biobanks. Nature. 486, 141-146 (2012).
  2. Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15<....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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