Ein Multi-Loch Cryovial Eliminiert Einfrieren Artefakte, wenn Muskelgewebe wird in flüssigem Stickstoff direkt tauchend

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren Muskelgewebe einzufrieren, indem sie direkt in flüssigen Stickstoff tauchen. Dieses Protokoll zeigt auch eine neue Cryovial, die den „Decke-Effekt“ von Stickstoffgas, wenn flüssiger Stickstoff in Kontakt mit der Gewebeoberfläche einer Probe zu vermeiden.

Zusammenfassung

Studien über die Skelettmuskelphysiologie stehen vor der technischen Herausforderung, in geeigneter Weise die Proben Verarbeitungsabschnitte mit deutlich sichtbaren cytoplasmatischen Kompartimenten zu erhalten. Eine weitere Hürde ist die enge Apposition von Muskelfasern zu den umliegenden Geweben. Da der Prozess der Gewebefixierung und Paraffineinbettung der Schrumpfung von Muskelfasern führt, Gefrieren ist ein optimales Mittel zum Härten Muskelgewebe zur Sektionierung. Allerdings ist ein häufig auftretendes Problem, die Bildung von Eiskristallen, tritt während der Herstellung von Gefrierschnitten aufgrund des hohen Wassergehalt des Muskels. Das Protokoll hier vorgestellte erste beschreibt eine einfache und effiziente Methode zur Muskelgewebe richtig Einfrieren, indem sie in flüssigem Stickstoff eingetaucht wird. Das Problem bei der Verwendung von flüssigem Stickstoff allein ist, dass es die Bildung einer Stickstoffgasbarriere bewirkt neben das Gewebe, das als Isolator wirkt und hemmt die Kühlung der Gewebe. Um dies zu vermeiden „Dampfdecke“ -Effekt, ein new Kryoröhrchen wurde entwickelt, um die Geschwindigkeit der Flüssigkeitsströmung um die Gewebeoberfläche zu erhöhen. Dies wurde durch Stanzen eines insgesamt 14 Einlassöffnungen in der Wand des Fläschchens erreicht. Nach Blasendynamik, eine höhere Rate des Flüssigkeitsstrom führt zu kleineren Blasen und weniger Chancen eine Gasbarriere zu bilden. Wenn flüssiger Stickstoff die Kryoröhrchen durch die Einlasslöcher strömt, ist die Strömungsgeschwindigkeit um das Gewebe schnell genug, um die Gasbarriere zu beseitigen. Im Vergleich zu dem Verfahren von Muskelgewebe Einfrieren unter Verwendung von vorgekühltes Isopentan, ist dieses Protokoll einfacher und effizienter und kann verwendet werden, Muskel in einem Durchsatz Weise einzufrieren. Darüber hinaus ist dieses Verfahren optimal für Institutionen, die keinen Zugang zu Isopentan haben, die bei Raumtemperatur extrem leicht entflammbar ist.

Einleitung

Der Skelettmuskel ist das wertvollste Komponente eines fleischproduzierenden Tieres aus der Ernährungs- und verarbeitungstechnischer Sicht. In der Fleischindustrie gibt es zwei besonders kritische Aspekte: die Effizienz des Muskelwachstums und der Qualität des resultierenden Fleisch. Als Hauptbestandteil des Muskels, sind Muskelfasern zu Wachstum und frische Fleischqualität ¹ bei Tieren direkt in Zusammenhang steht. Zum Beispiel ist die Gesamtanzahl von Fasern (TNF) und die Querschnittsfläche der Fasern (CSAF) meist Muskelmasse und Fleischqualität bestimmen; auch, Fasertyp Zusammensetzung (FTC) wirkt sich stark auf frische Fleischqualität

Protokoll

Die aktuelle Methode wurde entwickelt und validiert zu ernten und lagert mehr als 1.000 Muskelproben zur histologischen Färbung in unserem Labor. Alle Verfahren beteiligen Tierpflege und Verwendung folgten die vom Ministerium für Landwirtschaft von China festgelegten Richtlinien.

1. Ausrüstung für die Probenentnahme

1. Beschriften Sie die Probe Identität auf jeder kryogenen Fläschchen.
   Hinweis: Die Kryo - Fläschchen speziell frische Gewebeproben für das Kryoschnittes Verfahren (Abbildung 1A) einzufrieren ausgelegt ist. Die Fläschchen werden aus Polypropylen in einer Form Fabrik (1C) gebildet.
2. Erhalten....

Ergebnisse

Die Kryoröhrchen Illustration und die gemeinsamen für Laborgeräte Muskeln während der Herstellung von Gefrierschnitten Einfrieren sind in Abbildung 1 dargestellt. Die Kryoröhrchen sind aus Polypropylen in einer Form Fabrik. Jedes Fläschchen hat insgesamt 14 Einlasslöcher: Ein an der Kappe ist; eine andere ist an der Unterseite; und die verbleibenden 12 bilden vier parallele Leitungen, die jeweils mit vier Bohrungen um 90 ° zueinander. Diese Einlasslöcher können die Ström.......

Diskussion

Hier beschreiben wir ein neues, Mehrloch Kryoröhrchen zum Einfrieren und Speicher von Muskelgewebe zu histologischer Beurteilung der Muskelfunktion führen. Der kritische Schritt in diesem modifizierten Protokoll ist, dass die Probe in den Mehrloch-Kryoröhrchen direkt in flüssigem Stickstoff eingetaucht ist. Unser Wissen ist dies die einfachste und rapidest Art und Weise ausgezeichnete gefrorene Proben für Muskel Kryoschneiden unter den bestehenden Gefrierverfahren zu erhalten (siehe die repräsentativen Ergebnisse).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Kryostat Mikrotom	Leica	Leica CM1950
Digitalmikroskop	Nikon	Nikon DS-U3
Kryogene Phiole   Kunststofffolie			, von uns selbst entwickelt
Flüssiger Stickstoff
Skalpell			benutzt
10 cm Pinzette			Häufig verwendet
25 cm Pinzette			Häufig verwendet
Sicherheitsglas			verwendet
Gefrierhandschuhe			Gewöhnlich verwendet

Häufig Häufig